免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白D(IgD)的纯化
实验步骤基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)PBSSorvall离心机， SS-34型 转 子（或类似转子）透析袋26 mmX900 mm 层析柱，填有适当凝 胶 过 滤（SE) 树 脂（CPI 附 录 31)1.单 元 L 5 离心和去除IgG中脂类物质的方法纯化腹水上清，若 是 M Ab上 清 ，室温或 4℃， 15 000g离心30min，去除细胞碎片，保留上清。2.将澄清的腹水或MAb上清转至透析袋中，在 4°C 下用≥1 0 倍样品体积的蒸镏水透析24 h，在室温或4°C下将透析好的溶液以 15 000〜20 OOOg 离 心 lh ，弃去上清。3.将填有 SE 树 ......阅读全文
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的纯化
实验步骤基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的纯化实验
实验步骤备 选 方 案 1 硫 酸 铵 沉 淀 法 纯 化 IgM此法适用于多数 IgM 抗体，尤其是一些在水中不能形成沉淀的 IgM 抗体。附 加 材 料（其 他 材 料 见 基 本 方 案 1 )饱和硫酸铵（SAS)硫酸铵结晶（CAS)硼酸缓冲液，可选备 选 方 案 2 甘 露 聚 糖 结 合
免－疫－球－蛋－白－融－合－蛋－白－的－构－建
实验步骤 基 本 方 案 1 免疫球蛋白融合蛋白的构建材 料编码靶基因的 D N A展开
免－疫－球－蛋－白－G－(IgG)－片－段－的－水－解
一个新的抗体需要片段化的时候往往要进行摸索性的试验。选择反应时间的时候宁可保留部分抗体不被完全降解，这样可以避免蛋白酶过分裂解后导致抗体结合位点的破坏 。实验步骤木 瓜 蛋 白 酶 水 解 IgG 成 Fab 片段摸索性试验此 法 适 用 于 小 鼠（任何亚类）、大鼠、人 、山羊、绵羊、马 、鸡 、
免－疫－复－合－物－方－法－检－测－酪－氨－酸－蛋－白－激－酶
实验步骤基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 检 测以下步骤可以釆用淋巴或非淋巴细胞、原代细胞或培养的细胞系、活化或非活化的细胞。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)待检测的细胞 冰预冷的 PBS含蛋白酶抑制剂的 I X 细 胞 裂 解 液（新鲜配置并于冰上保存
蛋白质分离和分析——免－疫－印－迹－和－免－疫－检－测
实验步骤基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹材 料待分析样品标准分子质量蛋白质，预 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)转移缓冲液无粉手套Scotch-Brite 垫 片（3M ) 或类似海绵Whatman 3M M 滤纸或类
酶－联－免－疫－吸－附－实－验2
十 字 交 叉 连 续 稀 释 分 析 法 （criss-cross serial-dilution analysis) 测定试剂最适浓度实验步骤展开
抗－体－可－变－区－（－V－区）的克隆、表达和修饰
基于 PCR 的克隆方案利用了可变区中框架区和先导区的保守序列，尽管用框架区中的保守序列可合成引物，用于克隆可变区，但会引起框架区中氨基酸的改变，从而影响抗原结合。因此，用保守的疏水先导序列合成引物是比较好的方案。实验步骤基本方案 1 通 过 使 用 冗 余 引 物 克 隆 和 表 达 免 疫 球
蛋白质分离和分析——免－疫－亲－和－层－析
详细阐述利用亲和层析分离蛋白质的过程，进行蛋白质分析时，需将此规模缩小至微量离心管中进行免疫沉淀过程，对于单一的蛋白质或由相同亚基组成的蛋白质，经单向凝胶电泳后检测到单一的 蛋 白 质 条 带对荧光染色法进行了阐述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的检测。为了确定蛋白质是否是特异性抗原，可采用相对应的抗体进
白球比例偏低什么原因
1、白蛋白降低、球蛋白不变。常见的引起白蛋白偏低的原因主要有营养不良、白蛋白是由肝脏合成的，假如有肝病的话，就会使白蛋白的合成减少，另外还有可能就是有肾源性低蛋白血症，也会使白球比例偏低。 2、白蛋白不变、球蛋白的值升高。当患有肾脏疾病或自身免疫性肝炎以及类风湿性关节炎时，会使球蛋白升高，从而
白球比例偏低是什么原因
白蛋白是由肝实质性细胞合成的，肝脏受损时，白蛋白的合成、细胞内运输和释放会发生障碍，引起血清白蛋白减少。球蛋白是由机体免疫器官制造的，当体内有病毒入侵时，就会产生大量的球蛋白，消灭病毒。 白球比例偏高的原因是什么？白球比偏高可能是由白蛋白增多、球蛋白减少或者是两者都有变化，只是其中一者的变化幅
免疫复合物方法检测酪氨酸蛋白激酶
基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 检 测以下步骤可以釆用淋巴或非淋巴细胞、原代细胞或培养的细胞系、活化或非活化的细胞。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)待检测的细胞 冰预冷的 PBS含蛋白酶抑制剂的 I X 细 胞 裂 解 液（新鲜配置并于冰上保存）含蛋白
重大新进！Sicence：肾癌驱动的一种新蛋展白
在一项新的研究中，来自中国同济大学、复旦大学、美国北卡罗来纳大学、哈佛医学院、德克萨斯大学MD安德森癌症中心、范德堡大学医学中心、新加坡基因组研究所、新加坡细胞与分子生物学研究所、新加坡国立癌症中心和杜克-新加坡国立大学医学院的研究人员发现了一种针对具有一种相同遗传变异的肾癌的潜在治疗靶点。科学
T－C－R－库－的－抗－原－谱－/－免－疫－扫－描－技－术－分－析
实验步骤基 本 方 案 1 人 和 小 鼠TCR受体库多样性的免疫扫描技术分析材 料展
干细胞的鉴定实验——免－疫－电－镜－胶－体－金－标－记－技－术
实验步骤免 疫 电 镜 胶 体 金 标 记 技 术免疫电镜技术是利用抗原抗体特异性结合的原理，在细胞超微结构水平上定位、定性和定量，原位显示抗原大分子的技术。 1971 年 Faulk 等将胶体金标记抗体技术应用到电镜中，开始了免疫电镜胶体金标记技术。该技术的优点是：胶体金颗粒致密，易于辨认 ；定位
海洋生命蛋，做“中国好蛋”
禽蛋是人们日常生活中重要的营养来源，历来受到高度认可和广泛喜爱。我国也是禽蛋生产和消费的第一大国，年人均占有量连续二十多年居世界第一，但是蛋的品质长期以来却没有大幅度地提升。 近日，中国科学院海洋研究所研究员刘建国设计开发了海洋生命蛋。他把海洋生物的活性成分先通过多种生物富集积累起来，再经过禽
液相色谱仪分离纯化烟草疫霉菌激发子
采用阴离子交换层析和疏水相互作用层析从烟草疫霉菌培养基中分离出一种新的90和激发蛋白，讨论了阴离子交换色谱流动相的最佳值，建立了疏水作用色谱、硫酸铵和羟甲基氨基甲酸酯的水洗脱方式，简化了纯化步骤，降低了活性损失的风险。1。引言1988等1。首次从疫霉病菌培养基中分离出分子量为种子印记的蛋白质，命名为
球虫子孢子DE52纯化的注意事项
实验概要DE-52是一个被广泛应用的球虫子孢子纤维柱纯化体系，其纯化效率高，子孢子获得量较大。本文对纯化过程中的注意事项进行了一些总结和阐述。实验步骤1. 10％子孢子消化液(pH7.6)： 新鲜鸡胆汁 10ml 胰酶 0.75g将上述物质融于90mlPBS(pH7.6)中，过滤后，分装-2
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（一）
一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，
糖尿病人应关注蛋尿白，小“心”谨“肾”护健康
随着人口老龄化加剧和2型糖尿病患者数量的持续增长，与糖尿病相关的慢性肾脏病（CKD）发病率逐年升高，约40%的2型糖尿病患者面临发展为糖尿病肾病的风险。记者了解到，目前，我国成年CKD患者约8200万，患病率为8.2%。其中，糖尿病相关CKD是我国CKD防治的“主战场”，它不仅是我国CKD的首位住院
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——抗体夹心ELISA法检测可溶性抗原
实验步骤抗 体 夹 心 ELISA 法检测可溶性抗原该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍（图 I.1. 3)。附 加 材 料（其他材料见基本方案）特 异 性 抗 体（单 克 隆 或 多 克 隆 ）或 者 来 自 抗 血 清 、腹 水 或 杂 交 瘤 上 清 液（单
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——间－接－ELISA－法检测特异性抗体
实验步骤 该检测方法使用毫克级的纯化或半纯化抗原，能筛选抗血清和杂交瘤上清液中的特异 性 抗 体（图 1.1.1) 。 Img 纯化抗原可用于 80〜800 个微量滴定板的筛选。一、材 料显色剂：碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 蛋 白 A (Sigma 公 司），碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 蛋
包涵体蛋白溶解后的重折叠实验（三）
5. 高 分 辨 率 的 离 子 交 换 层 析蛋白质经过重折叠和过滤后，最后一步的高分辨率离子交换层析柱用于完成 下 面 5项重要工作。⑴ 浓 缩 蛋 白 质 ( 如 从 600 m L 浓 缩 到 4〜 8 m L )(2) 去除变性剂(在流穿液中）(3) 去除次要的杂质(在流穿液中，或是与
T－细－胞－中－丝－裂－原－活－化－的－蛋－白－激－酶（MAPK)－活性分析
实验步骤基 本 方 案 1 免疫复合物蛋白激酶测定此方法可用于测定 E R K 、 J N K 和 p38 M A P K 的活性，也可使用针对每个 M A P K组分的商品化抗体。然而，特定的抗体对各组分内特定的亚型会显示一定的特异性。材 料基本方案 2 固相蛋白激酶法检测 J N K 活性这种方
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（三）
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 种 常 见 的 P T M , 并 且 已 经 证 明 能 够 影 响 酶 的 活 性 、蛋 白 质 定 位 、稳 定 性 、信 号 转 导 、细 胞 黏 附 和 蛋 白 质 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 经 发 现 在 肿 瘤 恶
简述尿微量转铁蛋白的临床意义
异常结果：检测尿微量白蛋白诊断早期糖尿病肾病已被认为其结果是敏感和特异性的，可预示发生临床糖尿病肾病。而尿液Tf 检测的临床意义：是早期肾小球损伤的指标之一，主要反映肾小球滤过膜电荷选择屏障受损，尿 微 量 转 铁 蛋 白 为 中 分 子 蛋 白，M v 7 7 0 0 0 -8 1 0 0 。
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（三）
四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用，但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术，因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2)，问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常
新发现！山东莱阳发现恐龙蛋新蛋种，命名“变形蛋”
近日，一项恐龙蛋研究最新成果被刊发。通过对山东莱阳出土恐龙蛋化石的深入研究，古生物研究人员建立了一个新蛋种，并将其命名为“变形蛋”。研究人员从“变形蛋”的径切面观察，发现其内部发育大量的锥形蛋壳单元组合，它们之间有较大的间隙；中间发育柱状蛋壳单元和小孔；最外层发育壳单元的分支，形成灌木状微结构。研究