基本方案2反转录酶病毒感染初级成肌细胞
实验材料培养基中的主要成肌细胞试剂、试剂盒筛选逆转录病毒上清溴化己二甲铵仪器、耗材6孔板或60mm 有胶原涂层的组织培养板配备了微量培养板的台式离心机实验步骤......阅读全文
基本方案2-RNA-抽提和标记
试剂、试剂盒TRIzol 试剂PBS氣仿乙醇乙酸钠引物Superscript Ⅱ RNase H反转录酶10 X low-T dNTP 混合物EDTATE 缓冲液仪器、耗材RNeasy Maxi 试剂盒组织匀浆机圆底离心管圆锥底离心管水平离心机薄壁 PCR 管热循环仪荧光扫描仪实验步骤展
基本方案2-基因组-DNA-的扩增
实验材料基因组DNA试剂、试剂盒4dNTP 混合物10 X PCR 扩增缓冲液寡聚核苷酸引物Taq DNA 聚合酶矿物油筛(子)琼脂糖DNA 分子大小标准参照物仪器、耗材聚丙稀微量离心管循环变温加热器实验步骤
基本方案2-转染原代气管上皮细胞
试剂、试剂盒聚凝胺HamF-12培养基仪器、耗材原代气管上皮细胞培养皿针筒过滤器MWCO 分析膜实验步骤展
酵母实验操作方案(2)
附录一 培养基 LB: Tryptone 10g 1% Yeast Extract 5g 0.5% NaCl 5g 0.5% 【Agar】 15g 1.5%(固体培养基另加) dH2O稀释至1L,高压灭菌 YPD: Yeast Extract 10g 1%
基本方案2-使用反转录-PCR-检测染色体易位
实验材料骨髓和血样中提取的 RNA 沉淀试剂、试剂盒DEPC 水5 X 反转录缓冲液4dNTP 混合液DTTRNA 酶抑制剂反转录酶第一轮 PCR 引物组10 X PCR 扩增缓冲液MgCl2Taq DNA 聚合酶矿物油第二轮 PCR 引物组仪器、耗材水浴器材热循环仪适用PCR管实验步骤展
基本方案2-反转录酶病毒感染初级成肌细胞
实验材料培养基中的主要成肌细胞试剂、试剂盒筛选逆转录病毒上清溴化己二甲铵仪器、耗材6孔板或60mm 有胶原涂层的组织培养板配备了微量培养板的台式离心机实验步骤
基本方案2-直接-Southern-杂交检测异常扩增和甲基化实验
实验材料基因组DNA试剂、试剂盒5 X 限制性缓冲液10 X Ficoll载样缓冲液1 X TAE 缓冲液变性缓冲液转性缓冲液中性缓冲液杂交缓冲液仪器、耗材Whatman 3MM 滤纸Nytran SuPercharge Turboblotter Rapid Downward Transfer 系统
基本方案2-植入基因修正的细胞到新生的小鼠脑内
实验材料基因修正的细胞新生小鼠试剂、试剂盒乙醇抗菌素外科胶水仪器、耗材汉密尔顿注射器显微操作仪手术用具幼鼠脑图谱加热板实验步骤1.为移植开始培养基因修正的细胞,收获 80%~90% 的汇合度的细胞。手术时,当麻醉和准备动物的时候准备好悬浮细胞(支持方案)。手术期间,每 30~60 min 重悬细胞。
基本方案2-显微镜检查法、成像、用于-CGH-的图像分析
实验步骤直接的视觉观察被用于 CGH 杂交的初期评价并且能提供染色体改变的初步解释,应用装配有相应激发光源、滤片、63X 或 100X 油镜镜头的荧光显微镜观察 CGH 杂交的中期分裂相。DNA 序列拷贝数的改变决定于每一条染色体上相应红/绿荧光强度的改变。两种相关突光强度的差别能通过双通道滤片与复
基本方案2-G-显带后的染色体原位杂交实验
实验材料未封片或 Entdlan 封片 G 显带的中期细胞试剂、试剂盒二甲苯浓度梯度乙醇丙酮 甲醇固定剂2 X SSC仪器、耗材全染色体涂染探针Coplin 缸实验步骤
基本方案2-重组腺病毒通过耳外静脉注射到兔的肝脏
实验材料成年兔试剂、试剂盒乙醇重组腺病毒悬液凡士林仪器、耗材注射器实验步骤1.将成年实验兔放置于固定盒内。用浸取了温水的纱布反复擦拭使其耳内血管膨胀。也可使用 70% 的乙醇。注意其静脉血管位于耳朵外缘,动脉游走于中心。2.在 5 ml 注射器上装上 21 G 蝶形针头,然后吸入 3 ml 腺病毒悬
基本方案2-PCR-产物限制性分析线粒体-DNA-点突变的筛查
实验材料粒细胞或骨骼肌基因组 DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液Taq DNA 聚合酶4dNTP 混合液正反寡核苷酸引物石蜡油琼脂糖胶10 X 限制性缓冲液BSA亚精胺限制性内切核酸酶6X 水溶性聚蔗糖凝胶加样缓冲液DNA 分子质量标记1 X TBE 缓冲液溴化二氨乙啡啶液仪器、耗材UV St
膜蛋白研究的整体解决方案2
NeXtal® CubicPhase Kit之所以能够提高膜蛋白结晶的成功率,主要原因:1.采用NeXtal CubicPhase μplate,这种结晶板修饰了monoolein (MO,用于建立脂立方相),另外这种结晶板具有非常好的光学特性,在可见光下就可以观测到膜蛋白晶体。2.采用专门的膜蛋白
蛋白质组实验全套流程方案2
聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)5101520253040506% 水2.65.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810 1.
动物实验基本技术2
第五节 实验动物的采血法实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析,故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。一、大鼠、小鼠的采血方法(一)剪尾采血:需血量很少时常用本法,如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作
动物实验基本技术2
第三节 实验动物的麻醉方法麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉,保障实验动物的安全,使动物在实验中服从操作,确保实验顺利进行。一、常用的麻醉药(一)常用局部麻醉剂:普鲁卡因,此药毒性小,见效快,常用于局部浸润麻醉,用时配成0.5%~1%;利多卡因,此药见效快,组
动物实验基本技术2
第三节 实验动物的麻醉方法 麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉,保障实验动物的安全,使动物在实验中服从操作,确保实验顺利进行。 一、常用的麻醉药 (一)常用局部麻醉剂:普鲁卡因,此药毒性小,见效快,常用于局部浸润麻醉,用时配成0.5%
动物实验基本技术2
第五节 实验动物的采血法实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析,故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。一、大鼠、小鼠的采血方法(一)剪尾采血:需血量很少时常用本法,如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作
肽质量检索实验_基本方案
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤鉴定数据库中已有序列的蛋白质的算法基于以下一些理念:(1) 肽段是由切点专一的试剂水解蛋白质产生的,通常用已知切点专一的蛋白酶。(2) 这些肽段的质量由 MALDI-MS 或 ESI-MS 精确测定。(3) 计符蛋白序列数据库中的每一序列被实验中所用水解试剂水
详述熔点仪基本故障维修方案
熔点仪基本故障维修方法:1.插入毛细管后电流表不归零该设备插入毛细管后电流表应为零,因为毛细管中的药品挡住了光路。药品熔解后,光透过玻璃毛细管到达光电池,光电池感光输出电流实现终熔显示。同时光电池输出电流使电流表从零打到满度。如一开始插入毛细管时仪器的电流表就不归零,则该设备无法使用。现将可能造成插
免疫沉淀实验——基本方案
经典的免疫沉淀是可溶性抗原与其抗体产生可见沉淀反应的血清学试验。后来发展为抗原抗体结合后,用固相化的蛋白A或蛋白G小珠等来吸附分离抗原抗体复合体,达到检测微量抗原或抗体的目的。实验材料蛋白质试剂、试剂盒裂解缓冲液稀释缓冲液SDSTrisTSA仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 表面标记或生物合成标记
定点诱变实验——基本方案
定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。实验材料DNA试剂、试剂盒TE寡核
MALDlMS实验_基本方案
实验方法原理线性 MALDI-MS:MALDI-MS质谱仪恐怕是概念上和设计上都最简单的质谱仪,分子(分析物)经 MALDI 方式离子化,离子的质荷比 (m/z)由飞行时间质分析器检测(见图 5,1) 。 测量的质量精确度与m/z有关, 25ku 以下可达到约 0.01%-0.05% 的精确度,到
强生2针疫苗方案在欧盟进入加速评估!
强生旗下杨森制药公司近日宣布,已向欧洲药品管理局(EMA)提交了2份营销授权申请(MAA),申请批准研究性埃博拉疫苗方案用于预防由扎伊尔埃博拉病毒株引起的埃博拉病毒病(EVD)。2份MAA已被平行提交,支持2针免疫方案中的每种疫苗(Ad26.ZEBOV,MVA-BN-Filo)。今年9月,EMA
方案2-反相微型层析柱的制备实验
实验材料用于质谱分析的蛋白质或多肽样品试剂、试剂盒乙腈(HPLC级)甲醇基质溶液三氟乙酸仪器、耗材平头镊子GELoader 移液吸头MALDI-MS板移液吸头Poros R1、Poros R2 或 Oligo R3 层析树脂注射器实验步骤1.将 GELoader 移液吸头的尖端压扁。图 8.32 所
基本方案3-杂交和数据提取
实验材料玻璃芯片试剂、试剂盒酵母 tRNA20 X SSC50 X Denhardt 溶液10% SDS0.06X SSC 洗脱缓冲液仪器、耗材薄壁 PCR 管热循环仪芯片杂交板水浴锅临床离心机芯片扫描仪图像分析软件实验步骤展
荧光原位杂交实验——基本方案
实验材料样品试剂、试剂盒DNA探针非同位素甲酰胺杂交混合液甲酰胺Triton X-100SSC仪器、耗材相差显微镜盖玻片水浴锅加湿盒滤光片荧光显微镜实验步骤1a. 石蜡切片或细胞的杂交:按石蜡切片或细胞的原位杂交实验的基本方案步骤1~7,对载玻片进行脱蜡、水化、 封闭和脱水处理。将标本晾干(或在干
YAC克隆的分析实验——基本方案
YAC带有天然染色体所有的功能元件,包括一个着丝粒,一个DNA复制起点,两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA,这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色体步移中每次允许更大的步移距离,同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。实验材料酵母菌试剂、试剂盒AHCYPD
基本方案1-cDNA-合成与印迹
实验材料母板试剂、试剂盒细菌细胞中的标记LB 培养基氨苄青霉素乙醇Super 肉汤培养基甘油96孔碱裂液T low E 缓冲液10 X PCR 缓冲液20 X SSC琥拍酸酐仪器、耗材96深孔板和V 形塑料细胞培养皿水平微量培养板离心96孔多位点复制针1 加仑储存袋多微孔的带层带孔的振荡器用于深孔板
离子交换层析实验——基本方案
离子交换层析(Ion Exchange Chromatography简称为IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。实验材料蛋白质试剂、试剂盒离子交换缓冲液仪器、耗材离子交换层析柱梯度混合器电导表实验步骤1.