RACE技术扩增构建全长cDNA文库
实验概要利用RACE(利用PCR技术快速扩增全长mRNA)技术构建全长cDNA文库是传统C库构建技术的改进。本实验即是利用寡核苷酸帽法，进行全长C库的构建，从而掌握RACE技术的原理与基本操作方法。实验原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子结构作为标签，用通用引物识别并配对标签序列，PCR扩增后克隆PCR产物，从而构建出全长并有正确阅读框架的C库。RACE技术最早是cDNA水平上加接头，以扩增未知5’序列。而随着技术的进展，目前RACE技术已发展到直接以mRNA为模板进行操作，这就保证了全长cDNA的克隆，为研究5’和3’非编码区及启动子提供了条件。RACE分3’RACE和5’RACE。3’RACE原理如图1。其用带olig(dt)和特异酶切位点的序列为3’引物；用特异序列为5’引物，经RT－PCR后，扩增出3’全长序列，利用特异酶切位点，插入载体。 5’RACE分两种，其一为SMART（Mechanism ......阅读全文
RACE服务
这时我们可以根据基因的一段已知序列(或一段同源序列)，利用3'-Race方法获得该基因的3'端序列，或者利用5'-Race方法得到该基因的5'端序列。服务流程:1、先由您提供背景资料，其中包括已知的DNA序列部分，RNA的情况，所扩增基因的估计长度，是否具有同源序列等
3RACE－PCR
实验概要 This technique is used to obtain the 3'end of a cDNA, it requires some sequence information internal to the mRNA under study. The
RACE－PCR简介
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA
帽子转换－RACE－实验
试剂、试剂盒 寡核苷酸引物cDNA 文库HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot-Start 聚合酶缓冲液dNTP 溶液TE反转录缓冲液RNasinSuperscript II 逆转录酶生物素标记的引物 Ptotal帽子发现接头引物poly(A)+RNA仪器、耗材 热
帽子转换－RACE－实验
试剂、试剂盒 寡核苷酸引物 cDNA 文库 HerculesHot-Start 聚合酶 HerculesHot-Start 聚合酶缓冲液 dNTP 溶液
帽子转换－RACE－实验
这里介绍的方法，是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似，使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物，在反转录的起始阶段使用的基因特异性引物（如上所述）也是可以互换的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒寡核苷酸引物cD
3’RACE－实验心得
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cD
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA
SMARTTM－5RACE－PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下，反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5‘末端时自动加上3一5个(dC)残基，退
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA
SMARTTM－5RACE－PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下，反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5‘末端时自动加上3一5 个(
5端RACE升级版
实验概要完成这个RACE需要全套反转录系统，当然选一个好的反转录酶（无RNase H），dUTP，taq酶，Uracil DNA glycosylase ，还有这几条引物： Adapter A AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN cDNA synthesis and ad
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA
RACE技术扩增构建全长cDNA文库
实验概要利用RACE(利用PCR技术快速扩增全长mRNA)技术构建全长cDNA文库是传统C库构建技术的改进。本实验即是利用寡核苷酸帽法，进行全长C库的构建，从而掌握RACE技术的原理与基本操作方法。实验原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子结构作为标签，用通用引物识别并配对标签序
SMARTTM－5RACE－PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以Oligo(dT)30 MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下，反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性，在反转录达到第一链的5‘末端时自动加上3一5个(dC)残基，
cDNA－3末端的快速扩增（3’RACE)
在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚不清楚。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在用 o
RACEPCR克隆基因的几点建议
摘 要： RACE是一种快速克隆cDNA末端的方法，目前, 该方法被广泛应用于未知碱基序列基因的克隆，尤其是SMART RACE技术更为人们所青睐。本文总结了我们实验室用SMART RACE技术克隆基因的一些心得体会，希望对用RACE方法克隆基因的同行有些帮助。关键词： RACE; RNA提取;
RACE(rapidamplification－of－cDNA－ends)技术1
RACE技术的简介cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。完整的cDNA 序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆
RACE(rapidamplification－of－cDNA－ends)技术2
具体的实验步骤cDNA第一条链的合成：我们建议进行cDNA合成的对照反应，这样可以对样品的 cDNA的合成进行鉴定。加入各种试剂之后，在气浴中42度保温一个小时。注意： 在水浴或酒精浴中保温回减少反应体积，从而降低第一链的合成效率。将管放于冰上，以终止第一链的合成反应。直接进行第二链的合成。cDNA
cDNA－3末端的快速扩增（3’RACE)
实验方法原理 在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚不清楚。第一链 cDNA 的随机断裂，在合成第二链 c
cDNA－3末端的快速扩增（3’RACE)
实验方法原理 在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚
RLMRACE法合成双链cDNA
实验概要掌握合成双链cDNA的RLM-RACE技术，可构建高质量的cDNA文库。主要试剂1. 酶类及分子量标准 1) 高保真酶Easy-A high fidelity cloning enzyme,Merck公司Stratagene系列； 2) Taq DNA Polymerase，上海申
RACE的原理、应用和优缺点（一）
一、RACE 的简介 目前,全长基因的获得是生物工程及分子生物学研究的一个重点。尽管已经有多种方法可以获得基因的全长序列，但在很多生物研究中，由于所研究的目的基因丰度较低，从而使得由低丰度mRNA通过转录获得全长cDNA很困难。近年来发展成熟的cDNA末端快速扩增(RACE)技术为从低丰度转录快速
cDNA－5’末端的快速扩增（5’RACE）
实验方法原理 在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5' 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于反转录酶未能沿全长 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一条链往往 5' 末端不完整。实验材料 反转录酶末端脱氧核
cDNA－5’末端的快速扩增（5’RACE）
在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5' 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于反转录酶未能沿全长 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一条链往往 5' 末端不完整。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂
RACE的原理、应用和优缺点（二）
三、RACE 的应用 RACE技术主要是应用于对全长cDNA序列的获得，但对该技术进行一定的修改后，也可在其它方面显示出极高的应用价值。 首先，RACE技术可用于cDNA文库的构建及筛选。Belyavaasky等(1989)用10个骨髓瘤细胞分离的总RNA，通过TdT加同聚尾、(dT)
cDNA－5’末端的快速扩增（5’RACE）
实验方法原理 在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5' 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于反转录酶未能沿全长 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一条
PCR仪为什么得不到RACE产物？
*加入Hela对照 *低质量的RNA模板 *逆转录失败，SSII和SSIII非常适用于长模板cDNA的合成 *目的基因丰度太低，可以通过提高PCR的循环次数来解决，建议使用巢式PCR *目的基因没有表达，可以通过使用两条GSPs来分析cDNA中是否含有目的基因 *目的基因太长而不适合进
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓冲液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆转录酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脱氧核苷酸末端转移酶加尾缓冲液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot