RNaseandDEPCTreatment:FactorLaboratoryMyth
Researchers are usually trained in RNA isolation and analysis methods by one another or by technical manuals. Experimental procedures are often not questioned and quickly become dogma. Furthermore, it is difficult to find literature to document the "facts" taught by mentors and technical manuals. One of these potential myths is the use of DEPC treatment to make solutions RNase-free. At Ambion, we have syste......阅读全文
RNA提取方法步骤及常见失败原因
目的 研究基因的表达和调控时，需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低常常影响RT- PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。 主要试剂 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释
Guidelines－for－theUse－of－Analgesics－and－Tranquilizers－in－Laboratory－Animal2
GeneralSome of the drugs listed here do not possess all three criteria for an anesthetic and must be used in combinations to achieve full anesthesia o
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Anesthetic MachineThe best method of delivering an inhalant anesthetic is with an anesthetic machine. These machines precisely mix the gas with air o
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Other AnalgesicsAnalgesics are pain relievers most often given after a surgery. Narcotic analgesics have already been described above. Nonsteroidal an
Laboratory－Investigation：新药可预防致命核辐射
新研究发现对抗致命的辐射有了新突破。在核辐射暴露后24小时内，一种再生肽可以帮助显著提高小鼠的生存时间。目前这项研究出版在自然出版集团的杂志《Laboratory Investigation》上。 德州大学医学分部研究作者Carla Kantara是生物化学和分子生物学博士后，他说当小鼠处于致
ICBR－Flow－Cytometry－Core－Laboratory－Paraformaldehyde－Fixation－of－Cells
BackgroundThis fixation method is good for cells labelled by fluorochrome-conjugated antibodies to membrane antigens. It will stabilize the light scat
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BarbituratesThe barbiturates are an acid ring molecule with various ring substitutes that imbue the drug with different properties. Barbiturates are a
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ThermoregulationAnimals frequently become hypothermic during anesthesia because of inhalation of cold gases, exposure of body cavities to the room air
Guidelines－for－Retroorbital－Bleeding－in－Laboratory－Rats－and－Mice
Materials Needed:Micro pipettes (l00 µl) or Pasteur pipettes drawn to fine tip2X2 gauze squaresNon-sterile glovesEppendorf or other tubes to hold samp
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Anesthetic Induction and MaintenanceInjectable AnesthesiaAnesthetic induction using injectable anesthetics is fairly simple. It involves admininsistra
mRNA的分离和纯化实验（一）
实验原理从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。真核生物mRNA具
Nature：研究者揭示FACT蛋白操纵核小体机制
众所周知，包装DNA的组蛋白（H2A、H2B、H3和H4）需要分子伴侣。FACT（Facilitates Chromatin Transcription）蛋白是一类至关重要的组蛋白伴侣（histone chaperone）。将基因组DNA组装成核小体深刻地影响了真核生物中所有DNA相关过程。FA
植物总RNA的提取规程
一、实验目的掌握植物总RNA提取的原理和方法二、实验原理RNA的提取：破坏细胞膜—除去蛋白—除去DNA—除去盐离子。RNase是一类生物活性极其稳定的酶类，能耐高温、耐酸、耐碱，高压灭菌处理也不能使其完全失活。在提取RNA实验中，要尽量抑制RNase的活性。•DEPC（焦磷酸二乙酯）是很强的RNas
知识分享：mRNA的分离和纯化
实验原理 从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。 真核生
DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水的配制
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
Roche公司的RNase－Protection－Assay－(RPA)－protocol
Roche公司的RNase Protection Assay (RPA) Using DIG-Labeled RNA Probes下载网址：http://www.roche-applied-science.com/PROD_INF/BIOCHEMI/no1_03/PDF/p22_23.pdf还有一份
RNA制备的问题与解答
1、塑料制品、玻璃和金属物品的处理(a)塑料制品：尽可能使用无菌，一次性塑料制品。已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理方法如下：(1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：
避免RNA酶污染的方法
RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度
蛋白酶K的妙用
蛋白酶 K，威力巨大的广谱蛋白酶，95C 加热10 分钟，则完全失活。数年前首次使用它，是替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头，效果不错；后来又用于处理 RNase-Free的水，效果也是一级棒。从此就再也不用 DEPC 了。现在将它的细节公开，与大家分享。 配制 RNA 裂解试剂时，
研究发现染转录辅助因子FACT的独特双重功能
两句耳熟能详的俗语“龙生龙，凤生凤”和“龙生九子各不相同”道出了生物遗传现象中两个关键的特点：相似性和特异性。人类基因组精确测序显示人类基因的差异很小（
实验室塑料制品中核糖核酸酶和去氧核糖核酸酶的去除
通常RNA提取和RT-PCR实验操作失败的原因是由于器皿被核糖核酸酶（RNase）和去氧核糖核酸酶（DNase）污染。实验中应尽量使用不含 RNase的一次性塑料制品。重复使用的塑料制品可用0.1％二乙基焦碳酸（DEPC）水溶液于37℃浸泡2小时，再用去离子水冲洗，然后放入高压蒸汽灭菌器中，高压灭菌
RNA实验和方案新手必读（四）
溶液（水或者其它溶液）应该使用0.1%的DEPC处理。DEPC是一种强大但非绝对的RNase抑制剂。浓度为0.1%的DEPC经常用于处理玻璃或者塑料耗材，以使其表面的RNase失活，或者制备不含RNase的的溶液和水。DEPC通过共价修饰使RNase失活。在100 ml要处理的溶液中加入0.1 ml
TRIzol－Prep
Procedure1. Homogenize cells (10 million) or tissue (50-100 mg) in 1 mL TRIzol Reagent (e.g. scrape and pass through 30G needle, dounce homogenize an
[3H]－Choline－Labeling－and－TNF－Treatment－of－HL60－Cells
1) Grow cells to a density of 5-8 X 105 cells/ml in RPMI 1640 containing serum.2) Pellet cells and wash 1 time with room temperature PBS.3) Resuspend
实验室常用塑料制品中核酸酶的去除
塑料制品中核糖核酸酶和去氧核糖核酸酶的去除通常RNA提取和RT-PCR实验操作失败的原因是由于器皿被核糖核酸酶（RNase）和去氧核糖核酸酶（DNase）污染。实验中应尽量使用不含 RNase的一次性塑料制品。重复使用的塑料制品可用0.1％二乙基焦碳酸（DEPC）水溶液于37℃浸泡2小时，再用去离子
配置depc水时，为什么一定要过夜处理呢
主要原因就是为了DEPC能被分解，而不至于残留到耗材上对下游实验有影响，或是对人身健康有危害，因此才会过夜处理的。DEPC(处理)水是指用DEPC处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。MiliQ纯水加0.1% DEPC，混匀过夜，121℃，20min。而后DEPC即降解成二氧化碳和酒精，失去毒性。
基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法(2)
标本的保存血清（浆）HBV：分离出的血清（浆）如不立即提取核酸，保存于-20℃待检。HCV：尽快分离血清(浆), 如不立即提取RNA， 保存于-20℃待检。长期保存：吸取200µl血清，加20u RNasin（RNA酶抑制剂），保存于-70℃。已发出结果报告的标本应及时转移至冰箱保存，并由专人负责管
E.Z.N.A.®－Total－RNA－Midi－Kit－Protocol－DNase－I－digestion－Protocol
实验概要E.Z.N.A.® Total RNA Midiprep Kit provides a rapid and easy method for the isolation of up to 600 ug of total RNA from cultured eukaryotic cells,
蛋白酶K生物试剂的妙用
蛋白酶K/Proteinase K 层析纯，30u/mg 100毫克蛋白酶 K，威力巨大的广谱蛋白酶，95C 加热10 分钟，则完全失活。数年前首次使用它，是替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头，效果不错；后来又用于处理 RNase-Free的水，效果也是一级棒。从此就
PAT法分析mRNA－Poly（A）尾长度实验
PAT法 [ PCR poly(A) test ] 可以快速、灵敏地从总 RNA 中分析特异 mRNA，而且可以定量估算 RNA poly(A) 尾长度。这方法中，包括 cDNA 合成的整个操作过程都在一个反应管中完成，不仅操作更简便，也减少了可能存在的 RNase 污染。本实验来源「RNA 实验指