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农杆菌介导的植物遗传转化

实验概要以烟草叶片为材料,与对数生长期的带有外源基因的农杆菌共培养,遗传转化烟草叶片,筛选抗性再生植株。掌握共培养过程关键技术环节及转基因植株的筛选。主要试剂70%乙醇0.1% HgCl2无菌水卡那霉素(kan)羧苄青霉素(Cb)培养基:LB培养基100ml;MS 盐溶液(pH 7.0)100ml,分装到50ml三角瓶中,25ml/ 瓶;MS基本培养基 500ml(固体);分化培养基 MS NAA 0.2 mg/l 6-BA 3 mg/l,500ml (固体),分装在250ml三角瓶中,每瓶100ml;高压灭菌抗生素母液:Kan 100mg/ml 5ml;Cb 500mg/ml 5ml 抽滤灭菌,分装在Ep 管中,每管1ml,-20℃保存。主要设备超净工作台摇床恒温培养室高压灭菌器冰箱培养瓶培养皿500 ml三角瓶50 ml与500 ml烧杯酒精灯枪形镊子手术刀实验材料带有外源基因的农杆菌烟草......阅读全文

农杆菌的转化

实验概要本实验介绍了农杆菌感受态细胞的制备及转化方法。主要试剂YEP固体培养基,含有相应抗生素的YEP培养基,0.15mM NaCl,20mM CaC12,液氮,选择平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )主要设备培养箱,摇床,离心机,-80℃冰箱实验步骤1.

农杆菌介导法简介

  农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位 [1] ,并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆

农杆菌介导水稻转化

实验概要本实验介绍了农杆菌介导的水稻转化。主要试剂GUS染色液:100 mmol/L NaPO4 (pH7.0);0.1% Triton X-100;10 mmol/L EDTA;0.5 mmol/L亚铁氰化钾头抱霉素,乙醇,次氯酸钠溶液主要设备高速离心机,培养箱,人工气候室实验材料水稻种子实验步骤

什么是发根农杆菌?

  发根农杆菌是一类宿主范围广泛的G-土壤杆菌。农杆菌在侵染植物后,能够诱导植物产生大量高度分支的不定根,通常称为发根。发根农杆菌侵染植物所产生的发根具有生长速度快、分化程度高、生理生化和遗传性稳定、易于进行操作控制等特点。  土壤发根农杆菌(Ag.rhizogenes)是一种侵染性非常广泛的土壤细

农杆菌介导法概述

  农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,农杆菌的介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。此外,生物技术学家还可以通过发根农杆菌转化,在液体培养基中培养高密度的根,作为一种在转基因植物中获得大量蛋白质的方法。  农杆菌Ti质粒的T-DNA可高效率地整合到植物受体细胞的染色体上并得到

农杆菌介导转化拟南芥

实验概要1. 学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理。2. 掌握农杆菌介导转化拟南芥 的实验方法,了解拟南芥的生理特点及在基因工程实验中应用实验原理拟南芥(Arabidopsis thaliana)是一种十字花科植物,二年生草本,高7~40厘米,花期3~5月。广泛用于植物遗传学、发育生物学和

农杆菌的分类介绍

  农杆菌主要有两种:根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)。根癌农杆菌的Ti质粒和发根农杆菌的Ri质粒上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌是一种

农杆菌转化法的原理

选择一种特制的空质粒载体(如PBI121质粒载体),其上要求含有T-DNA边界序列(此处可参见词条双元表达载体系统),在序列之间含有复制原点、抗性基因、GUS报告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位点(以上这些构成了一个T-DNA区)。先通过双酶切反应酶切空质粒载体和目的基因,再通过酶连反应连

农杆菌转化法培养抗虫棉

(1)图中A为基因表达载体;农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上.根据农杆菌的这一特点,在构建基因表达载体时,如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上,通过农杆菌的转化作用,就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上.(2)①过程是将基因表达载

农杆菌的生存形状相关介绍

  根癌农杆菌生活在土壤,特别是耕种过的田地里,因为经过耕种的土壤疏松,适宜根癌农杆菌生长。根癌农杆菌的菌体为棒状,有两三个微米长,靠几根鞭毛运动,鞭毛一般生在侧边。用显微镜放大到1000倍时,人们就能把它看得很清楚了。  在许多双子叶植物靠近地面的根茎交界处,根癌农杆菌能诱发一种帽状肿瘤,人们称之