Tornado表达系统实现RNA高水平表达和功能活性
RNA适配体是一种短RNA，可通过结合细胞内的分子或蛋白质调节细胞内进程。尽管RNA适配体具有潜在的应用价值，但它并没有其他RNA技术广泛应用，主要问题是它们不能高浓度表达，从而不能有效调节蛋白质功能，同时也阻碍了RNA装置，例如RNA代谢物生物传感器在哺乳动物细胞中的应用。通常，基于RNA的生物传感器是通过融合适配体来构建的，这些生物传感器在哺乳动物细胞中无法检测到荧光信号。基于以上现状，Samie R. Jaffrey团队设计了一个新的表达系统Tornado，实现了RNA适配体和基于RNA装置在哺乳动物细胞中的高水平表达和功能活性。 Tornado表达系统不需要任何额外的蛋白质或酶共同表达就能实现循环，快速高效，因此RNA是稳定的。基于Tornado表达的转录本包含一段RNA，两侧是扭曲的核酶。核酶迅速发生自催化裂解，末端由普遍存在的内源性RNA连接酶RtcB连接。此外，蛋白质结合的RNA适配体在其他方面对细胞的影响微......阅读全文
Tornado表达系统实现RNA高水平表达和功能活性
RNA适配体是一种短RNA，可通过结合细胞内的分子或蛋白质调节细胞内进程。尽管RNA适配体具有潜在的应用价值，但它并没有其他RNA技术广泛应用，主要问题是它们不能高浓度表达，从而不能有效调节蛋白质功能，同时也阻碍了RNA装置，例如RNA代谢物生物传感器在哺乳动物细胞中的应用。通常，基于RNA的生
RNA酶活性的控制
为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
RNA酶活性的控制
为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
lncRNA表达与RNA的延伸
LncRNA的火热研究已经有几年的时间了，关于lncRNA总归是有说不完的话题。目前对lncRNA的基础分析都已形成了一定的模式。然后，今年来lncRNA的相关文章依然如雨后春笋。 长链非编码RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)是长度大于 200 个核苷酸的非编码 RN
基因表达RNA加工的机制介绍
原核蛋白编码基因的转录产生的是可以翻译成蛋白质的信使RNA（mRNA）,但真核基因的转录会产生RNA的初级转录本（pre-mRNA）,必须经过一系列加工才能成为成熟RNA（mRNA）。RNA的加工包括5端加帽、3端多腺苷酸化和RNA剪接。RNA加工可能是真核生物细胞核带来的进化优势。在原核生物中
体内表达shRNA（短发夹RNA）的设计
1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。 3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的2
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于10
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2
DNA与RNA能协同互补调控基因表达
比利时布鲁塞尔自由大学主导的一项研究揭示，DNA和RNA的表观遗传学协同调控比过去想象的更加紧密。这项发表在最新一期《细胞》杂志上的研究，结合了DNA和RNA研究结果，指出这两种调控方式共同作用，形成一个互补系统：DNA表观遗传学决定了哪些基因可以被激活，而RNA表观遗传学则动态调整这些基因的表达水
关于基因表达的机制RNA加工的介绍
基因表达的机制：原核蛋白编码基因的转录产生的是可以翻译成蛋白质的信使RNA（mRNA），但真核基因的转录会产生RNA的初级转录本（pre-mRNA），必须经过一系列加工才能成为成熟RNA（mRNA）。RNA的加工包括5端加帽、3端多腺苷酸化和RNA剪接。RNA加工可能是真核生物细胞核带来的进化优
反义RNA调控细菌基因的表达功能介绍
反义RNA对编码CAP的基因的调控作用已如前述。这里再介绍一下micF RNA对ompF基因的表达的调控。ompF蛋白质是大肠杆菌的外膜蛋白的主要成分这一。micF RNA是从另一基因(ompC基因)附近的DNA序列转录而来，和o-mpFn RNA的5'端有70%的序列互补，因此在体外m
反义RNA的调控细菌基因的表达功能
反义RNA对编码CAP的基因的调控作用已如前述。这里再介绍一下micF RNA对ompF基因的表达的调控。ompF蛋白质是大肠杆菌的外膜蛋白的主要成分这一。micF RNA是从另一基因(ompC基因)附近的DNA序列转录而来，和o-mpFn RNA的5'端有70%的序列互补，因此在体外mic
RNA干涉实验——采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子
实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制，因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的，不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察，也不适于进行文库的筛选。此外，体外制备 siRNA 分子的成本比较高，而且 siRNA
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)3
A、细胞裂解a．单层细胞的裂解a)吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。b)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液， 并使之遍布整个平板的
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)2
（一）实验程序如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品：（１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180℃干烤８小时或更
关于基因表达的RNA输出和翻译的介绍
1、基因表达的RNA输出 真核生物中，虽然一些RNA在细胞核中起作用，但大多数成熟的RNA必须通过核孔从细胞核输出到细胞质中。这些RNA包括蛋白质合成中涉及的所有RNA类型。在某些情况下，RNA被另外转运到细胞质的特定部分，如突触。 2、基因表达的翻译 成熟RNA是非编码RNA的最终基因表
过表达质粒与RNA干扰质粒有什么不同
本质上是一样的，都是让外源性的基因序列在细胞内得到表达。但是由于目的不同，技术细节上也会有不同。过表达的质粒如果是一过性表达，不需要整合到细胞染色体组，只要有强的启动子就可以了。稳定表达的，需要有筛选基因的表达来选出整合的细胞。而干扰质粒一般都需要是稳定的表达，现在都是通过慢病毒来实现，质粒基本都弃
婴儿鼻、肺细胞的RNA表达模式显著相似
根据罗切斯特大学医学中心(URMC)最新的研究发现婴儿鼻细胞与肺部细胞非常类似,这一发现可使呼吸道合胞体病毒(RSV)和其他婴儿肺部疾病的诊断更精确。 患呼吸道疾病的婴儿十分脆弱，因此试图获取肺部样本是不安全的，该研究发表在科学报告上，为多年来受到挑战的医生提供了一条潜在诊断途径。然而，鼻细
无损式激光粒度仪LS－13320－Tornado介绍
准确性和重现性是评价粒度分析仪器的重要指标，性能优异的仪器能够为使用者带来最可靠和最真实的分析数据。 “龙卷风”无损式干粉激光粒度分析仪LS 13320 Tornado，是一台具有崭新技术理念的、可满足干粉样品颗粒在非高压气流之下达到无破碎分散的高性能、智能化的激光粒度仪。 主要特点如
T7RNA聚合酶系统基因表达实验
实验方法原理 含有 pT7 控制的外源基因（「痘苗病毒系统基因表达实验」中「重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染」）的重组质粒，通过同源重组可整合到痘苗病毒中,并制备重组病毒储液。将此病毒储液与 vTF7-3 共同感染贴壁或悬浮细胞，在培养过程中，外源基因被高效的 T7 RNA
T7RNA聚合酶系统基因表达实验
两种重组痘苗病毒共感染细胞 单病毒感染OST7-1细胞 利用VOTE系统 实验方法原理 含有 pT7 控制的外源基因（「痘苗病毒系统基
环状RNA（circRNA）功能研究又一利器——过表达载体
circRNAs 环状 RNA（circular RNAs,circRNA）是一类具有闭合环状结构的 RNA 分子，早在 20 世纪八十年代即有研究报道，但由于其表达丰度低，文献报道较少，一直被认为是 RNA 转录剪切的罕见错误而被忽视。直到 2012 年开始有研究者开始大批量鉴定 circRN
非编码RNA－Nfi调控水稻固氮酶活性
近日，生物所微生物功能基因组创新团队林敏课题组在水稻根际联合固氮施氏假单胞菌中发现新型非编码RNA参与协同调控固氮酶活性，为进一步揭示生物固氮网络调控机制奠定了重要理论基础。该成果发表在最新一期的经典微生物学杂志《应用环境微生物学（Applied and Environmental Micro
关于基因表达的机制非编码RNA的成熟的介绍
多数生物体中的非编码基因（ncRNA）被转录为需要进一步加工的前体。核糖体RNA（rRNA）通常被转录为含有一个或多个rRNA的前体rRNA，前体rRNA后来在特定位点被大约150种不同的snoRNA切割和修饰。转移RNA（tRNA）的5'和3'端序列分别被RNase P和tRN
长非编码RNA调控癌基因MYC表达的综述文章
8月7日，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所研究员陈玲玲受邀在国际学术期刊Current Opinion in Genetics & Development 发表题为The long noncoding RNA regulation at the MYC locus 的综述论
最准确的基因表达检测方法——RNA测序遭遇“信任”危机？
当前，RNA测序成为了一种常用工具。 利用RNA测序，研究人员能够定量地检测各种生物体的基因表达，从而更好地了解细胞中正在发生的事情以及特定基因的功能。 RNA测序的准确性 早在2014年，《Nature Biotechnology》上发表了三篇文章。它们属于RNA测序质量控制（SEQC）
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验
基本方案 备选方案 备选方案2 实验材料 载体 试剂、
T7RNA聚合酶系统基因表达实验（一）
本节介绍依赖于在哺乳动物细胞质合成噬菌体T7 RNA聚合酶的瞬时细胞质表达系统。首先，将感兴趣的基因插入质粒中，使其位于T7 RNA聚合酶启动子（PT7）的控制下。在培养过程中，外源基因被高效的 T7 RNA聚合酶转录。这种转染方案适用于分析的目的，因为不需要构建新的重组病毒，所以比较简单。对于大规
Nature子刊：RNA测序鉴定小胶质细胞独特表达基因
马萨诸塞州综合医院(MGH)的研究者采用一种新的测序方法，鉴定了一组被脑免疫细胞——称为小胶质细胞—— 用来感知需要其做出反应的致病组织、毒素或损伤细胞的基因。这些基因的鉴定，能使我们更好地理解小胶质细胞在正常大脑和神经退行性疾病中的作用，为保护诸如阿尔茨海默氏病和帕金森氏综合症引起的损伤带