工业微生物产生菌的分离筛选(二)
富集(enrichment)培养是在目的微生物含量较少时,根据微生物的生理特点,设计一种选择性培养基,创造有利的生长条件,使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖,数量增加,由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种,以利分离到所需要的菌株.富集培养主要根据微生物的碳、氮源、pH、温度、需氧等生理因素加以控制.一般可从以下几个方面来进行富集. 一、控制培养基的营养成分 微生物的代谢类型十分丰富,其分布状态随环境条件的不同而异.如果环境中含有较多某种物质,则其中能分解利用该物质的微生物也较多.因此,在分离该类菌株之前,可在增殖培养基中人为加入相应的底物作惟一碳源或氮源.那些能分解利用的菌株因得到充足的营养而迅速繁殖,其他微生物则由于不能分解这些物质,生长受到抑制.当然,能在该种培养基上生长的微生物并非单一菌株,而是营养类型相同的微生物群.富集培养基的选择性......阅读全文
用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1.按照(三)中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小,200bp左右的片段需要4~5%的凝胶,小于100bp的片段应灌制6~8%的凝胶。 l DN
震动筛选机的筛选范围广
震动筛选机筛选:任何颗粒、粉末、粘液一定范围内均可筛选。筛分最细至500目或O028rrlm,过滤最小可至5微米。分级筛选,可筛一至五层筛网,能同时进行二至六个等级的分选或过滤。
谷物筛选器的筛选原理是什么?
说到筛选其实我们都不会太陌生,其实它就是根据物料粒度的不同,利用一层或数层静止的或运动的筛面对物料进行分选的方法。在种子检验领域,筛选仪器的代表就是谷物筛选器,它的作用就是用于检验颗粒粮食、油料试样的含杂率及大米中、糠粉含量,由于这些检测指标与谷物的品质息息相关,因此如果要确定谷物的品质等级
电动筛选器与谷物筛选器的区别
谷物筛选器和电动筛选器都是筛选器,用于粮食作物的筛选,包括种子的筛选。在育种、品质鉴定中都有非常大的作用。但是,电动筛选器和电动筛选器又是不同的,他们的运行机制也不同,但是功能却相似,都是为谷物筛选而准备的。下面我们就具体来介绍下电动筛选器和谷物筛选器。电动筛选器有DSX型电动筛选器,是根据GB54
蓝白斑筛选
实验中,通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素,这样,一次筛选可以判断出:未转化的菌不具有抗性,不生长;转化了空载体,即未重组质粒的菌,长成蓝色菌落;转化了重组质粒的菌,即目的重组菌,长成白色菌落。目前很多实验室省去蓝白斑筛选的步
CDNA文库筛选
(一)λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1.用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基(Y1088用于噬菌斑杂交,Y1090用于免疫筛选),于37℃振荡培养过夜。2.将过夜培养物以3000×g离心5min。3.分别用2ml λ-dil(10 mmol/L tris-Cl,
CDNA文库筛选
CDNA文库筛选(一)λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1.用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基(Y1088用于噬菌斑杂交,Y1090用于免疫筛选),于37℃振荡培养过夜。2.将过夜培养物以3000×g离心5min。3.分别用2ml λ-dil(10 mmol/L
转化克隆的筛选和鉴定——快速PCR筛选法
实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒引物Taq酶PCR缓冲液甘油硫酸镁dNTP蒸馏水琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器微量移液取样器移液器吸头离心管双面微量离心管架制冰机恒温摇床超净工作台摇菌管PCR仪培养皿凝胶电泳仪
人毛细血管内皮细胞分离—偶联了抗PECAM抗体磁珠筛选细胞
试剂、试剂盒PBS FCS仪器、耗材磁珠T25 板实验步骤1. 向“分离样品的制备”步骤10的细胞样品中加入 30 μl 偶联了抗 PECAM 抗体的磁珠。2. 细胞和磁珠混合物冰上保温 15 分钟。3. 磁体置于管侧 5 分钟,吸引筛选样品向磁体移动。小心吸弃上清,移开磁体。4. 向磁珠中加 2
为什么电动筛选器不适于小样试样的筛选?
说到电动筛选器的筛选过程,我们大多都会有这样的印象,那就是小时候父母为了筛选大豆、芝麻等粮食中的杂质,会使用竹编的筛子来进行筛选,经过筛选之后的粮食确实是干净了很多,而电动筛选器的工作原理基本上也是如此,只不过电动筛选器是采用电动的方式进行筛选,而且更加紧密,而人工筛选是采用人工,较为粗糙。
筛选稳定表达细胞株转染后多久药物筛选
稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始①在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证②高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白
谷物筛选器进行米类杂质的筛选和测定
米类中的杂质对米类的安全贮藏和食用价值及人体健康均有影响,因此,标准中对杂质有严格限制。一般所有的米类都有杂质总量的 限制规定,但总量(%)并不单是各个子项的检验结果之和。即使是一份粮食杂质总量(%)百分率合格,但若其子项杂质超过际准规定限度时,也属不合格。反之亦然。在米类中,子项杂质限制种类最多的
电动筛选器—便携式种子秕子筛选仪器介绍
目前,在测定种子发芽率、千粒重及田间考种等工作之前,均应将种子中的秕子等杂质去 除。一般去除秕子的方法是风选、水洗或人工目测剔除等。风选法适用于大批量种子的精选,小批量种子在做发芽试验或是千粒重的称重及计算时若用大型精选机则 毫无优势可言;水选及人工目测剔除法经验成份高,其比例或方法无统一标准,秕子
免疫筛选实验
根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质,从而筛选出目的基因的克隆。实验方法基本方案 实验材料 cDNA 试剂、试剂盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 异戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸钠 免疫沉淀缓冲液 仪器、
免疫筛选实验
根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质,从而筛选出目的基因的克隆。实验材料cDNA试剂、试剂盒BHI氯霉素NaOHSSC氯仿异戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸钠免疫沉淀缓冲液仪器、耗材转子硝酸纤维滤膜离心管微量多孔洗涤仪实验步骤1.
cDNA的筛选2
(三)免疫筛选制备Sepharose偶联细菌裂解液1.各用一个E.coli温度敏感溶源菌株(BTA 282(λgt11amp3)或BNN 97)单菌落接种于2×7.5ml培养基并于32℃生长过夜。2.过夜培养物用LB培养基稀释100倍,于32℃生长至OD600值为0.5。3.于45℃温育15min诱
cDNA的筛选1
(一)λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1.用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基(Y1088用于噬菌斑杂交,Y1090用于免疫筛选),于37℃振荡培养过夜。2.将过夜培养物以3000×g离心5min。3.分别用2ml λ-dil(10 mmol/L tris-Cl,
cDNA的筛选3
免疫学染色1.为了洗去顶层琼脂上的残余物和细胞碎片,将硝酸纤维素滤膜一次最多5张转移放在摇床上的盘子(10×10cm)内,用25ml TBS室温洗涤10 min 2次。2.然后滤膜用25ml封闭缓冲液(每张90mm直径的滤膜至少15ml)于室温温育 30min,以封闭滤膜上的非特异性结合位点。不断晃
纯合克隆筛选
纯合克隆筛选1.融化杂合突变ES细胞,ES/LIF培养液培养,每2~3天传代,实验开始把细胞接种到三个100mm铺有凝胶碟皿中,每皿接种1~2×106细胞。为筛选需用一个以上的ES杂合突变细胞系,因不同细胞系的转化效率不全相同,另外对检测细胞表型也需如此。2.每皿细胞分别加入1.0~2.0mg/ml
高内涵筛选平台
高内涵分析系统可以对大量细胞进行快速、高通量成像检测和定量分析。CellInsight CX7 LZR高内涵分析系统的Z轴层扫、快速扫描和共聚焦功能使其成为3D细胞培养高通量成像分析的理想平台。相比于LED系统,CX7 LZR采用激光器作为光源,可以减少光散射、渗透更深、有效改善信噪比,其配套的HC
药物筛选的定义
广义:是针对特定的要求和目的,通过适当的方法和技术,主要的技术有基因组学、蛋白质组学、代谢组学、计算生物学、生物芯片技术、微流控芯片技术等方法,在一定的可选择范围内,进行药物优选的过程。因此,药物筛选包括新药研究过程中的处方筛选,根据特定目的选择符合要求的药物。狭义:筛选专指采用实验技术进行。
免疫筛选实验
基本方案 实验材料 cDNA 试剂、试剂盒
免疫筛选实验
实验材料 cDNA试剂、试剂盒 BHI氯霉素NaOHSSC氯仿异戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸钠免疫沉淀缓冲液仪器、耗材 转子硝酸纤维滤膜离心管微量多孔洗涤仪实验步骤 1. 往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含适当抗生素的选择性BHI培养液,并分别接种独立的cDNA克隆,37℃温育过
纯合克隆筛选
1.融化杂合突变ES细胞 ,ES/LIF培养液培养,每2~3天传代,实验开始把细胞 接种到三个100mm铺有凝胶碟皿中,每皿接种1~2×106 细胞 。为筛选需用一个以上的ES杂合突变细胞系,因不同细胞系的转化效率不全相同,另外对检测细胞表型也需如此。 2.每皿细胞分别加入1.0~2.0m
抗体筛选技术汇总
近年来,生物药的市场需求逐年扩容,其中抗体药物因其靶向性好,治疗效果显著,在生物药中占据着举足轻重的地位,目前已经进入了抗体药物发展的黄金时代。随着抗体药的需求越来越大,抗体筛选技术的发展也是日新月异,目前应用较普遍的有杂交瘤技术、抗体文库筛选技术、纳米抗体技术和转基因小鼠抗体筛选技术。其中抗体
蓝白斑筛选原理
一些载体(如PUC系列质粒)带有β-半乳糖苷酶(lacZ)N端α片段的编码区,该编码区中含有多克隆位点(MCS),可用于构建重组子[1]。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性,但它们同时存在时,α片段与ω片段可通过α-互补形
α互补筛选的原理
载体带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞.因此
特征筛选(随机森林)
随机森林能够度量每个特征的重要性,我们可以依据这个重要性指标进而选择最重要的特征。sklearn中已经实现了用随机森林评估特征重要性,在训练好随机森林模型后,直接调用feature_importan ces 属性就能得到每个特征的重要性。一般情况下,数据集的特征成百上千,因此有必要从中选取对结果影响
震动筛选机的筛选范围广及适用范围
筛选范围广 震动筛选机筛选:任何颗粒、粉末、粘液一定范围内均可筛选。筛分最细至500目或O028rrlm,过滤最小可至5微米。分级筛选,可筛一至五层筛网,能同时进行二至六个等级的分选或过滤。 适用范围 任何粉、粒、粘液类的筛分过滤。 食品行业——面粉、奶粉、糖粉、食盐、豆浆、蛋粉、淀粉、
电脑筛选器在筛选种子中的重大作用
去除种子中的杂质是测定种子发芽率,千粒重等研究工作的重要步骤。风选法适用于大批量 种子的精选,小批量种子在做发芽试验或是千粒重的称重及计算时若用大烈精选机则毫无优势可言;水选及人工目测剔除法经验成份高,其比例或方法无统一标准, 批子的认定易受人为因素影响,且用这两种方法筛选批子工作量大,工作效率低。