体内表达shRNA的设计
1.克隆到shRNA 表达载体中的shRNA 包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA 聚合酶Ⅲ的转录终止子。2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启动子有一定空间间隔以确保转录的发生。5.ShRNA 目的序列的第一个碱基必须是G以确保RNA 聚合酶转录。如果选择的目的序列不以G开头，必须在紧连正义链的上游加一个G。6.ShRNA 插入片段中的茎环应当靠近寡核苷酸的中央。不同大小和核苷酸序列的茎环都被成功的运用过。其中包含一个独特的限制性酶切位点的茎环利于检测带有shRNA 插入片段的克隆。在比较了众多不同长度和序列的茎环，5'TCAAGAG3'序列最为有效。7.5-6个......阅读全文
体内表达shRNA的设计
1.克隆到shRNA 表达载体中的shRNA 包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA 聚合酶Ⅲ的转录终止子。2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的
体内表达shRNA（短发夹RNA）的设计
1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。 3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的2
设计shRNA教程
一、认识shRNA： 在研究基因功能中，RNAi由于可以特异性地使基因沉默或表达量降低而成为生物实验中的有力工具。其中，shRNA是可以克隆至表达载体并表达siRNA双链的DNA分子。今天给大家分享两种能快速设计shRNA的方法。 二、shRNA的设计: 1. Sigma网站Sigma公司做了一个针
The－TRC－shRNA设计方法与原则
OverviewWe design shRNA molecules with an algorithm. Our algorithm uses several criteria to rank potential 21mer targets within each human and mouse R
手把手教你设计shRNA
一、认识shRNA： 在研究基因功能中，RNAi由于可以特异性地使基因沉默或表达量降低而成为生物实验中的有力工具。其中，shRNA是可以克隆至表达载体并表达siRNA双链的DNA分子。今天给大家分享两种能快速设计shRNA的方法。 二、shRNA的设计: 1. Si
体内无细胞DNA的表达
对于一些由缺乏三种特定蛋白质的基因突变引起的疾病（如Leber先天性黑蒙和血友病），直接的想法是将能够表达相关蛋白质的基因“播种”到体内，而不是“种”到基因组中，但在细胞质中自由表达。最典型的例子是几种批准的病毒转染基因疗法（如FDA批准的用于治疗遗传性眼病的基因药物“Luxturna”）。这种方法
设计出新型酵母表达平台
近日，华东理工大学生物工程学院教授蔡孟浩课题组在新型酵母表达设计方面取得重要进展，开发了可响应用户自定义信号的高效酵母蛋白表达平台。相关成果已在线发表于《科学进展》。高水平、可调控的基因表达，对于生物医药和生物制造产业中的蛋白高效率、高质量生产极为重要。酵母作为人们熟知的一种真核微生物，在食药方面的
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
shrna引物退火原理
1. 载体取2-5ug，在25ul体系中，用2.5ul的酶切30min-1h，回收载体：载体:---2ul（2-5ug）酶---------2.5ulBuf--------2.5ul水---------18ul回收的时候希望浓度高点。2. Oligo退火形成双链若为2OD=5.4nmol的话，则每个
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
生物体内控制基因表达的机制
生物体内控制基因表达的机制。基因表达的主要过程是基因的转录和信使核糖核酸（mRNA）的翻译。基因调控主要发生在3个水平上，即：①DNA修饰水平、RNA转录的调控、和mRNA翻译过程的控制；②微生物通过基因调控可以改变代谢方式以适应环境的变化，这类基因调控一般是短暂的和可逆的；③多细胞生物的基因调控是
原核表达实验前分析设计
表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR 、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然
The－TRC－shRNA－Design－Methods－and－Rules
OverviewWe design shRNA molecules with an algorithm. Our algorithm uses several criteria to rank potential 21mer targets within each human and mouse R
miRNA，siRNA，shRNA有什么区别
siRNA是小干扰rna；shRNA是小发卡rna，一段rna单链，形成茎环结构部分双链的小rna siRNA可以是天然产生也可以是人工导入的，shRNA一般都是指人工的 shRNA多是用dna载体构建，在宿主内自行转录成shRNA，再加工成像siRNA一样的小RNA，目的为了模仿。
The－TRC－shRNA－Design－Methods－and－Rules2
Score the Candidates Sequences for SpecificityWe are forced to balance the prediction of knockdown efficiency against the desire to minimize interacti
《科学》：突破显微镜的局限－这套系统能看清体内基因表达
今日，最新一期《科学》杂志上报道了一篇值得关注的论文。加州理工学院的一支团队开发出了一套全新的超声成像系统。它能够在活体动物中，让科学家们亲眼看到基因的表达。尽管这项技术目前还较为初步，但可以想象，一旦发展成熟，它将能给多种疾病的检测带来突破。 事实上，过去的科学家们早已开发出了许多检测基因表
关于慢病毒载体的基本信息介绍
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使
增强抑癌基因表达中国团队设计抗癌新策略
【新华社华盛顿5月26日电】新一期美国《科学·转化医学》杂志刊发中国科研人员的研究报告，介绍了一种抗癌新策略。他们利用新方法让可抑制癌症的基因得以充分表达，取得了阻止肿瘤发展和扩散的效果。 研究发现，3种人体中可以抑制癌症的基因在多种肿瘤中不能充分表达，无法有效干预癌细胞的增殖和转移。
增强抑癌基因表达－中国团队设计抗癌新策略
新一期美国《科学·转化医学》杂志刊发中国科研人员的研究报告，介绍了一种抗癌新策略。他们利用新方法让可抑制癌症的基因得以充分表达，取得了阻止肿瘤发展和扩散的效果。 研究发现，3种人体中可以抑制癌症的基因在多种肿瘤中不能充分表达，无法有效干预癌细胞的增殖和转移。南开大学药学院教授杨诚对新华社记者介
关于生物体内控制基因表达的机制—基因调控的简史介绍
1900年F.迪纳特发现在含有乳糖和半乳糖的培养液中培养的酵母菌细胞中有分解半乳糖的酶，但是在葡萄糖的培养液中培养的酵母菌细胞中没有相应的酶。1930年H.卡尔斯特伦在关于细菌的研究中也发现类似的现象，并把生物细胞中的酶区分为组成酶和适应酶（亦称诱导酶）两类，前者是在任何情况下都存在的酶，后者是
简述生物体内控制基因表达的机制—基因调控的研究方法
１、筛选突变型 这是在原核生物中广泛应用的方法，例如在乳糖操纵子的研究中筛选失去了基因调控能力的组成型，包括调节基因发生突变和操纵基因发生突变的突变型，以及筛选即使有乳糖或其他诱导物存在的情况下仍然不能合成β-半乳糖糖苷酶的超阻遏型等等。 ２、激素诱导 在高等的真核生物中，除了离体培养的体
关于生物体内控制基因表达的机制—基因调控的基本介绍
１、基因调控，生物体内控制基因表达的机制。表达的主要过程是基因的转录和信使核糖核酸(mRNA）的翻译。基因调控主要发生在三个水平上，即①DNA水平上的调控、转录控制和翻译控制； ２、微生物通过基因调控可以改变代谢方式以适应环境的变化，这类基因调控一般是短暂的和可逆的； ３、多细胞生物的基因调
新CRISPR转基因鼠体内基因表达和表观遗传修饰精准调控
CRISPR-Cas9系统为基础的基因编辑技术极大的推动了生物医学研究的进步。除直接编辑基因组DNA外，研究者还将失活型Cas9（dCas9）与转录调控元件或染色体修饰元件融合，构建出可实现转录和表观遗传学修饰调控的新工具如CRISPRa（转录激活工具），CRISPRi（转录抑制工具）以及CRI
上海生科院发明一种高效安全的新型RNAi载体
10月12日，国际学术期刊Nature Communications 在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所国家蛋白质科学中心（上海）吴立刚研究组的最新研究成果：Ribozyme-enhanced single-stranded Ago2-processed inter
沉默是金:－强大的RNAi筛选技术
在过去，想要发现哺乳动物细胞的重要生理过程，通常需要通过化学突变或将转座子插入到基因组中对细胞内的基因进行干扰。但是，大约10年前，RNA 干扰(RNAi)技术的出现改变了这种状态。这项技术的核心是，设计一个短链RNA，使其在转录过程中与目的基因序列互补结合，从而阻止目的基因翻译成蛋白。RN
miRNA、siRNA、dsRNA与shRNA－表示什么意思？
siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长
六大病毒载体技术的比较；不同基因传递方法的比较－二
为什么是shRNA？外源导入的siRNA结合RISC复合物的能力要比shRNA低10倍，虽然将siRNA的长度增加到29-30 nt可以增加结合RISC复合物的效率，但也增加了off target效应，引起更多的非专一性基因干扰。shRNA由于模拟microRNA的作用通路，所以相比siRNA其基因
关于生物体内控制基因表达的机制—基因调控的内容简介
表达的主要过程是基因的转录和信使核糖核酸(mRNA）的翻译。基因调控主要发生在三个水平上，即 ①DNA水平上的调控、转录控制和翻译控制； ②微生物通过基因调控可以改变代谢方式以适应环境的变化，这类基因调控一般是短暂的和可逆的； ③多细胞生物的基因调控是细胞分化、形态发生和个体发育的基础，这
基因编辑那么热，可是你都会用了吗？
基因编辑是一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，通过改变生物的遗传基因，使其特定的基因功能丧失作用，通过研究对生物体造成的影响，进而推测出该基因的生物学功能。本文为你科普基因编辑三大技术： 基因敲除 进行DNA水平编辑。一般用于构建基因敲除鼠模型。 CRISPR/Cas9：C
：六大病毒载体技术的比较；不同基因传递方法的比较
病毒载体 经典的病毒载体主要有四类，腺病毒，腺相关病毒，逆转录病毒和慢病毒。他们具备侵染细胞谱广，效率高等特点并广为研究人员熟知。它们的特点总结归纳如表一。 表一：六大病毒载体技术的比较 载体 感染广谱性 靶细胞类型 表达形式 表达时间 免疫原