RNA操作中的一般要求
在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中,一方面要严格控制外源性RNA酶的污染;另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。 外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等,也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶......阅读全文
RNA提取操作注意事项
RNA抽提纯化是分子生物学研究的基本工作内容。但是由于RNA酶的广泛存在和难以灭活的顽固本性,使得RNA的抽提纯化和后续工作特别困难。虽然 Trizol试剂和各类RNA抽提纯化试剂盒的广泛应用使得RNA抽提和纯化不再特别困难,但是涉及RNA的工作仍然是分子生物学研究中最让人头痛的。归根结底,RN
纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA
实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织,直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均匀,冰浴 15 分钟
纯化RNA实验——从培养的细胞中纯化总RNA
实验材料细胞试剂、试剂盒RNA 提取缓冲液变性液水饱和酚仪器、耗材培养皿Falcon 2063 管实验步骤1. 取 1 个细胞已长满的 100 ml 培养皿,吸出培养液,加 2 ml RNA 提取缓冲液,用橡胶刮棒刮下细胞。RNA 提取缓冲液:变性液,20 mlβ-巯基乙醇,0.144 ml2 mo
信使RNA提取分离的操作步骤介绍
1.将0.5-1.0g寡聚(dT)-纤维悬浮于0.1M的NaOH溶液中。 2.用DEPC处理的1ml注射器或适当的吸管,将寡聚(dT)-纤维素装柱0.5-1ml,用3倍柱床体积的DEPC H2O洗柱。 3.使用1×上样缓冲液洗柱,直至洗出液pH值小于8.0。 4.将RNA溶解于DEPC H
肝脏细胞RNA的提取操作方法
一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是
植物中的RNA沉默的分类
植物中的RNA沉默根据作用靶标可以分为两类: 以RNA为靶标, 使其降解或抑制蛋白翻译, 称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS); 以染色质为靶标, 使其基因启动子或组蛋白甲基化从而抑制 RNA 转录的起始, 称为转录基因沉默(tra
列举对真空分析质谱计的一般要求
真空分析质谱计的一般要求为: ①仪器探头尺寸小、质量轻、易于安装; ②对于磁偏转型仪器和摆线型仪器来说,仪器的杂散磁场必须很小; ③仪器探头应具有互换性,成本低,允许一机可配用数个探头; ④探头能经受400℃烘烤,离子源能用电子轰击除气,以减小“记忆效应”: ⑤仪器的质量标度最好为线
选购电缆故障测试仪器的一般要求
选购怎样类型的电缆故障测试仪,首先要看使用单位的具体要求,对仪器有没有特殊要求。一般而言,如果以前没有购买和使用过同类仪器,电缆种类是高压电缆、低压电缆都有,电缆铺设方式是直埋、电缆沟,架空等等方式共存,对仪器也没有什么特殊的要求,推荐选用具有故障距离粗测、电缆路径探测、故障点精确定点三种功能完
检测实验室检验用一般器皿的要求
⑴、器皿的选用 分析检验时离不开各种器皿,所需的各种器皿应根据检验方法的要求来选用。一般应选用硬质的玻璃器皿;有些试剂对玻璃有腐蚀性(如NaOH等),需选聚乙烯瓶贮存;遇光不稳定的试剂(如AgNO3 /I2等)应选择棕色玻璃瓶避光贮存。选用时还应考虑到容量及容量精度和加热的要求等。 检验
气相色谱仪对仪器的一般要求
一、载气源气体氦、氮和氢可用作气相色谱法的流动相,可根据供试品的性质和检测器种类选择载气,除另有规定外,常用载气为氮气。二、进样部分 进样方式一般可采用溶液直接进样或顶空进样。采用溶液直接进样时,进样口温度应高于柱温30~50℃。顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。 三、色谱柱
液相色谱对流动相选择的一般要求
液相色谱所采用的流动相通常为各种低沸点有机溶剂与水或缓冲溶液的混合物。为了保证色谱系统的分离过程可重复性,流动相所采用的溶剂必须具有较高的纯度和化学稳定性。从实用角度考虑,溶剂应价格低廉、容易购得且使用安全。对流动相选择的一般要求包括: 1 化学稳定性好,不与固定相和样品组分发生化学反应; 2
滴定分析的相对误差一般要求为多少
滴定分析也分为常量和微量分析。如果是常量,特别是对物质纯度的检测,相对误差就来求得非常严格,0.1%我认为都不高。而对于微量分析,相对误差的要求就宽松一些,0.5%就能满足分析要求,甚至1%也行。这主要取决于分析的样品与目的。
培养细胞中RNA检测
实验概要掌握培养细胞中RNA的检测方法。实验步骤1.制胶(1%): 琼脂糖 2.5g 10×Mops缓冲液 25.0ml H2O 192.0ml2.在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌。3.取出胶冷却到60℃,于通风柜中加45ml甲醛,混匀。4.加20μl溴化乙锭,混匀。5.令胶液再
Southern杂交一般操作方法
一 基因组酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入:25 μl DNA样品(约10μg),3μl 限制性内切酶(MBI,10 U/ μl)5 μl 相应的10×buffer,补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖, 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后,取5μl 酶切DNA样品于0.8%的
FEIN角磨机的操作要求
操作要求:1、操作者应配戴合适的防护用具,如防飞溅面罩等。2、启动电源,待砂轮转速稳定后方可磨削,其安全工作线速度不得低于80米/小时。3、在工作过程中,不要让砂轮受到撞击,使用切割砂轮时,不得横向摆动,以免砂轮裂碎。4、为取得良好的加工效果,应尽可能地使工作头旋转平面与工作砂轮表面成15°至30°
耐压测试仪的操作要求
耐压测试仪是测量耐压强度的仪器,它可以直观、准确、快速、可靠地测试各种被测对象的击穿电压、漏电流等电气安全性能指标,并可以作为高压源用来测试元器件和整机性能。 耐压测试仪的操作要求: 1、本设备的维护保养由专人负责,操作人员需培训合格才能上岗。 2、由于本设备操作产生高压,生产部应设
谷物筛选器的维护操作要求
谷物筛选指的是根据谷物粒度不同,利用单层或多层静止的或运动的筛面对谷物进行分选的方式。就其性质而言,介于固体和液体之间而被称为散粒体。散粒体具有流动性和自动分级性能。谷物筛选器是检验颗粒粮食、大米中的糠粉含量,确定其品质等级的专业检验仪器,也是确定谷物虫粮等级标准和害虫密度的专用仪器。为
gmp中rsd要求
在GMP中,RSD的要求是不能超过2.0%,而且每10次测试结果的平均值也要在规定的误差范围内。此外,RSD不能超过正态分布表中显示的98%可靠度水平。
电子天平的一般操作方法
通电预热一定时间(按说明书规定);调整水平;待零点显示稳定后,用自带的标准砧码进行校准;取下标准砧码,零点显示稳定后即可进行称量。例如用小烧杯称取样品时,可先将洁净千澡的小烧杯敞在称盘中央,显示数字稳定后按“去皮”键,显示即恢复为零,再缓缓加样品至显示出所需样品的质量时,停止加样,直接记录称取样品的
血型鉴定操作的一般注意事项
血型鉴定操作时的一般注意事项: ①所用器材必须干燥清洁、防止溶血,凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染,建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后,应待其平衡至室温后再用,用毕后应尽快放回冰箱保存医学|教育网搜集整理。 ②加试剂顺序:一般先加血清,然后再加红细胞悬液,以便核实是否漏加血清。 ③虽然
核磁共振谱仪的一般操作
核磁共振波谱仪的一般操作主要包括:放置样品、氘代试剂锁场、匀场、探头调谐、设置参数、数据的采集以及处理,下面分别予以介绍: 1.放置样品 首先要有足够的样品量,一般300兆核磁共振测氢谱需2-10mg,500兆核磁共振测氢谱需0.5mg以上,碳谱需要的样品量更大。选择适当核磁共振的溶解,使
核磁共振谱仪的一般操作
核磁共振波谱仪的一般操作主要包括:放置样品、氘代试剂锁场、匀场、探头调谐、设置参数、数据的采集以及处理,下面分别予以介绍: 1.放置样品 首先要有足够的样品量,一般300兆核磁共振测氢谱需2-10mg,500兆核磁共振测氢谱需0.5mg以上,碳谱需要的样品量更大。选择适当核磁共振的溶解,使
核磁共振谱仪的一般操作
核磁共振波谱仪的一般操作主要包括:放置样品、氘代试剂锁场、匀场、探头调谐、设置参数、数据的采集以及处理,下面分别予以介绍: 1.放置样品 首先要有足够的样品量,一般300兆核磁共振测氢谱需2-10mg,500兆核磁共振测氢谱需0.5mg以上,碳谱需要的样品量更大。选择适当核磁共振的溶解,使
植物中的RNA沉默额定分类
植物中的RNA沉默根据作用靶标可以分为两类: 以RNA为靶标, 使其降解或抑制蛋白翻译, 称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS); 以染色质为靶标, 使其基因启动子或组蛋白甲基化从而抑制 RNA 转录的起始, 称为转录基因沉默(tra
血液中的宝藏:细胞外RNA
血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。产前基因筛查是血液检测的一个重要应用,不过其他循环生物学指标正在受到越来越多地关注,比如甲基化、RNA、微囊泡和外泌体。为了帮助大
血液中的宝藏:细胞外RNA
血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。产前基因筛查是血液检测的一个重要应用,不过其他循环生物学指标正在受到越来越多地关注,比如甲基化、RNA、微囊泡和外泌体。为了帮助大家更好的分析
怎样将dna中的RNA祛除
去除DNA中的RNA应该用RNaseA(RNA水解酶A)以下资料来自百科:RNase A是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶.RNase A 对核糖核酸有水解作用,但对脱氧核糖核酸则不起作用。核糖核酸酶A 在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5' -磷酸二酯键的
电泳技术RNA电泳操作步骤
试剂: 琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。 步骤 一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc) 1. 称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。 2. 加700mL
RNA凝胶电泳试验操作步骤
1、将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍,晾干备用。 2、制胶:称取0.5g琼脂糖粉末,加入放有36.5mL的DEPC水(蒸馏水40ml)的锥形瓶中,加热使琼脂糖完全溶解。稍冷(60~70°)却后加入5ml的10x电泳缓冲液、8.5(9)ml的甲醛(+0.5μl溴化乙锭)。然后在胶槽中灌制凝胶,插好
化学实验室通风一般要求有哪些
实验室通风的要求如下:①实验室通风要求新风全部来自室外,然后100%排出室外,通风柜的排气不在室内循环.化学实验室换气要求每小时大于10次,实验室无人时换气可减少为6次.实验室通风柜设计数量要足够,并且不作为*的室内排风装置,仪器室或产生危险物质的仪器上部排风系统②实验室的补风一部分来自空调系统直接