表达β半乳糖苷酶噬菌体的噬菌斑分析
材料：LB或NZCYM顶层琼脂或琼脂糖，含有X-gal对于3ml顶层琼脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在临用前才加入已冷却的顶层琼脂（47℃）中。大肠杆菌铺平板细菌只有不是β-半乳糖苷酶的过量表达株，可采用任何支持特异性λ噬菌体裂解生长的大肠杆菌。细菌染色体上单拷贝lacZ基因的存在不影响噬菌斑的检测。方法：1. 将λ噬菌体原种于SM+明胶液稀释。2. 用10ul适当稀释的λ噬菌体感染0.1ml铺平板细菌。感染培养物37℃温育20min。3. 用3ml含X-gal的已熔顶层琼脂（47℃）至第一个试管，通过轻拍或轻微涡旋振荡混匀，随后倒入至琼脂平板上。4. 用剩下的噬菌体原种的稀释液......阅读全文
简述分子克隆化克隆的选择
①直接筛选：有些载体带有可辨认的遗传标记，能有效地将重组分子与本底区分。例如：有些λ噬菌体携带外源基因后形成的噬菌斑就会从原来的混浊变为清亮；还有些载体分子携带外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的颜色有明显变化，如蓝色变为无色；有些λ噬菌体能侵染甲菌而不能侵染乙菌，携带外源DNA片段后便能侵染乙菌，
噬菌体效价的测定实验
实验方法原理噬菌体的效价就是 1 ml 培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数，但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近 100％（—般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染），所以为了
噬菌体效价的测定
实验方法原理 噬菌体的效价就是 1 ml 培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数，但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近 100％（—般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感
微生物学技术：噬菌体的检查及效价测定
一、目的：1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。2. 学会检查噬菌体的方法。3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。二、原理：噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量
噬菌体的检查及效价测定（一）
一、目的：1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。2. 学会检查噬菌体的方法。3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。二、原理：噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量
CDNA文库筛选
（一）λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1．用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基（Y1088用于噬菌斑杂交，Y1090用于免疫筛选），于37℃振荡培养过夜。2．将过夜培养物以3000×g离心5min。3．分别用2ml λ-dil（10 mmol/L tris-Cl,
重组M13噬菌体克隆分析
实验方法原理 在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。 实验材料
重组M13噬菌体克隆分析
实验方法原理 在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。实验材料 重组 M13 噬菌体单链 DNAM13 噬菌体重组噬菌斑M13 噬菌体非重组载体噬菌斑大肠杆菌 F' 菌株试剂
重组M13噬菌体克隆分析
在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌
M13噬菌体液体培养
M13 噬菌体原种通常采用液体培养，感染细胞并不裂解而是缓慢生长形成稀悬液。接种几乎总是用一个新挑取的噬菌斑或单个噬菌斑获得的噬菌体颗粒悬液。感染细胞含 200 拷贝以上双链 RF DNA，每代分泌数百个噬菌体颗粒。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理M13 噬菌体原种通常采
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤（二）
四、实验步骤 1、噬菌体的诱导和裂解液的制备 （ 1 ） 供菌体的活化与培养：取一环供体菌，接种于盛有 5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中， 37 ℃培养 16 h 后，吸 0.5 ml 菌液，接种于盛有 4.5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中，继续培养 4-6 h 。 （
为什么噬斑可以检出纯化噬菌体
M13KO7噬菌体感染TG1，不见噬菌斑噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体.烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣.非裂解性的可以铺顶层琼脂板（可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案）,培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有
M13噬菌体液体培养
实验方法原理 M13 噬菌体原种通常采用液体培养，感染细胞并不裂解而是缓慢生长形成稀悬液。接种几乎总是用一个新挑取的噬菌斑或单个噬菌斑获得的噬菌体颗粒悬液。感染细胞含 200 拷贝以上双链 RF DNA，每代分泌数百个噬菌体颗粒。
M13噬菌体液体培养
实验方法原理 M13 噬菌体原种通常采用液体培养，感染细胞并不裂解而是缓慢生长形成稀悬液。接种几乎总是用一个新挑取的噬菌斑或单个噬菌斑获得的噬菌体颗粒悬液。感染细胞含 200 拷贝以上双链 RF DNA，每代分泌数百个噬菌体颗粒。实验材料 M13 噬菌斑大肠杆菌 F' 菌株仪器、耗材 LB
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 IPTG 抗原-抗体复合物检测试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液 放射
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合
CDNA文库筛选
CDNA文库筛选（一）λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1．用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基（Y1088用于噬菌斑杂交，Y1090用于免疫筛选），于37℃振荡培养过夜。2．将过夜培养物以3000×g离心5min。3．分别用2ml λ-dil（10 mmol/L
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
在典型的免疫筛选实验中，λ噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42°C 移到 37°C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备，通常有两种方法：① 平板裂解，这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法；② 小量液体培养，这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备
基因组重排的重组类型
基因重组是指一个基因的DNA序列是由两个或两个以上的亲本DNA组合起来的。基因重组是遗传的基本现象,病毒、原核生物和真核生物都存在基因重组现象。减数分裂可能发生基因重组。基因重组的特点是双DNA链间进行物质交换。真核生物,重组发生在减数分裂期同源染色体的非姊妹染色单体间,细菌可发生在转化或转导过程中
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤
噬菌体制备及定量的一般实验方案
大部分噬菌体展示方案都涉及这样一个基本步骤：从被感染的细菌中制备噬菌体或噬菌粒颗粒的储液（增殖），并滴定这些储液以测定有感染力的颗粒的浓度。对于噬菌体载体（以及辅助噬菌体），对于噬菌体载体（以及辅助噬菌体），要通过计数宿主菌菌苔上的噬菌体斑来测定这些可变颗粒的浓度。为了确保能得到一个能繁殖的噬菌体的
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
重组克隆筛选（酶切鉴定）
【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理；2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统，其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说，重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备，通常有两种方法：① 平板裂解，这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法；② 小量液体培养，这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。实验材料 λ 噬菌体原种大肠杆菌铺平板细菌试剂、试剂盒 氯仿SM仪器、耗材 LB 或
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备，通常有两种方法：① 平板裂解，这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法；② 小量液体培养，这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。
cDNA的筛选2
（三）免疫筛选制备Sepharose偶联细菌裂解液1.各用一个E.coli温度敏感溶源菌株（BTA 282（λgt11amp3）或BNN 97）单菌落接种于2×7.5ml培养基并于32℃生长过夜。2.过夜培养物用LB培养基稀释100倍，于32℃生长至OD600值为0.5。3.于45℃温育15min诱
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验（二）
方法λ噬菌体的平板培养1. 取适当大肠杆菌菌株的单克隆进行接种，按第 2 章方案 1 介绍的方法制备用于铺平板的培养细菌。2. 假定每个 90 mm 平皿和 150 mm 平皿分别可长出 2X104 个和 5X104 个噬菌斑，计算筛选文库所需平皿数。对应每个平皿准备一个无菌试管（13 mm
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
实验方法原理 当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶基因组 DNAλ 噬菌体包装混合物λ 噬菌体臂 DNA试剂、试剂盒 ATPSM 和 SM+ 明胶仪器、耗材