Insituhybridization
Note: Although it is possible to perform in situ hybridization on bleached embryos, it appears to reduced the strength of the signal. For best results, use albino females.in situ hybridization - Harland , R.M. 1991. Meth. Cell Biol. 36:685. The first time you use a particular probe it is worthwhile to preabsorb it. This takes about 24 h and dramatically increases the quality of the final product.&......阅读全文
In－situ－hybridization
Note: Although it is possible to perform in situ hybridization on bleached embryos, it appears to reduced the strength of the signal. For best results
Making－RNA－probes－for－in－situ－hybridization
Make DNA templates via PCR Day 1 It's preferable to start with constructs that contain RNA polymerase start sites (T3, T7, or SP6) which allow use
In－Situ－Hybridization－to－Somatic－Chromosomes－in－Drosophila
In Situ Hybridization to Somatic Chromosomes in Drosophila Abby F. Dernburg INTRODUCTION In situ hybridization was originally developed as a tech
Basic－Fluorescent－in－situ－Hybridization－(FISH)
实验概要 Fluorescence in situ hybridization method is a kind of physical map drawing method, use fluorescent element mark probe, to detect probe and s
Fluorescence－In－Situ－Hybridization－using－TSA™
实验概要This protocol describes steps for fluorescent in situ hybridization (FISH) to Drosophila embryos using Tyramide Signal Amplification (TSA™), and
荧光原位杂交（Fluorescence－in－situ－hybridization,FISH）
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病
荧光原位杂交（Fluorescence－in－situ－hybridization,FISH）（图）
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病
荧光原位杂交（Fluorescence－in－situ－hybridization,FISH）原理
2）标本变性①将制备好的染色体玻片标本于 50oC培养箱中烤片2～3h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。②取出玻片标本，将其浸在70～75oC的体积分数70％甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3min。③立即按顺序将标本经体积分数70％、体积分数90％和体积分数100％冰
双重和多重原位杂交(hybridization－in－situ)技术
为了在同一标本上或同一细胞内同时检测是否存在两种或两种以上的靶核酸序列。可应用双重或多重原位杂交技术．即以两种或多种标记探针与靶核酸杂交。然后利用不同的检测手段分别显示各种靶核酸的存在和分布。该技术与免疫组织化学技术中的双重或多重标记相似，除了探针本身的特异性外，对结果的干扰主要来自标记物及检测试剂
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（四）
（2）硝酸纤维素滤膜吸印。①将胶切成合适大小，切去右上角作为记号。②将胶放进盛有变性缓冲液（1.5mol/l NaCl, 0.5mol/L NaOH）的盘中轻摇动15min。③换到中和缓冲液（1mol/L Tris·HCl , pH8.0, 1.5mol/L NaCl）中轻摇动30min。④裁一张硝
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（二）
5．洗膜 取出塑料袋，用剪刀剪开，小心取出滤膜，立即浸入盛有2×SSC和 0.5%SDS溶液的盘中，室温下漂洗5min。再将滤膜移入2×SSC和0.1%SDS溶液中，室温下洗涤15min（轻轻摇动）。然后将滤膜移入 0.1×SSC和0.5%SDS溶液中；68℃轻轻摇动保温2h，更换缓冲液后继
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（六）
夹心杂交法可用滤膜和小珠固定吸附探针，使用小珠可更好地进行标准化试验和更容易对小量样品进行操作。Dahlen 等利用微孔板进行夹心杂交，可同时进行大量样品检测，他们先吸取DNA探针加到凹板中，然后用紫外线照射使其固定到塑料板上。用微孔板进行夹心杂交还可直接用于PCR技术。应用光敏生物标记探针
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（五）
⑦60伏电泳过夜。 ⑧取出凝胶，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室温下将胶浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增强转印。 ⑩室温下将胶浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min，使胶中和。
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（三）
（1）DAN斑点杂交①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上。每个样品一般点50μl（2～10μg DNA）。④将膜烘干，密封保存备用。（2）RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA（
原位杂交(In－Situ－Hybridization,ISH)与荧光原位杂交（一）
是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和分子病理学的常见技术之一，广泛应用于肿瘤生物学、血液病理学、遗传、微生物学、细胞和分子生物学、神经内分
COLONY－HYBRIDIZATION
COLONY HYBRIDIZATION 1) CUT 4 PIECES OF 3MM WHATMAN PAPER AND PLACE EACH ONE IN A SEPARATE CONTAINER(A CAFETERIA TRAY WILL PROBABLY WORK PERFECTLY).
Colony－Hybridization
ProcedurePrepare serial 10-fold dilutions of transformed bacteria in LB and spread 100 µL onto LB/Amp plates, as described in the Electroporation prot
细胞遗传学——原位杂交(ISH)
In Situ Hybridization· In Situ Hybridization (jsmith1@po-box.mcgill.ca)In situ hybridization, as the name suggests, is a method of localizing,
Microarray－Hybridization－Protocol
Introduction:One microarray set consists of 7 nylon membranes with 2.5 x 7.5 cm dimension. 2304 genes were spotted onto nylon membranes (Schleicher an
Principles－of－nucleic－acid－hybridization
Principles of nucleic acid hybridization5.2.1. Nucleic acid hybridization is a method for identifying closely related nucleic acid molecules within tw
ORNL－MICROARRAY－HYBRIDIZATION－PROTOCOLS
Direct labeling of total RNA with Cy3 and Cy5:A. MATERIALSRNeasy® Mini Kit (Qiagen; Cat # 74106) SuperScript II RT (200U/µL) (Life Technologies; Cat #
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
原位PCR
About in situ PCR (Applied Biosystems) Basic information about in situ PCR and its applications. The In Situ PCR: Amplification and Detection in
Detection－of－apoptotic－process－in－situ－using－immunocytochemical
1. INTRODUCTION Apoptosis was observed from invertebrates to lower and higher verterbrates, and intervenes both in physiological and in pathological
Whole－mount－TUNEL－analysis－of－Xenopus－embryos
Fixation and pretreatmentDejelly albino embryos carefully in 2% Cystein (pH 7.8).Remove the vitellin membrane with two pairs of tweezers (or c
Silver－Acetate－Autometallography－(AMG)
In the early eighties, a series of papers were published by Gorm DANSCHER, Aarhus, Denmark, to introduce a reliable and easy-to-handle technique for
什么是荧光原位杂交有什么用？
原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一种固相分子杂交的方法，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素
In－Situ－Cell－Death－(Apoptosis)－Detection－by－TUNEL－labeling
Protocol for Frozen Sections:Warm 150ml 4% Paraformaldehyde/1x PBS to RT. Fix slides in it, 20 min., RT.1x PBS rinse, 2 times.1x PBS, 30 min., RT. Beg
cDNA
· cDNA Synthesis (Crawford Lab)mRNA can be converted into DNA (copy DNA, cDNA) by annealing oligo-dT to the 3' poly-A tail that occurs on