生物素酰化探针的检测实验
比色法 化学发光法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒 磷酸酶缓冲液 封阻液 牛血清蛋白 TE NBT 仪器、耗材 离心机 分光光度计 摇床 实验步骤 1. 用DNA稀释缓冲液,稀释生物素酰化标准D......阅读全文
生物素酰化探针的制备实验
切口平移法 随即寡核苷酸引物合成法 实验材料 DNA 试剂、试剂
生物素酰化探针的检测实验
比色法 化学发光法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
生物素酰化探针的制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤 1. 混合以下物质于100 μl 反应体积:(1)10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液(2)10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP
生物素酰化探针的检测实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 磷酸酶缓冲液封阻液牛血清蛋白TENBT仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 用DNA稀释缓冲液,稀释生物素酰化标准DNA,浓度为0、1、2、5、10和20 pg/μl。以同样稀释液处理待测DNA。2. 对干硝酸纤维素滤膜:每个稀释度取1 μl 点膜,在80
生物素酰化探针的检测实验——比色法
与放射性标记探针的比活不同,生物素标记探针的可检出性在于每千碱基对中掺入的生物素分子的数量,它可用比色法检测。实验材料DNA试剂、试剂盒磷酸酶缓冲液封阻液牛血清蛋白TENBT仪器、耗材离心机分光光度计摇床实验步骤1. 用DNA稀释缓冲液,稀释生物素酰化标准DNA,浓度为0、1、2、5、10和20
生物素酰化探针的制备实验——切口平移法
在标准的切口平移实验体系中,生物素-11-dNTP取代了dNTP,DNA酶I 的浓度调整到可生成长100~500个核苷酸的范围,其他生物素酰化的核苷酸也可代替生生物素-11-dNTP。实验材料DNA试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材注射器电
生物素酰化探针的检测实验——化学发光法
实验材料DNA试剂、试剂盒生物素磷酸酶仪器、耗材紫外灯离心机实验步骤1. 用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上,样品面朝上,放进温箱内12~80℃放15~30 min 或温室晾干过夜。 2. 将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下,用最适的时间交联。3. 用生物素探针与膜杂交,用适当强度
生物素酰化探针的制备实验——随即寡核苷酸引物合成法
实验材料DNA试剂、试剂盒dNTP生物素klenow酶TEEDTALiCl乙醇仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 在1. 5 ml 离心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA,加水至总体积为34 μl。 2. 在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min,稍加旋离。3. 按顺序加入下
杂交信号的放大实验——生物素酰化信号
实验材料杂交信号试剂、试剂盒生物素SSC荧光素亲和素仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。 2. 如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去盖玻片, 并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Triton X-1
光敏生物素核酸探针原位杂交组化程序
(1)石蜡切片脱蜡入水后,置0.1mol/l PBS pH7.2冲洗5min;冰冻切片直接入PBS冲洗5min。 (2)0.1mol/l 甘氨酸PBS冲洗5min。 (3)0.4%Trition X-100 PBS 冲洗15min。 (4)蛋白酶K1μg/ml(0.1mol/l Tris –H
常用DAN探针制备的方法介绍光敏生物素标记
光敏生物素标记(photobiotin labeling)是Forster(1985)等报道的核酸探针制备方法。光敏生物素是一种可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸盐很容易溶于水,在水溶液中将光敏生物素乙酸盐与需要标记的核酸混合,用强的可见光照射,就可将生物素标记在单链或双链的 DNA 或 RNA
PCR法DNA探针生物素标记试剂盒产品说明
PCR法DNA探针生物素标记试剂盒产品特点:一站式,本试剂盒提供经过优化的试剂,不需要用户自己摸索。2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针,足够多次杂交实验
用非同位素探针进行原位杂交和检测实验——杂交信号放大
实验材料载有样本的载玻片试剂、试剂盒1〜3μg ml生物素酰化抗亲和素抗体 溶于4×SSC 1% (m V) BSA (组分 V)生物素信号放大溶液:含2〜5μg ml荧光素亲和素DCS 溶于 4×SSC 1% (m V) BSA (组分V)仪器、耗材广口瓶载玻片湿盒实验步骤1) 用生物素酰化探针与
抗生物素蛋白生物素染色
中文名称抗生物素蛋白-生物素染色英文名称avidinbiotin staining定 义通过标记抗生物素蛋白与生物素高亲和性结合,检测大分子的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
杂交信号的放大实验
实验材料 杂交信号试剂、试剂盒 生物素SSC荧光素亲和素仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1. 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。 2. 如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去盖玻片, 并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Trit
酰化的概念
如光化学烟雾形成过程中大气中的碳氢化合物经氧化、硝化化及酰化而生成过氧酰基硝酸酯,它们是大气氧化剂污染物。
什么是酰化?
酰化,又称酰基化,酰化作用。是指底物与酰化试剂在一定的条件下将酰基引入底物分子中的过程。酰化试剂的种类比较多,例如羧酸,羧酸酯,酸酐,酰氯等。根据酰化试剂酰化能力的大小选择不同的条件进行酰化反应。酰化之后的产物是酮(醛)、酰胺和酯等化合物,其机理包括双分子亲核取代反应和单分子亲核取代反应。常见的
抗生物素蛋白生物素染色方法介绍
中文名称抗生物素蛋白-生物素染色英文名称avidinbiotin staining定 义通过标记抗生物素蛋白与生物素高亲和性结合,检测大分子的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
非同位素标记探针的酶法检测实验——碱性磷酸酶检测法
实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺碱性磷酸酶缓冲液仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1. 生物素酰化探针与切片杂交、洗涤、封闭,然后与链亲和素溶液温育(“辣根过氧化物酶法检测”,步骤1~4)。 2. 由0.1% Tween 20/PBS中取出玻片,吸去残液,勿
生物素概述
作为一些酶的辅基而起辅因子作用。它以共价键的形式通过酰胺键和脱辅基酶蛋白的一个专一赖氨酰残基的ε- 氨基相连。ε-N-生物素酰-L-赖氨酸称为生物胞素(biocytin) (图4[生物素作为辅基的形式])。 需要生物素的酶类能催化二氧化碳的参入 (羧化作用)或转移,因而生物素和二氧化碳的固定密
抗生物素蛋白生物素染色的方法介绍
中文名称抗生物素蛋白-生物素染色英文名称avidinbiotin staining定 义通过标记抗生物素蛋白与生物素高亲和性结合,检测大分子的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
生物素抗生物素蛋白系统的方法介绍
中文名称生物素-抗生物素蛋白系统英文名称biotinavidin system定 义利用生物素与待检测的示踪分子(如核苷酸、多肽等)或能与待检测物质结合的分子(如抗体等)相连接,再以抗生物素蛋白与易于检测的分子(如荧光素、能催化成色反应的酶等)相连接,分析生物体内微量物质的检测系统。应用学科生物化
什么是乙酰化?常见的乙酰化剂
乙酰化就是将有机化合物分子中的氮、氧、碳原子上引入乙酰基CH3CO-的反应,最常见的是组蛋白乙酰化。常用氯乙酰和醋酸酐等作为乙酰化剂。
非同位素标记探针酶法检测实验——辣根过氧化物酶法检测
实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片(“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步)。2. 由1×SSC中取出玻片,尽可能吸去残留玻片上的缓冲液,但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻
非同位素标记探针的酶法检测
实验材料 探针试剂、试剂盒 PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材 盖玻片水浴锅实验步骤 1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片(“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步)。2. 由1×SSC中取出玻片,尽可能吸去残留玻片上的缓冲液,但不要使玻片干涸。加200 μl 封
豆蔻酰化的定义
中文名称豆蔻酰化英文名称myristoylation定 义学名:十四酰化。豆蔻酸作为酰化基团进行的酰化作用。是真核生物蛋白质的一种修饰形式,发生在多肽链N端的甘氨酸残基上。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),脂质(二级学科)
什么是酰化反应
酰化反应或称(酰基化反应),为有机化学中,氢或者其它基团被酰基取代的反应,而提供酰基的化合物,称为酰化剂。 酰化反应可用下列通式表示:RCOZ+SH → RCOS+HZ 通式中RCOZ为酰化剂,Z代表OCOR,OH,ORˊ等;SH为被酰化物,S代表RO 、R″NH、Ar等。
抗生物素蛋白生物素染色方法的功能介绍
中文名称抗生物素蛋白-生物素染色英文名称avidinbiotin staining定 义通过标记抗生物素蛋白与生物素高亲和性结合,检测大分子的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
乙酰化的概念及常见的乙酰化剂
乙酰化就是将有机化合物分子中的氮、氧、碳原子上引入乙酰基CH3CO-的反应,最常见的是组蛋白乙酰化。常用氯乙酰和醋酸酐等作为乙酰化剂。
生物素链霉抗生物素蛋白系统的方法介绍
中文名称生物素-链霉抗生物素蛋白系统英文名称biotin streptavidin system定 义利用生物素与链霉抗生物素蛋白有很高亲和结合能力设计的检测分析系统。与生物素-抗生物素蛋白系统相似,但链霉抗生物素蛋白表面所带正电荷少,且不含糖基,在实验中非特异性结合远低于抗生物素蛋白。应用学科生