寡核苷酸指导的单链DNA诱变实验
实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌 试剂、试剂盒 ATP PE1缓冲液 PE2 缓冲液 噬菌体 T4 DNA 连接酶 噬菌体 T4 多核苷酸激酶 大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段 M13 噬菌体通用测序引物 含 4 种 dNTP 的 dNTP 溶液 诱变的 M13 噬菌体 单链 DNA 模扳 诱变的寡核苷酸引物 培养液 2XY......阅读全文
寡核苷酸指导的单链－DNA－诱变实验
实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌 试剂、试剂盒 ATP
寡核苷酸指导的单链－DNA－诱变实验
实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌试剂、试剂盒 ATPPE1缓冲液PE2 缓冲液噬菌体 T4 DNA 连接酶噬菌体 T4 多核苷酸激酶大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌体通用测序引物含 4 种 dNTP 的 dNTP 溶液诱变的 M
寡核苷酸指导的单链－DNA－诱变实验
本文介绍了由 Zoller 和 Smith 的双引物技术（1984,1987) 结合 Kunkel 的诱变体产量富集方法（1985) 构成的经典方案。本方案中使用的单链 DNA 模板含有较高的尿嘧啶残基，因为它们是从生长于 dut 和 ung 基因突变大肠菌中的 M13 噬菌体中制备的（见方案 1)
简并寡核苷酸诱变实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机分光光度计实验步骤 1. 设计寡核苷酸，其3‘端含有由8个核苷酸组成的回文结构，且包含某一限制性内切酶的识别位点；如果可能的话，5’端也应有一含某个限制性内切酶位点的序列。中间区段则应含目
简并寡核苷酸诱变实验
本方法的一个重要特点就是将单链的简并寡核苷酸转变成同源双链分子后直接克隆进常规载体。由于不同的寡核苷酸可通过其3’末端的回文结构杂交，因此，寡核苷酸实际上起互为引物的作用，在大肠杆菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS
简并寡核苷酸诱变实验
小段DNA序列中产生大量突变 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
寡核苷酸介导的诱变实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中，60℃温育5 min，以杀灭细菌细胞，剧烈振荡以释放琼脂中的噬菌体，
寡核苷酸介导的诱变实验
基本方案 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
随机寡核苷酸诱变的概念
中文名称随机寡核苷酸诱变英文名称random oligonucleotide mutagenesis定 义通过合成一系列突变寡核苷酸引物对基因组某个区域进行聚合酶链反应扩增，获得大量突变的DNA，以研究突变对功能的影响。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
寡核苷酸介导的诱变实验
用突变的寡核苷酸引导模板的合成，从而改变DNA序列，突变效率可达50~80%。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材水浴锅电泳仪培养箱实验步骤1. 将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中
寡核苷酸定点诱变的概念
中文名称寡核苷酸定点诱变英文名称oligonucleotidedirected mutagenesis定 义人工获得特定核酸定点突变的一种方案。将需要改变的核苷酸置于一段合成的寡核苷酸中部，在单链噬菌体(如M13)模板上用克列诺酶合成有指定变化的负链，再通过噬菌体复制得到含突变的双链。应用学科生物
关于寡核苷酸引物诱变的介绍
寡核苷酸引物诱变是由加拿大生物化学家Michael Smith发明的一种基因定点诱变方法。其基本原理是：合成一段寡聚脱氧核糖核苷酸作为引物，其中含有需要改变的碱基，使其与带有目的基因的单链DNA配对，合成的引物除短的错配区外，与目的基因完全互补，然后用DNA聚合酶延伸引物，完成单链DNA的复制。
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材 培养箱水浴锅实验步骤 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在质粒的目的区域产生一嵌套式的5’或3端'缺失突变体。首先在目的序列附近用一限制酶使质粒线性化，在用Bal 31消化时，应确定其切割效
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA 试剂、试剂盒 雾水乙醇 EDTA T4 DNA连接酶 TE
DNA的接头分区诱变实验
Linker scanner mutations （接头分区突变）：体外在限制性片段加上位点，使两个DNA分子发生重组产生，结果在重组的位点加上连接序列。实验材料DNA试剂、试剂盒雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材培养箱水浴锅实验步骤1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核
分子遗传学词汇寡核苷酸定点诱变
中文名称：寡核苷酸定点诱变英文名称：oligonucleotide-directed mutagenesis定 义：用人工合成的寡核苷酸在特定位点导致突变。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
DNA的诱变和甲基化
· In Vitro Mutagenesis Using Altered Sites (Bowtell Lab) In vitro Mutagenesis with dut ung single stranded DNA (Hahn Lab)· Site-direct
分子遗传学词汇盒式诱变
中文名称：盒式诱变外文名称：cassette mutagenesis原 料：人工合成有突变功能的寡核苷酸定义：所谓盒式诱变(cassette mutagenesis)，就是利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段，即所谓的寡核苷酸盒(oligonucleotide cassette)，取代
盒式诱变的简介
盒式诱变(cassette mutagenesis)是一种定点诱变技术，其方法是利用一段人工合成的具有突变序列的双链寡核苷酸片段，取代野生型基因中相应序列。这种诱变的双链寡核苷酸片段是由两条人工合成的寡核苷酸链组成的，当它们退火时，会按照设计要求产生出克隆需要的粘性末端。这些合成的寡核苷酸片段就
关于盒式诱变的基本介绍
所谓盒式诱变(cassette mutagenesis)，就是利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段，即所谓的寡核苷酸盒(oligonucleotide cassette)，取代野生型基因中的相应序列。盒式诱变是一种定点突变技术，将靶基因的一段DNA删掉，并用人工化学合成所具有的突变核苷酸
定点诱变与盒式诱变的比较介绍
构建一个位点导向的文库涉及使用含有一个或多个简并密码子的合成DNA片段替代一个基因片段。这可以通过双链盒式诱变或单链寡核苷酸定向诱变来实现。我们相对倾向于寡核苷酸定向诱变，因为不同于盒式诱变，它不需要在目的区域附近有独特的限制性酶切位点，并且构建一个文库只需要一个寡核苷酸片段。因此，这个方法相当
重叠延伸产生特异位点诱变实验
重叠延伸法进行特异位点诱变需要四种引物（请见图 13-4)(Higuchi et al.1988, Hetal.1989)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒扩增缓冲液热稳定 DNA 聚合酶琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶寡核苷酸引物模
重叠延伸产生特异位点诱变实验
试剂、试剂盒 扩增缓冲液 热稳定 DNA 聚合酶 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶 寡核苷酸引物 模板 DNA
重叠延伸产生特异位点诱变实验
试剂、试剂盒 扩增缓冲液热稳定 DNA 聚合酶琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶寡核苷酸引物模板 DNA仪器、耗材 带屏障装置的自动移液器吸头微型离心管酶可调式移液器可按所需扩增条件设定程序的热循环仪实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液的成分及所需试剂请见附录 1。将贮存液稀释释到适当的浓度。10x 扩
以双链－DNA－为模板的体外诱变：用－DpnⅠ选择
实验材料 带 hsdR17 基因型的感受态大肠杆菌菌株 试剂、试剂盒 ATP 含有四种 dNTF 的混合溶液
以双链－DNA－为模板的体外诱变：用－DpnⅠ选择突变体实验
实验材料 带 hsdR17 基因型的感受态大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 ATP含有四种 dNTF 的混合溶液诱变缓沖液NaOHNaACTE噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4 多核苷酸激酶DpnI 限制性内切酶热稳定 DNA 聚合酶琼脂糖凝胶寡核苷酸引物质粒 DNA仪器、耗材 带障蔽的自动微量移液器用
以双链－DNA－为模板的体外诱变：用－DpnⅠ选择突变体实验
本方案和方案 4 是以变性质粒 DNA 为模板，使用两条寡核苷酸和高保真聚合酶引导 DNA 合成。本方案中，经多轮热循环全长双链质粒 DNA 将以线性形式扩增，产生一种 DNA 双链上带交错缺口的突变质粒（Hemsleyetal.1989)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J
GeneLink－未修饰的DNA寡核苷酸的价格表
Gene Link寡核苷酸适用于要求苛刻的应用和一致的结果。我们认为，重视时间并且没有因寡核苷酸质量而导致实验失败的空间的研究人员应考虑使用Gene Link。我们针对每种寡核苷酸的众多质量控制步骤可确保您放心。 Gene Link Oligo合成部门不是“寡头工厂”。在合成过程中以及在通
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
经典的 Kunfcel 寡核苷酸指导的诱变方法利用大肠杆菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特异地筛除去含尿嘧啶碱基的 DNA 的选择性作用（请参考寡核苷酸诱变信息栏）。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵 寡核苷酸杂交溶液 寡核苷酸预杂交液 TE 噬菌体T4多核