随机寡核苷酸诱变的概念

中文名称随机寡核苷酸诱变英文名称random oligonucleotide mutagenesis定 义通过合成一系列突变寡核苷酸引物对基因组某个区域进行聚合酶链反应扩增,获得大量突变的DNA,以研究突变对功能的影响。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)......阅读全文

随机寡核苷酸诱变的概念

中文名称随机寡核苷酸诱变英文名称random oligonucleotide mutagenesis定  义通过合成一系列突变寡核苷酸引物对基因组某个区域进行聚合酶链反应扩增,获得大量突变的DNA,以研究突变对功能的影响。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

寡核苷酸定点诱变的概念

中文名称寡核苷酸定点诱变英文名称oligonucleotidedirected mutagenesis定  义人工获得特定核酸定点突变的一种方案。将需要改变的核苷酸置于一段合成的寡核苷酸中部,在单链噬菌体(如M13)模板上用克列诺酶合成有指定变化的负链,再通过噬菌体复制得到含突变的双链。应用学科生物

简并寡核苷酸诱变实验

实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机分光光度计实验步骤 1.  设计寡核苷酸,其3‘端含有由8个核苷酸组成的回文结构,且包含某一限制性内切酶的识别位点;如果可能的话,5’端也应有一含某个限制性内切酶位点的序列。中间区段则应含目

简并寡核苷酸诱变实验

本方法的一个重要特点就是将单链的简并寡核苷酸转变成同源双链分子后直接克隆进常规载体。由于不同的寡核苷酸可通过其3’末端的回文结构杂交,因此,寡核苷酸实际上起互为引物的作用,在大肠杆菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS

简并寡核苷酸诱变实验

小段DNA序列中产生大量突变             实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒

寡核苷酸介导的诱变实验

实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1.  将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中,60℃温育5 min,以杀灭细菌细胞,剧烈振荡以释放琼脂中的噬菌体,

寡核苷酸介导的诱变实验

基本方案             实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒

寡核苷酸介导的诱变实验

用突变的寡核苷酸引导模板的合成,从而改变DNA序列,突变效率可达50~80%。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒PEGTEATP寡核苷酸诱变引物T4多核苷酸激酶EDTASSC仪器、耗材水浴锅电泳仪培养箱实验步骤1.  将一个单链噬菌体产生的噬斑转移至含有1 ml 灭菌TY培养基的1.5 ml 微量离心管中

分子遗传学词汇随机诱变

中文名称:随机诱变英文名称:random mutagenesis定  义:非定点地诱发基因产生突变。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

复合诱变的概念

复合诱变包括:两种或多种诱变剂的先后使用,同一种诱变剂的重复作用和两种或多种诱变剂的同时使用.普遍认为,复合诱变具有协同效应.如果两种或两种以上诱变剂合理搭配使用复合诱变较单一诱变效果好. 如贺筱蓉等采用紫外同平板梯度浓度的亚硝基胍、纯铜蒸气混合诱变,筛选到高产菌株效价提高了53.2%,其原理可能是

诱变育种的概念

是人为的措施诱导植物遗传基因产生变异,然后在产生变异的植株中按照需要选育出新的优良品种。诱变育种常用的有物理因素和化学因素,物理因素如各种射线、微波或激光等处理诱变材料,习惯上称之为辐射育种;化学因素是运用能导至遗传物质改变的一些化学药物——诱变剂处理诱变材料促使变异,常称之为化学诱变。

关于寡核苷酸引物诱变的介绍

  寡核苷酸引物诱变是由加拿大生物化学家Michael Smith发明的一种基因定点诱变方法。其基本原理是:合成一段寡聚脱氧核糖核苷酸作为引物,其中含有需要改变的碱基,使其与带有目的基因的单链DNA配对,合成的引物除短的错配区外,与目的基因完全互补,然后用DNA聚合酶延伸引物,完成单链DNA的复制。

分子遗传学词汇局部随机诱变

中文名称:局部随机诱变英文名称:localized random mutagenesis定  :一种在体外将克隆的基因专一性地突变后用于置换受体生物中该基因的野生型拷贝的实验技术。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

随机引物法(利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记)

            实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。 实验材料

寡核苷酸指导的单链-DNA-诱变实验

            实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌 试剂、试剂盒 ATP

寡核苷酸指导的单链-DNA-诱变实验

实验材料 适用于转化的大肠杆菌菌株 用于转化的大肠杆菌 TG1 感受态菌试剂、试剂盒 ATPPE1缓冲液PE2 缓冲液噬菌体 T4 DNA 连接酶噬菌体 T4 多核苷酸激酶大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠKlenow 片段M13 噬菌体通用测序引物含 4 种 dNTP 的 dNTP 溶液诱变的 M

寡核苷酸指导的单链-DNA-诱变实验

本文介绍了由 Zoller 和 Smith 的双引物技术(1984,1987) 结合 Kunkel 的诱变体产量富集方法(1985) 构成的经典方案。本方案中使用的单链 DNA 模板含有较高的尿嘧啶残基,因为它们是从生长于 dut 和 ung 基因突变大肠菌中的 M13 噬菌体中制备的(见方案 1)

随机引物的概念和用途

随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中所需要的特异性通常用此引物合成的cDNA。

寡核苷酸阵列的概念

微阵列(DNA Microarray)也叫寡核苷酸阵列(Oligonucleotide array),是人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)的逐步实施和分子生物学的迅猛发展及运用的产物,它是生物学家受到计算机芯片制造和广为应用的启迪,融微电子学、生命科学、计算机科学和光

位点专一诱变的概念

中文名称位点专一诱变英文名称site-specific mutagenesis;site-directed mutagenesis定  义使DNA分子中某一特定的核苷酸序列发生改变。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

随机引物法(在融化琼脂糖存在下利用随机寡核苷酸延...

随机引物法(在融化琼脂糖存在下利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记)实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒 醋

分子遗传学词汇寡核苷酸定点诱变

中文名称:寡核苷酸定点诱变英文名称:oligonucleotide-directed mutagenesis定  义:用人工合成的寡核苷酸在特定位点导致突变。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针

            实验方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。 实验材料

用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针

实验方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。实验材料 反转录酶反转录酶缓冲液随机脱氧核苷酸引物模板 mRNA试剂、试剂盒 乙酸铵DTTEDTA乙醇HClNaOH酚氯仿胰 RNA 酶抑制剂SDS Tris

用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针

本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA

盒式诱变的简介

  盒式诱变(cassette mutagenesis)是一种定点诱变技术,其方法是利用一段人工合成的具有突变序列的双链寡核苷酸片段,取代野生型基因中相应序列。这种诱变的双链寡核苷酸片段是由两条人工合成的寡核苷酸链组成的,当它们退火时,会按照设计要求产生出克隆需要的粘性末端。这些合成的寡核苷酸片段就

用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记

实验方法原理 此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后,在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下,富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的二次合成反应,标记成高比活性的探针。由 于第一轮反应中

用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记

            实验方法原理 此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后,在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下,富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的

用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记

此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后,在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下,富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的二次合成反应,标记成高比活性的探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培

基因突变的诱变机制定向诱变

利用重组DNA技术使DNA分子在指定位置上发生特定的变化,从而收到定向的诱变效果。例如将DNA分子用某一种限制性核酸内切酶处理,再用分解DNA单链的核酸酶S1处理,以去除两个粘性末端的单链部分,然后用噬菌体T4连接酶将两个平头末端连接起来,这样就可得到缺失了相应于这一限制性内切酶的识别位点的几个核苷