非标记抗体免疫电镜操作步骤
1．经典法（1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H2 O混悬，用3%磷钨酸(pH6.0)负染20Sec～30Sec，滴加于400目铜网Fomnvar膜上，用滤纸从铜网边缘轻轻吸去多余的负染液。（6）在透射电镜下4×104 倍观察。2．快速法(琼脂扩散法)（1）同经典法(1)、(2)步骤，制备免疫复合物。（2）以生理盐水或pH 7.2巴比妥缓冲液制备1%琼脂糖，趁热浇注于洁净的载玻片上，每片3ml，待冷却凝固后，在凝胶面上等距离放置直径4mm玻璃珠数粒，再于凝胶面上浇注1%琼脂糖2ml～3ml，冷却凝固后，取出玻璃珠，使凝胶形成凹孔。（3）将普通滤纸剪成2×3cm大小，......阅读全文
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术介绍
（1）新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。（2）PBS（pH7.5）冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。（3）将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1min 。（4）制做断裂面复型。
免疫标记电镜技术标本制备的要求
为保持组织的抗原性，固定剂不宜过强。 1.包埋前染色 优点是切片染色前不经过锇酸固定、脱水及树脂包埋等过程，抗原未被破坏，易于获得良好的免疫反应。特别适用于含抗原量较少的组织。 2.包埋后染色 优点是超微结构保存较好，方法简便，阳性结构有高度的可重复性，能在同一张切片上进行多重免疫染色。
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
分子标记—AFLP原理和操作步骤
实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后
分子标记—AFLP原理和操作步骤
AFLP可用于：（1）构建遗传连锁图谱；（2）利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记；（3）AFLP辅助的轮回选择育种；（4）研究基因表达与调控；（5）分类和进化研究；（6）甲基化研究等。实验方法原理AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。 （二）放射免疫检测与免疫放射检测(即IRMA与RIA)的区别 见表13－4。 表13－
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。 见表1。表1 IRMA与RIA的区别IRMARIA标记物质抗体抗原标记物用量过量限量反应方式直接结合竞争
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。（二）放射免疫检测与免疫放射检测(即IRMA与RIA)的区别见表13－4。表13－4 IRMA与RIA的区别
酶免疫技术抗体的酶标记方法
用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化
免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术
实验方法原理目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocynate，FITC）或罗达明（Lissamine rhodamine B200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧
简介透射镜电镜的操作步骤
开循环水。由于新电镜循环水不关，这步可省。但要注意水温是否正常。打开电源开关。IN/OUT。从来都是开着的，这步也可省。打开荧屏电源；检查荧屏第一页：确认①电压是否在120KV。②确认样品位置“specimen position”为原点：=0，0，0，如果不是原点，使用观察窗左侧“SPEC CO
胶体金标记实验操作步骤
1、蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备 胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。 （
分子标记方法：AFLP原理和操作步骤
AFLP原理：AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘
检测抗体间接法操作步骤
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下： ⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。 ⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗
免疫反应的操作步骤
1、将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。2、将一抗用TBST稀释至适当浓度（在1.5ml离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝下放于
免疫反应的操作步骤
1、将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。2、将一抗用TBST稀释至适当浓度（在1.5ml离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝下放于
免疫反应的操作步骤
1、将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。2、将一抗用TBST稀释至适当浓度（在1.5ml离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝下放于
病毒免疫荧光实验_荧光素标记抗体
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法：较为常用，具体步骤是：1) 抗体溶液的制备：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素：根据待标记抗体的总量，按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白
免疫电镜胶体金标记法（简称金标法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金标记法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，载于200～300网孔的镍网上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蜡板上，将网的载片面轻浮于液滴上10min至1h；（3）双蒸水洗3次，每次10分钟。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛双蒸水的注射器沿镍网面冲洗，水流
双抗体夹心法的操作步骤
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶
间接法测抗体的操作步骤
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体
双抗体夹心法的操作步骤
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶
抗体标记方法
Biotinylation of Antibody ( Contributed by Nanci Donacki) Antibody labeling (House Ear Institute)Labeling protocols using affinity markers. Coupling
酶标记抗体
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(
标记抗体的应用技术——免疫斑点试验
实验方法原理硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力，在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而，将抗原吸附于纤维素膜后，就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后（即可与膜上的抗原结合），然后再加入带有标记物的抗体，使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。
非标记抗体免疫酶组织化学实验
实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」，将它们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。其基本流程为：抗原+特异性抗体 → 第二抗体（桥抗）→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2（显色）。因为桥抗
免疫荧光技术操作步骤
基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS)：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油
细胞免疫荧光操作步骤
1.细胞爬片；2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；3.PBS漂洗5min；4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；5.PBS漂洗2次，每次5min；6.1%BSA封闭30min；7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；8.