labonchip对PCR的一些个人体会
PCR应该是分子生物学的基本，记得刚进实验室时，大家的口头禅就是：今天你P了吗?那怎样才能做好PCR，结合个人体会，我谈谈自己的看法。论坛里高人很多，说得不对的还请多多指教和包含。当然，若能给新人朋友们带去一些帮助，那我本贴的目的就算是达到了。PCR设计的一般套路1） 目的基因或目的基因片段对象是什么？对于原核生物来说，由于不存在外显子和内含子，因此还比较简单，直接从genebank把序列调出来就可以，个人建议以FASTA格式（txt文本方式）保存，这可方便后面的primer或danman等软件调用。而对于真核生物来讲，那你就要注意了。对象如果是DNA基因（即直接从基因组中调出），那你就要从genebank中调DNA序列而不是mRNA基因序列了。如果是做RT-PCR，那就要掉mRNA序列。对于细菌来讲，由于存在种和型的分类，那这是你就要注意了，你到底是想做哪个水平的研究（是属？还是种？还是某某型），根据你的情况，调出相应基因。2......阅读全文
labonchip对PCR的一些个人体会
PCR应该是分子生物学的基本，记得刚进实验室时，大家的口头禅就是：今天你P了吗?那怎样才能做好PCR，结合个人体会，我谈谈自己的看法。论坛里高人很多，说得不对的还请多多指教和包含。当然，若能给新人朋友们带去一些帮助，那我本贴的目的就算是达到了。PCR设计的一般套路1） 目的基因或目的基因片段对象是什
关于RNA酶保护试验的个人体会
RNA酶保护试验实际上是很早就出现的技术。在1982年出版的第一版圣经（分子克隆）还没有提到。在1989年出版的第二版中已经出现：7.71 Mapping of RNA with Ribonuclease and Radiolabeled RNA(可参见中译本P383-387）。在2001年出版的第
western－blotting的一些个人经验
个人经验,仅供参考:1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差,不过我们试过几种奶粉,有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉,多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大,不太容易溶解.2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上,现在我做的时候根本没有剪齐,最主要的是赶气泡,这是关键
关于血球维修的一些体会（三）
近两个星期有两个工程师询问了相同的问题，我给出了相同的处理方案处理的结果是不同的，第一位是资深工程师经验丰富的费工，第二位是刚入道不久的工程师。 故障是这样的，ABX M60，PLT本地高（第一位的数值是90且稳定， 第二位数值是700，不稳定，有正常的时候。两者血小板图形都很低且很尖
关于血球维修的一些体会（二）
4）废液排除不干净，像东亚，丹能，雅培等设备都有一个或者几个废液池，先用负压把计数池和冲洗后的废液吸到这里，然后等待正压的到来排出机器外。计数池的废液不能排出干净，那么就要考虑负压问题和计数池的密封和泄漏，废液池不能排出干净就要考虑正压，两者都不能排出干净就都要考虑，检查的重点首先就是废
关于血球维修的一些体会（一）
经过了几年的血球维修，逐步摸索了一套不成熟的认识，写出来请大家批评指正。一、血球的类型1、血球在界标类型方面分为固定界标和浮动界标。2、在采样方面分为自动进样和手工进样还有半自动进样，所谓半自动就是像HCYEL，CD1200，ABX M60 CT，等等这样的有个进样拖架 ，需要把样品试管方到
流式细胞仪的使用（个人体会）
相关专题实验室的CT-流式细胞仪流式细胞仪(flow cytometry，FCM)是集激光技术、电子技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光 技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器，具有灵敏度高、重复性好、特异性强、方法灵活、分析速度快等优点。我院自2000～2002年用美国BD公司生产的FA
预激综合征临床诊治个人体会
预激综合征是指心电图呈预激表现，临床上有心动过速发作。心电图的预激是指心房冲动提前激动心室的一部分或全体。发生预激的解剖学基础是，在房室特殊传导组织以外，还存在一些由普通工作心肌组成的肌束。连接心房与心室之间者，称为房室旁路或Kent束。在临床的个人体会：预激综合征是由于在房室之间存在着特殊附
分享一些椎管内穿刺个人见解
对于麻醉新手来说，椎管内麻醉是比较常见的一种麻醉方式，而对于椎管内穿刺，更是很多新手所面临的难题。本人从事麻醉近十年，现在把穿刺中一些经验分享给各位，希望各位多多指教！互相学习！1、摆好**椎管内穿刺成功的第一步，就是摆好**！尽量让患者屈膝，身体弯曲成一条“虾”的形状，目的是把棘突间隙拉开，为穿刺
RTPCR一些心得
从RNA到电泳鉴定一、RT-PCR原理：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA 作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA 为模板，用VI 型胶原蛋白的α1 链的编码序列的特异性引物进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR 使RNA
威海:让每个人体会到从身边事做起的价值
对于三星电子（山东）数码打印机有限公司的环保志愿者孙海林来说，每一次的环保志愿活动，都是一次难忘的经历。 “每次参加环保志愿活动，在海滩、河岸看到垃圾被清理后，心里都感到很满足。”孙海林说。 每个月的“环保活动日”，已是自2008年环保志愿大队成立以来雷打不动的铁规章了。 而像孙海林这样的
关于全血的保存DNA提取pcr个人经验
做了好多DNA提取保存，吃了很多亏给大家点建议吧：（有疑问可以回帖，有时间我会回答如果我知道）。 血液保存： EDTA抗凝最好，肝素也可以不过经常会影响后续试验，一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少，再长时间我也没有试过，注意解冻一次大概损失20%左右（
PCR仪使用中的一些小技巧
PCR仪使用中的一些小技巧1.仔细阅读仪器使用说明书，这样可以充分发挥仪器的性能并避免发生错误2.程序设计完成后，一定要仔细检查，以免出错造成损失3.常用的程序最好调用以前使用过的正确程序文件4.样品量较小时，最好在样品槽的两边各加上两排8联管，这样可使热盖平整，加热效果好，有利于效果的稳定性5.在
PCR仪使用中的一些小技巧
PCR仪使用中的一些小技巧1.仔细阅读仪器使用说明书，这样可以充分发挥仪器的性能并避免发生错误2.程序设计完成后，一定要仔细检查，以免出错造成损失3.常用的程序zui好调用以前使用过的正确程序文件4.样品量较小时，zui好在样品槽的两边各加上两排8联管，这样可使热盖平整，加热效果好，有利于效果的稳定
对糖尿病的中医认识及体会
西医学的糖尿病在中医上称之为消渴，是阴虚为本，燥热为标，主要症状是多饮、多尿、乏力、消瘦或尿有甜味。目前临床上降血糖药物西药较多，但是临床遇见很多患者，口服西药剂量增加，品种不断增多，血糖仍难以控制，所以我认为影响血糖水平的还有个人的气血阴阳水平，也就是中医所说的体质因素；下面把对糖尿病的中医认识及
PCR需要注意的一些问题
扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量（图24）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低，减少了较长产物的产量
PCR需要注意的一些问题
PCR需要注意的一些问题扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得zui佳产量）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低
对腹泻病原菌常规检验的几点体会
腹泻为临床常见疾病，据统计在我国腹泻属发病率最高的疾病之一，其中有引起的约占30%~50%。所以及时准确检出腹泻病原菌对发现传染源，控制疾病流行和有效的治疗病人都有很重要的意义。下面就我在临床见到的对如何提高腹泻病原菌的检出率谈几点体会： 1.采集合格标本，有利于提高检出率 良好
临床上对喉罩使用的心得体会
随着我院小儿疝气腹腔镜的开展，喉罩插管全麻开始不断使用，经过数月的喉罩使用中，个人对于喉罩有了一定的认识和体会，现在将其总结归纳如下，不足之处请各位老师批评指出： 1.喉罩的优点：喉罩的使用给临床麻醉医生带来了很大的方便，不仅临床上喉罩已经广泛用于急救通气、也用于短小手术代替气管插管全麻，还借助
对一些DNA提取方法的总结
有时候提DNA不是很顺，所以提出来大家讨论一下，因为我是做微生物的，我首先提供一下关于微生物的DNA 提取方法，大家觉的有可以改进的地方，欢迎讨论！！细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (p
谈谈个人对三大常规的镜检的心得
自己加入检验人这个行业也有几年了，也将自己这几年的工作体会说出来，让大家指点一番，先说说大便常规吧。一提到大便常规，许多的检验人便邹起眉头，那种味道让人有点受不了，甚至是要作呕，没有人会愿意长年累月地呆在这样的一个工作岗位，天天与尿和大便打交道。说实在的，本人有时也不愿意。加上现在的人生活条件改善不
对鼻腔肿瘤的诊治的一些总结
鼻腔内出现许多不同的恶性肿瘤，其中最常见的是鳞状细胞癌和腺癌变异，其次是神经内分泌肿瘤和粘膜黑色素瘤。危险因素包括烟草烟雾，是鳞状细胞癌的主要危险因素。吸入性木屑，胶水和粘合剂的职业性和慢性暴露与鼻腔鼻窦腺癌有关。与普通人群相比，职业性接触木屑的人患鼻窦腺癌的风险会增加。组织学鳞状细胞癌是鼻腔肿瘤最
关于传统定量PCR内标对定量PCR的影响
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标
内标对定量PCR的影响
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但
王大鹏：对科普的一些思考
在实践和研究过程中，科普、科学传播等术语经常被不同的研究者交替使用，同时本世纪初也发生过科学传播是否应该取代科普的争论，争论的双方各执一词，最终科普和科学传播的任何一方都没有被对方所取代，而目前的情况也基本是“搁置争议，共同开发”，因为“区别并非是历史的或是层次的，而只是侧重不同……其本质都是科
纸板厚度对纸箱的一些性能的影响
大家都知道，纸箱的原材料是纸板，纸板的厚度关系到纸箱的一些性能，如纸箱的挺度、耐破度、耐折度、抗压强度等。这就需要生产厂家在纸箱成品之前对纸板的厚度进行检测。用什么样的仪器来检测纸板的厚度呢？下面给大家介绍的是由济南精基试验仪器有限公司生产的纸板厚度检测仪。纸板厚度检测仪是纸与纸板厚度测定的专用仪器
对PCR引物设计原则的简介
首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配) ，再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物设计应注意如下要点：1.引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp。2.引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序
对顶空进样器的一些了解
顶空进样器是气相色谱法中一种方便快捷的样品前处理方法，其原理是将待测样品置入一密闭的容器中，通过加热升温使挥发性组分从样品基体中挥发出来，在气液（或气固）两相中达到平衡，直接抽取顶部气体进行色谱分析，从而检验样品中挥发性组分的成分和含量。 用顶空进样技术可以免除冗长繁琐的样品前处理过程，
对顶空进样器的一些了解
顶空进样器是气相色谱法中一种方便快捷的样品前处理方法，其原理是将待测样品置入一密闭的容器中，通过加热升温使挥发性组分从样品基体中挥发出来，在气液（或气固）两相中达到平衡，直接抽取顶部气体进行色谱分析，从而检验样品中挥发性组分的成分和含量。 用顶空进样技术可以免除冗长繁琐的样品前处理过程，
对小麦测土配方施肥的一些分析
测土配方施肥是实现农业现代化的一个关键步骤，作物的生长离不开养分，而肥料就是土壤养分最直接的来源，如何让肥料发挥出最大的效益？如何让肥料对土壤环境产生的影响降到最低？测土仪可以帮助我们解决这些困难，测土仪可以测得土壤中的养分情况，为我们科学施肥提供了帮助。一、小麦测土配方施肥的意义和内涵所谓的小麦测