快速TA克隆的突破
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara；可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体，不仅连接时间也很长，而且做不到promega、takara的阳性率和稳定性。方法2、以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法，最早采用这种连接方法的是INVITROGEN（英俊公司），并且申请了ZL，这种方法的优势是快速连接，在 5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中，阳性率比较高，这种方法国内也有人模仿，照理说，这种载体能迅速的替代promega、takara。但是为什么pro......阅读全文
快速TA克隆的突破
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara；可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平
TA克隆的策略
对于亚克隆来说，酶切-连接可谓是最经典的方式。虽说效果不错，可着实有些麻烦。载体和片段分别酶切、跑胶、回收，再加上连接和转化，一星期转眼就过去了。做表达的那是没办法，载体上只有多克隆位点，那我们只能配合。对于只是想克隆保存或测序的同学来说，快速简便的TA 克隆则不失为一个好选
PCR产物的TA克隆
TA克隆 系统可以用于快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。实验方法原理PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR 产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR 产物纯化后，可以在2
PCR产物的TA克隆
实验原理DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。2. 利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体
PCR产物的TA克隆
实验概要本实验介绍了DNA回收和连接的基本原理，PCR产物的T-vector克隆。实验原理1. DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片
PCR扩增产物的克隆——TA克隆法
实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3'T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位
你真的了解－TA－克隆吗？
首先，TA 克隆是用于 PCR 产物的克隆和测序。原理是利用 Taq 酶能够在 PCR 产物的 3’末端 加上一个非模板依赖的 A，而 T 载体是一种带有 3’T 突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把 PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆位点中。 那么在你做 TA 克隆时，需要准
TA克隆常见问题分析
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector
TA克隆常见问题及解决方案
TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3加上A。例如：Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3端自动添加一个3-A突
TA克隆常见问题分析及其解决方案
TA克隆常见问题分析及其解决方案 问 题 可能的原因 建 议 转化后无 克隆菌产生 转化过程有问题或感受态细胞失活 可通过转化pUC18/19等未切割的可用于抗性筛选的质粒，检测感受态细胞的转化效率和转化操作是否正确 插入对照DNA片段的阳性率低 10×快速连接缓冲 液稀释不当 提供的T4 连接酶缓
克隆的筛选和快速鉴定
实验概要掌握快速细胞破碎法测定大小不等的众多的质粒DNA；和菌落PCR快速鉴定克隆。实验原理在这个实验方法中，只需配制一种细胞缓冲液（它可以在室温下保存，长期使用）。利用破碎细胞缓冲液中的阴离子去污剂---SDS在37℃溶解膜蛋白，使细胞破裂，并解聚核蛋白，SDS还能与蛋白质结合形成复合物，使得蛋白
克隆心得：帮助新手快速做出克隆2
酶切直接在回收PCR产物的试管中配置酶切体系：PCR产物酶切－制作插入片断公用Buffer 6μl酶 I 3μl酶 II 3μlPCR产物 ——双蒸水 48μl合计 60μl要将PCR产物接入的质粒载体A，取A质粒3μl进行酶切。A质粒酶切－制作载体片断公用Buffer 3μl酶 I 1μl酶 II
克隆经验—帮助新手快速做出克隆5
1. 连接产物10μL、5×KCM溶液10μL、双蒸水30μL，（共50μL）混匀，置冰上。2. 从-70℃冰箱中取 1支感受态细胞，置冰上。融化后立即取50μL，加入步骤1中的混合液中，轻轻吹打数次混匀（不可用力过大，不可涡旋）， 立即置冰上。3. 冰上放置20 分钟。4. 室温放置10分钟。5.
克隆经验—帮助新手快速做出克隆3
酶切直接在回收PCR产物的试管中配置酶切体系：PCR产物酶切－制作插入片断公用Buffer 6μL酶 I 3μL酶 II 3μLPCR产物 ——双蒸水 48μL合计 60μL要将PCR产物接入的质粒载体A，取A质粒3μL进行酶切。A质粒酶切－制作载体片断公用Buffer 3μL酶 I 1μL酶 II
克隆经验—帮助新手快速做出克隆4
9. 在一新1.5mL 离心管中加入 900μL 预冷 无水乙醇、20μL 3M的醋酸钠。将步骤8的上清小心加入本步骤离心管中。颠倒数次混匀。12000rpm 4℃ 离心15分钟。（提示 吸取步骤8中的上清时，千万不要将有机相吸入，宁可放弃一些上清，否则影响后面的连接反应。 另外，本方法
克隆心得：帮助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接）简介：将用作载
克隆经验:帮助新手快速做出克隆2
（提示 关于酶量的问题。通常的内切酶效价在10U/μL左右，3μL内切酶相当于30U，足够切10μL的质粒。因为通常小提质粒的浓度在200－600ng /μL，一般浓度达不到1μg/μL。根据1U酶切1μg质粒的原则，这一酶量是足够的。）1%琼脂糖回收胶回收（碎胶、酚氯仿抽提法）1. 酶切产物加入1
克隆经验:帮助新手快速做出克隆1
本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆 的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆 （也适用于多片断连接）简介：将用
TOPO©－快速克隆技术介绍
Topo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit） Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶把PCR片断连接到T载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA Topoisomerase。 Topoisomerase的用途一般使用
TA发布突破性的热重分析仪Q5000
2005年3月9日，在TA仪器中国技术中心盛大揭幕典礼上，TA全球总裁Mr. Terry Kelly为中国的客户带来TA的最新创新科技产品Q5000热重分析仪。 Q5000热重分析仪共有两种型号，拥有不同的应用领域。Q5000IR热重分析仪，拥有ZL认证的全新天平设计，超速升温的红外辐射炉
重大突破！从种子开始克隆水稻
20世纪20年代开始，许多作物都是通过先杂交两个品种获得杂交种子，再加以种植的。杂种在产量或抗虫病等方面具有优势，但是，杂交作物的后代并不总能产出同样品质的植物。 从种子克隆出一株植物，确切地说是复制品，这将是世界农业界的重大突破。发展中国家的农民常常无法负担昂贵的杂交种子，如果农民可以从自己
－Cell子刊突破：无需克隆的CRISPR新技术
来自荷兰Hubrecht研究所和乌特勒支医学中心（UMC Utrecht）、麻省理工学院的研究人员称，他们开发出了一种自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技术，可以绕开基因编辑过程中所有的克隆步骤，在数小时内完成CRISPR/Cas9介导基因突变及位点特异性转基因敲入。他们的研究成
转化克隆的筛选和鉴定——快速PCR筛选法
实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒引物Taq酶PCR缓冲液甘油硫酸镁dNTP蒸馏水琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器微量移液取样器移液器吸头离心管双面微量离心管架制冰机恒温摇床超净工作台摇菌管PCR仪培养皿凝胶电泳仪
我国采用体细胞克隆奶牛取得新突破
“这是采集我们育种场良种奶牛体细胞克隆出来的3头优良奶牛。”3月28日，河北天泉良种奶牛有限公司董事长李树静在克隆牛舍向记者自豪地说，这批克隆奶牛的情期受胎率和克隆牛存活率均取得新突破。 2月20日，首例体细胞克隆奶牛呱呱坠地。见证这一诞生过程的李树静告诉记者：“这批克隆牛前后3天相继出生，平
我国采用体细胞克隆奶牛取得新突破
“这是采集我们育种场良种奶牛体细胞克隆出来的3头优良奶牛。”3月28日，河北天泉良种奶牛有限公司董事长李树静在克隆牛舍向记者自豪地说，这批克隆奶牛的情期受胎率和克隆牛存活率均取得新突破。2月20日，首例体细胞克隆奶牛呱呱坠地。见证这一诞生过程的李树静告诉记者：“这批克隆牛前后3天相继出生，平均体重为
我国采用体细胞克隆奶牛取得新突破
“这是采集我们育种场良种奶牛体细胞克隆出来的3头优良奶牛。”3月28日，河北天泉良种奶牛有限公司董事长李树静在克隆牛舍向记者自豪地说，这批克隆奶牛的情期受胎率和克隆牛存活率均取得新突破。2月20日，首例体细胞克隆奶牛呱呱坠地。见证这一诞生过程的李树静告诉记者：“这批克隆牛前后3天相继出生，平均体重为
克隆在原核载体的DNA片段的快速鉴定
已转化的重组载体的细菌细胞或 λ 噬菌体颗粒可通过直接从培养皿上挑取菌落或噬菌斑获得，然后直接加入到 PCR 混合液中，这时 PCR 混合液中含有除了未加热稳定 DNA 聚合酶外的所有试剂，其中引物与所要鉴定的已克隆 DNA 片段的侧翼序列互补。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方
克隆在原核载体的DNA片段的快速鉴定
实验方法原理 已转化的重组载体的细菌细胞或 λ 噬菌体颗粒可通过直接从培养皿上挑取菌落或噬菌斑获得，然后直接加入到 PCR 混合液中，这时 PCR 混合液中含有除了未加热稳定 DNA 聚合酶外的所有试剂，其中引物与所要鉴定的已克隆 DNA
克隆在原核载体的DNA片段的快速鉴定
实验方法原理 已转化的重组载体的细菌细胞或 λ 噬菌体颗粒可通过直接从培养皿上挑取菌落或噬菌斑获得，然后直接加入到 PCR 混合液中，这时 PCR 混合液中含有除了未加热稳定 DNA 聚合酶外的所有试剂，其中引物与所要鉴定的已克隆 DNA 片段的侧翼序列互补。实验材料 热稳定 DNA 聚合酶正义和反
Science十大科学突破之人体胚胎克隆
每年年底，Science杂志都会按惯例评选出十大科学进展。今年的Science十大科学突破之首是癌症免疫疗法，其余几项研究(与生物相关)包括：CRISPR技术，结构生物学指导疫苗设计，CLARITY技术，迷你器官，胚胎克隆，睡眠以及微生物健康。与往年相同，今年十大科学突破中依旧是生命科学方面的占