PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃ 低温退火,引物与模板互补结合。在72℃条件下,结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下,利用反应体系中的4种dNTP为原料,按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的DNA链。所扩增的DNA可作为下一轮扩增反应的模板。重复上述循环过程,经过20~30个周期后,特异的目的DNA可扩增百万倍以上。 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。PCR方法操作简便,灵敏度高,可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,在我国发病率很高,而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切,因此,......阅读全文
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃ 低温退火,
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
实验方法原理 多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
PCR法检测乙肝病毒(HBV)主要用于对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作。实验方法原理多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃低温退火,
HBV变异对乙肝病毒检测的影响
[摘 要] 目的:了解无锡地区HBV前C/C基因变异情况,探讨基因变异对乙肝病毒标志物(HBVM)及HBV DNA定量的影响。方法: HBVM用时间分辨荧光定量试剂检测;HBV DNA定量PCR以德国Roche Lightcycler 荧光定量扩增仪检测;HBV DNA前C/C测序使用①德国Roc
乙肝病毒核酸(HBV-DNA)阳性检测意义
乙肝病毒是一种部分双链 DNA(核酸)病毒,也就是说它的遗传物质是DNA,它载有病毒所有遗传信息,乙肝病毒靠它才可以复制、增殖、繁衍后代。 研究证明,乙肝病毒的裸DNA(没有蛋白质包裹DNA)就有感染性,完成对宿主的侵袭,造成宿主体内出现完整的乙肝病毒颗粒。也就是说 HBV DNA相当于
常规PCR法HBVDNA检测的临床意义
常规PCR法HBV—DNA定量检测独特的诊断价值表现: 1、常规PCR法HBV-DNA检测施治前进行病毒定量检测,可以选择针对性的药品,避免盲目用药。 2、常规PCR法HBV-DNA检测施治后定量PCR可直接准确地测定体内病毒数量,有助于判断治疗乙肝的效果 3、常规PCR法HBV-DNA检
分级定量PCR检测血清HBV-DNA
引言 PCR技术对基因从定性到定量的测定是分子生物学方法研究一大飞跃,定量PCR已成为目前分子生物学技术研究的热点之一. 迄今研究和应用的定量PCR方法有4种,即PCR产物的直接定量;极限稀释法;靶基因与参照基因的同步扩增;竞争性PCR法. 以上方法各有利弊,选择某一方法取决于靶基因的特性,对准确度
分级定量PCR检测血清HBVDNA
PCR技术对基因从定性到定量的测定是分子生物学方法研究一大飞跃,定量PCR已成为目前分子生物学技术研究的热点之一. 迄今研究和应用的定量PCR方法有4种,即PCR产物的直接定量;极限稀释法;靶基因与参照基因的同步扩增;竞争性PCR法. 以上方法各有利弊,选择某一方法取决于靶基因的特性,对准确度的要
关于乙型肝炎病毒DNA测定的简介
乙型肝炎病毒DNA测定,临床上检测乙肝病毒(HBV)及其复制情况的方法主要有酶联免疫法(ELISA)检测乙肝两对半血清标志物和PCR法测定HBV-DNA。ELISA是临床诊断HBV感染的传统手段,它检测的是人体对HBV的免疫反应状态。而PCR可检测病毒DNA。HBV-DNA检查主要是定性和定量的
关于乙型肝炎病毒定量的简介
临床上检测乙肝病毒(HBV)及其复制情况的方法主要有酶联免疫法(ELISA)检测乙肝两对半血清标志物和PCR法测定HBV-DNA。ELISA是临床诊断HBV感染的传统手段,它检测的是人体对HBV的免疫反应状态。而PCR可检测病毒DNA。HBV-DNA检查主要是定性和定量的检查。①定性,即确定是阴
乳汁乙肝病毒标志物检测的临床意义
母婴乙肝病毒的传播途径,为分娩时经产道时被感染,或出生后与母亲接触被感染。了解乙肝表面抗原(HBsAg)阳性乳汁中乙肝两对半(HBV)及HBV-DNA含量,有利于指导母乳喂养。现将70例血清HBsAg阳性产妇的乳汁进行HBV和HBV-DNA检测情况报道如下。 1 材料与方法 1.1
荧光定量PCR应用——病毒篇
诺如病毒诺如病毒(Norovirus,NVs)属于杯状病毒科诺如病毒属,是引起非细菌性急性胃肠炎的主要病原体,世界50%以上的胃肠炎暴发均由它引起,可在医院、学校、餐馆等人群密集地爆发急性胃肠炎。根据病毒RNA 聚合酶和衣壳蛋白核苷酸序列的差异,诺如病毒分为5个基因型,其中GI、GII 型诺如病
乙肝病毒血清标记物与血清HBVDNA的关系
【摘要】 目的: 探讨不同乙肝感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行对比分析。方法: 采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物, 荧光定量PCR (FQPCR) 检测HBV-DNA, 比较二者之间的关系。结果: HBsAg、 HBeAg、 HBcAb阳性组和HBsAg、 HBeAg阳性组 H
乙型肝炎病毒前S2抗原/抗体检测及其临床意义
乙型肝炎病毒包膜上的前S1、前S2蛋白及表面抗原为HBV DNA的S区前S1、前S2及S基因的编码产物。pre S蛋白参与HBV的组装、分泌和侵入肝细胞的机制,而机体对pre S的免疫应答成为清除肝细胞内HBV以及阻止病毒侵入肝细胞提供重要的防御作用。本文讨论pre S2 Ag/Ab检测与乙型肝炎病
不同方法检测乙肝的结果判读建议及遵循原则
周建伟 济宁医学院附属医院检验科 乙肝病毒感染的实验室检测方法主要有胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光法(CLA)以及荧光定量PCR(FQ-PCR)。现在,在同一实验室中,往往存着这几种方法的并存,或者不同实验室使用的方法不同,这样就容易造成结果的不一致。如
荧光定量PCR在中医药研究中的应用
摘要:荧光定量PCR是一种新的核酸定量技术,该技术在PCR仪反应系统中引入了荧光标记探针,通过荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大的克服了原有PCR仪技术的不足,其最主要的优势是能对待测样本起
ELISA法与PCR法检测乙型肝炎病毒标志物的实验研究
[摘 要] 目的:探讨ELISA法和PCR法联合检测对乙型肝炎诊断的临床价值。方法:采用ELISA法与PCR法同时检测421份血清标本。结果:用ELISA法测定HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)时,HBVDNA阳性率高达90.6%;用ELISA法测定HBsAg(+)、抗HBe(+)
乙肝血清学阳性产妇乳汁中HBVDNA检测有什么意义?
乙肝血清学阳性产妇乳汁中HBV-DNA检测有什么意义?:我国是乙型病毒性肝炎高发地区,乙肝病毒携带产妇产后能否母乳喂养日益受重视。关于血清HBV阳性产妇产后能否进行母乳喂养,一直是广大学者关注和研究的焦点。我国是乙型病毒性肝炎高发地区,乙肝病毒携带产妇产后能否母乳喂养日益受重视。关于血清HBV阳性产
HBV-DNA与HBV
【摘要】目的: 探讨荧光定量PCR检测HBV DNA与HBVm的关系。 方法: 采用荧光定量PCR法和酶联免疫吸附试验(ELISA)对159份HBVm 8种不同阳性模式及67份HBVm全阴模式血清进行HBV DNA检测。 结果: HBsAg、HBcAb、HBeAe阳性者HBV DN
HBVDNA是判断乙肝病毒有无复制的“金指标”
HBV-DNA称为乙肝病毒脱氧核糖核酸。核酸是病毒的核心部分、病毒的基因都在这里,没有核酸,病毒就不能复制。因此,检测HBV-DNA是判断乙肝病毒有无复制的“金指标”。有人会问,检测乙肝“乙肝两对半”已能反映乙肝病毒有无复制、有无传染性,为何还要检测HBV-DNA呢?这是不是重复检查,增加了病人
什么是PCR阴性?
举乙肝的例子来说:通过酶免的方法查乙肝两对半和通过荧光定量PCR的方法学查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身体不舒服或者正常体检(比如入职体检),他去看医生,临床医生怀疑他得了肝炎(肝炎有很多种比如病毒性肝炎,也就是病毒倾入他体内后由于人体的三道防线没能把病毒消灭掉,导致病毒在
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术,其基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点,但其对实验环境的要求严格,实验成本较高,有时还有假阳性的现象出现。1、仪器设
PCR法检测支原体
实验方法原理PCR法的基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA链扩增延伸。实验材料细胞样品试剂、试剂盒dNTPTapDNA聚合酶琼脂糖矿物油支原体检测试剂盒仪器、耗材超净工作台PCR仪电泳仪凝胶成像分析系统台式离心机旋涡混悬器实验步骤1.
多重PCR法检测STEC
产志贺毒素大肠杆菌(STEC)具有很强的致病性,全球范围内由其引发的食物中毒和其他公共卫生事件呈逐年升高之势,严重威胁人类的健康。开发快速可靠的检测手段对其引发的食源性疾病的监测、控制和预防意义重大。本文结合对STEC分子生物学特征的研究,着重介绍了多重PCR检测技术在检测食品中STEC方面的
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术,其基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点,但其对实验环境的要求严格,实验成本较高,有时还有假阳性的现象出现。1、仪
时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved-Fluoroimmunoassay,TRFIA)
时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术,它用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素螯合物的发光特点,用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏
“大三阳”“小三阳”是怎么来的?(内附乙肝五项解析)
乙型肝炎病毒是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科,该科病毒以RNA中间体为模板经反转录合成DNA链。在电镜下观察,HBV感染者血清中存在三种形式的颗粒:Dane颗粒、小球形颗粒、丝状或核状颗粒。一般情况下,血清中小球形颗粒最多而Dane颗粒最少。常用检测方法:在我国有50%~70%的人受过感染,由
PCR产物的检测PCRELISA法
在一个引物的5’端标记上生物素以便使其能与包被板上的亲合素结合而固定PCR产物,而在另一引物的5’端标记FITC,用HRP标记的抗FITC抗体与之结合显色,即可进行常规ELISA检测。如设立标准对照,此技术还可用于定量分析。 【试剂与配置】 包被液:4.3mmol/L Na2HPO4,