浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直从事实验室动物疫病检测工作，现就应用RT-PCR实验方法过程中出现的一些常见污染问题做如下论述，仅共同行参考和探讨。 RT-PCR实验有三步：提取RNA、反转录(RT)、PCR扩增及扩增产物分析，在这一过程中，最令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性。 污染原因主要有以下几个方面： 1、样品间的交叉污染收集样品的容器最好使用一次性的，如重复使用，应在使用前应于180℃的高温下干烤6小时或更长时间;样品存放时要密封严实，以防外溢造成相互间的交叉污染;样品在提取过程中离心管及吸样枪头最好使用一次性的，以免不同实验......阅读全文
基因疗法的问题及对策
基因治疗终于回来了，今年是人类基因组计划25周年纪念日，并没有人多少人关注这个。但是当曾经在老鼠身上实验的基因疗法现在用在治疗17个月大的Layla Richards的白血病时候，每个人都在关注着。 虽然基因疗法有着巨大潜力，但刚过去的周年纪念日只有寥寥几家媒体进行了报道，这也看出了近四分之
我国食品检测体系中的问题及对策分析
摘要：我国的食品检测主要要根据国家法律法规的相关规定对食品的卫生、质量指标等进行系统的检测与评估，包括对食品进行质量安全检测、市场监管和生产基地、产品贸易的监管等方面，因此，食品检测需要有一定的技术支撑。本文主要论述食品检测体系中存在的问题并对解决对策进行相关的讨论，为完善我国食品检测体系出谋划
单抗腹水制备过程中遇到的问题及对策
1，腹水少或者无腹水产生①致敏不正确，不正确的使用致敏剂，或者致敏时间与接种杂交瘤的时间相差太久，一般是7-14天，具体看小鼠的腹部情况。②杂交瘤细胞或者致敏剂的接种位置不正确，没有打到腹腔，而是打到了皮下。③接种的杂交瘤细胞数量太少，太多或者细胞状态不好。一般不50万个细胞左右为宜。④建议使用母鼠
PCR技术（五）：常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
核酸提取常见问题、原因分析及其对策
一、DNA提取方法简介二、DNA提取常见问题、原因分析及其对策三、RNA提取方法简介四、RNA提取常见问题、原因分析及其对策核酸提取原理及常见问题.pptx
逆转录RTPCR常见问题分析
RT-PCR常见问题（一）RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因解决方案RNA被降解在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA。使用良好的无污染技术分离RNA。在将组织从动物体取出后立刻处理。RNA中包含逆转录抑制剂通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70%（体积
医院细菌培养及药敏试验中常见问题调研及改进对策探讨
医院微生物室的细菌培养及药敏试验是防治感染性疾病和监测耐药菌株、防范医院感染的重要手段和方法，对临床工作应该具有准确指导作用。然而，其实存在的问题较多，根据笔者的调研和体会，当前医院细菌培养及药敏技术虽本身已普及到县级医院，但是与此相关的若干不良现状却导致了药敏试验结果难以准确指导临床合理选用抗生素
PCR实验操作常见问题及解决方法（二）
二、Generacer如何针对Generacer试剂盒设计基因特异性引物（GSP）？使用5’或3’RACE试剂都需要至少一条基因特异性引物，您在设计引物时需要注意以下几点要求：*50-70％的GC含量，以提高引物熔点（Tm）*23-28个碱基长度，以提高引物特异性*降低3’端GC含量，将引物非特异性
PCR实验操作常见问题及解决方法（一）
cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反应起始
OB免疫及化学检测方法中的常见问题及答疑
1、为什么说“半定量双联法”是检测便隐血的最佳方法？如何进行结果判断？ 答：可分别参见表1和2表1免疫法化学法特异性高低灵敏度（ug/g stool）高（0.1）较高（50）对上消化道出血的漏检（检出率）会（约60%）不会（100%）钩状效应（Hook’s效应）有无半定量不能能检测成本
RAPD技术应用中的一些问题及对策
摘要：综述了RAPD技术的一些理论性问题，包括RAPD与其它分子标记技术相比的优点，影响结果重复性的因素，显性标记产生的原因，条带取舍的标准等。提出在实验中解决这些问题的一些方法：严格控制反应条件，采用单倍体和单剂量标记，系统学研究中要结合其它方法进行分析，定位基因时要选用合适的群体等。 1 RAP
浅谈微量热仪的常见问题
（一）氧弹漏气 橡胶密封圈老化或磨损，更换密封圈 （二）点火失败 线路不通或接触不良 1.检查连线是否连接好，氧弹头与点火帽是否接触好，氧弹内筒是否放好 2.试样潮湿 充氧过快溅湿试样 3.点火丝或棉线与试样接触不良 重新装样 4.两电极过脏 用砂纸打磨电极 5.点火帽氧化 用砂纸打磨点火
复合酶存在的问题及对策
目前,在饲料中添加的酶制剂都是由微生物生产的。利用微生物来生产酶制剂的两种方法,一是固体发酵,二是液体发酵。目前国产复合酶大多为固体发酵,生产的复合酶质量不稳定,发酵水平和酶蛋白的产量也较低。另外我国饲料厂颗粒饲料制粒温度普遍较高,温度对复合酶的酶活性有不同程度的影响,降低了酶制剂的使用
大规模的问题及对策2
用基因工程方法将bcl-2基因这种细胞凋亡抑制基因导入细胞，成为众多研究者的选择。bcl-2基因的过量表达能抑制Gln或氧缺乏引起的细胞凋亡，减少细胞特定营养成分的消耗，提高细胞密度和目的蛋白产量,这对于细胞大规模培养具有重大意义。对细胞的这种保护作用依赖于bcl-2等抑制基因的高水平表达。因此，需
大规模的问题及对策1
1、细胞培养环境细胞培养环境中抑制因素的积聚是提高细胞密度的主要限制因素。体外动物细胞培养中氨离子的积累是抑制细胞生长的主要因素之一。氨的积聚使细胞内UDP氨基己糖(UDP-N-乙酰葡糖胺和UDP-N-乙酰半乳糖胺)增加，影响细胞的生长及蛋白的糖基化过程。氨抑制Gln代谢途径，使Asp和Glu消耗增
临床输血中常见问题与管理对策
输血是救治病人的重要手段之一，然而输血不当，可产生严重的输血不良反应、输血传染病和同种免疫反应，重者危及患者生命。临床输血安全是每个医务工作者必须考虑，并严肃对待的问题，应切实做好防范工作。根据部分医院资料分析表明，输血引发的问题，80%以上发生在血站外，而护士责任性差错占全部差错的50%以上。周慧
浅谈现代实验室废水分类收集的现状及相关对策
随着科技的发展，实验室污水、化工企业废水产生环节越来越多，水质变化大，具有高COD、高氨氮、高盐分、高毒性、难降解等特点。 随着环保要求的不断提高，废水排放不仅要常规污染物指标达标，特征污染物指标达标要求也逐步摆上了议事日程。污水综合排放标准和农药、医药行业排放标准等国家标准就已经包含了不少特
RTPCR常见问题分析及其解决方案
常见问题可能原因建议解决方案少量或没有RT-PCR产物RNA被降解分离无污染，高质量的RNA；提取RNA的材料要尽量新鲜，防止RNA降解；RT反应前，在变性胶上分析RNA的完整性；RNA提取后，应储存在100％甲酰胺中， 如果使用RNase抑制剂，加热时小于45℃；pH小于8.0，否则抑制剂会释放所
RTPCR实验方法
RT-PCR定义：是指对组织或细胞的总RNA进行抽提，把RNA反转录为cDNA，然后设计目的基因引物进行PCR，琼脂糖电泳并数码拍照，分析电泳条带灰度值，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。 RT-PCR流程简介 一、抽提RNA： 1、防止RNA酶污染 180℃的高温下
实验中电动搅拌器常见问题及解决办法
电动搅拌器在我们的日常实验中非常常见，但是在经过长时间的使用或通过我们日常不规范的操作保养，都多少会出现这样或那样的小毛病，有些毛病甚至直接影响我们的正常使用，下面我就来简单给大家说说在使用电动搅拌器时出现一些问题后该如何正确应对。 1）动口再动手：对于电动搅拌器出现故障时，不应急于先动手
蛋白组学实验中的常见问题及解答
1,关于使用三氯醋酸沉淀法后蛋白质难于重悬的问题Q:1,Hi !I have been trying to clean and concentrate proteins form eucariotic cell culture medium in order to analyse them in 2
COD检测常见问题及方法
1、如何去除氯对COD检测的影响？ 答：准备一份空白样，其中含有去离子水和与你样品中氯浓度相同的氯成分。在加入消化液后空白样会迅速变成很深的颜色，但是之后你可以减去氯的影响并得到一个可以适用与你的样品的检测结果。 2、COD检测的误差主要来自于哪里？ 答：氯是在COD检测中带来影响最大的因
水质测定总氮的分析方法中常遇问题及对策
引言 衡量水体水质的关键指标之一就是氮，亚硝酸盐氮是各种氮化物分解中的中间生成物，同时也是有机污染的关键产物，含氮有机物经过无机化反映后的最终产物是硝酸盐氮。氨氮存在于水体中时，表示有机物还在分解，因此可以作为判断水体污染的标准。所以，对于水体中氮化物的测定对于水质检测十分重要。 1 水
临床检验中常见差错及对策（二）
2.2 对策 2.2.1 做尿液分析的尿标本不新鲜或是用加了防腐剂的标本做尿液分析，导致结果出现不应有的异常。在某些情况下应向患者询问是否服用大量 Vc等药品，因大量服用Vc 可以使葡萄糖、胆红素、亚硝酸盐及潜血呈现阴性结果。碱性尿会造成蛋白试纸假阳性，进行蛋白质试验时应注意
临床检验中常见差错及对策（一）
随着现代化科学技术的飞速发展，实验室检验的仪器设备更趋向全自动化、微量化，各种试验用试剂也向操作更加简便、快速、性能稳定 的方向发展，使实验室做出的检验报告具有较高的可靠性和准确性。但也不可避免地存在着一些人为因素引起的差错及误差。如何在实践 工作中把人为因素引起的差错降到最低，消灭过失误差
水库水质检测污染分析及对策
一、概述水库是大型的水利枢纽工程，修建水库最主要的作用是防洪防汛抗旱，还有供水、灌溉、旅游等其他作用，其中供水也是水库至关重要的作用之一。如果要达到供水标准，就必须符合国家《地表水环境质量标准》中三类标准，如果要达到可供饮用就要达到二类标准。我国有湖北三峡、广西龙滩、青海龙羊峡等758 座大型水库，
浅谈几点血球计数的常见问题处理
一、计数偏高，这里指的是总体的偏高，不是针对特例，一个或者几个项目在一段时间内或者一批标本里面总是偏高，那么，首先分析标本人群的特殊性。例如，白细胞增高是不是发烧感染人群，血红蛋白增高是不是高原人群等等，排除这些就需要从试剂和仪器还有抗凝剂几个方面进行考虑，抗凝剂不好会造成分类和血小板的增高，严重的
线虫总RNA提取及RTPCR实验方法
C. elegans RNA Isolation and RT-PCRReagents Needed:M9 (common stock)Trizol (stored at 4ºC)chloroform2-propanol70% EtOHRNase-free H2OiScript cDNA Synth
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样