提取的基因组DNA有降解如何解决

选取的材料不新鲜或反复冻融,采集材料后未及时处理或未低温保存:陈旧血液或不新鲜的材料中,细胞凋亡导致DNA降解,或者低温保存的样品经反复冻融导致细胞破碎,内源性核酸酶降解DNA,因此应该选用新鲜的材料样品,不能及时处理则低温保存,运输过程中应该使用干冰: 1 ) 未能有效的抑制内源性核酸酶的作用: 某些DNase含量丰富的动植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆,研磨过称中随时补充液氮,并在样品未完全解冻之前加入含有抑制核酸酶作用的裂解液。 2 ) 操作过于剧烈导致 DNA 被机械打断: 预处理的样品应该加入细胞裂解以后,所有操作应该尽量柔和,避免剧烈振荡。......阅读全文

基因组DNA的提取

基因组DNA的提取概 述   基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分

基因组DNA的定义

中文名称基因组DNA英文名称genomic DNA定  义组成生物基因组的所有DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

基因组DNA的提取

第一节 概 述DNA的提取通常用于构建文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中,可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部,

纯化DNA实验_基因组DNA的快速纯化

试剂、试剂盒尾部缓冲液蛋白酶 K仪器、耗材离心管玻璃棒实验步骤第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中,加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K,在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液(配 25 ml)50 mmol/L

血基因组DNA提取实验——血基因组DNA-试剂盒提取法

血基因组DNA提取可用于:(1)从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA;(2)用于后续测序、遗传信息学等研究。实验方法原理采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。实验材料抗凝全血试剂、试剂盒血基因组DNA 试剂盒仪

植物基因组DNA的RFLP

实验概要本实验介绍了植物基因组DNA的RFLP多态性分析的原理及操作步骤。通过本实验可了解不同植物或同一植物不同个体之间基因组DNA顺序的差异性,掌握DNA限制性酶切片段长度多态性研究的基本方法。实验原理DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间,也存在于同一种植物的

小鼠肝基因组DNA制备

原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中,制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。

血基因组DNA提取实验

            实验方法原理 采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。 实验材料 抗凝全血

基因组DNA的快速纯化

第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中,加 35 μl 10 mg/ml蛋白酶 K,在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液(配 25 ml)50 mmol/L Tris,pH 8                      

细菌基因组DNA提取实验

细菌基因组DNA提取可应用于:(1)获得细菌基因组DNA;(2)作为PCR模板;(3)用于测序、遗传信息分析等。实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DN

细菌基因组DNA提取实验

            实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD

细菌基因组DNA提取实验

实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。实验材料 细菌培养物

关于土壤基因组DNA提取

土壤样品含有大量的微生物,其中绝大部分的微生物都是无法直接培养进行繁殖和研究。从土壤样品中提取 DNA 是研究土壤微生物zui为有效的方法。目前从土壤样品中提取微生物 DNA 的方法主要有直接法和间接法。直接法是指把土壤样品放在裂解液中,经过有效的破壁方法使微生物的DNA 全部释放到裂解液中,然后再

血基因组DNA提取实验

实验方法原理 本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料 抗凝全血试剂、试剂盒 血基因组DNA 试剂盒仪器、耗材 96孔深孔板96圆孔板96孔DNA制备板

拟南芥基因组DNA的提取

实验概要本实验介绍了用CTAB法提取拟南芥基因组DNA。主要试剂CTAB提取液(2%CTAB,50mMEDTA,50mM Tris-HCl,PH 8.0,0.84M NaCI,0.05%巯基乙醇),氯仿,无水酒精,70%的酒精主要设备1.5 mL离心管,65℃水浴锅,高速离心机,研钵实验材料拟南芥叶

细胞化学词汇基因组DNA

中文名称:基因组DNA英文名称:genomic DNA定  义:组成生物基因组的所有DNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

小鼠肝基因组DNA制备

原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中,制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。

血基因组DNA提取实验——血基因组DNA大量试剂盒提取法

实验方法原理本试剂盒采用独特的两相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DN的目的。适合从5 ml 的抗凝人或哺乳动物全血,或500 ul 抗凝鸟类或两栖动物全血中获得多至250 ug 的基因组DNA。实验材料抗凝全血试剂、试剂盒血基因组DNA大量试剂盒仪器、耗材DNA

哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA

在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、

基因组DNA的得率较低或者无基因组DNA原因及解决方法

1 ) 样品材料老化或者反复冻融导致 DNA 含量下降: 应选择新鲜的材料样品,如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等,不能立即处理的样品应放入液氮或-70℃低温保存,以免DNA降解。 2 ) 样品破壁或者裂解不完全, DNA 未充分释放: 动植物样品应在液氮中充分研磨

植物组织制备基因组DNA实验

氯化铯法 CTAB法             实验方法原理 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则

基因组DNA的纯化与回收

实验概要质粒、噬菌体等经酶切,电泳;PCR产物经电泳后,常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化,用于亚克隆、探针标记、测序等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等,也有现成的试剂盒供应。主要试剂酚、氯仿、NaAc、无水乙醇、TE、Tris-HCl饱和酚、异丙醇、低融点琼脂糖

怎样对基因组DNA质量检测

怎样对基因组DNA质量检测用凝胶电泳看,有没有质白质和RNA等物质的污染,还可以测OD,用OD260/280来判断,当OD260/OD280< 1.8,表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> 2.0,表示RNA含量较高当OD260/OD280=1.2.0,表示DNA较纯

真核细胞基因组DNA的提取

实验概要高等动物,高等植物的基因组相当庞大,如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成,果蝇基因组有1.4×108个碱基对,水稻基因组有1.4×109个碱基对。真核细胞基因组中,约1万-1.5万个可表达的结构基因,其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组,包含了该物种生长,发育,繁殖

核酸提取-基因组DNA的提取

   DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作,如不能有效的完成DNA提取方面的工作,那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到1,根据不同研究需要,保证结构的相应完整性;2,尽

细菌中制备基因组DNA实验

小量制备 氯化铯法             实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿

生物基因组DNA的分类介绍

  1、蛋白编码序列。以三联体密码方式进行编码。编码DNA在基因组中所占比例随生物而异,在人类细胞基因组中,这一比例只有1.5%左右。这类编码序列主要是非重复的单一DNA序列,一般在基因组中只有一个拷贝(单一基因),然而,也有可能有两个或几个拷贝甚至多达上千个拷贝的情况,这些都来自于从基因家族里派生

昆虫全基因组DNA的提取

实验概要利用改进的CTAB 法提取昆虫全基因组DNA。主要试剂1. 蛋白酶K[美国Merck公司]2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司生产]5. 乙二胺四乙酸钠(Na2ED

基因组DNA-Southern杂交操作步骤

1)基因组DNA Southern印迹的制备 预备 1.用适当的限制性内切酶消化基因组DNA样品(10μg)。 2.进行琼脂糖凝胶电泳。一般用0.7~1.0%的琼脂糖凝胶分离基因组DNA,它在1~15kb的范围内有较好的分辨率,可选用TBE或TAE缓冲液。琼脂糖凝胶电泳需在1V/cm的电

从动物组织提取基因组DNA

实验概要本实验以哺乳动物新鲜组织为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。实验原理基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀