使用串联切向流过滤高效浓缩慢病毒载体
简介VSV-G-假型自我灭活慢病毒载体是不可或缺的生物实验工具之一，与之前的γ-逆转录病毒载体不同的是，慢病毒载体可转导非分裂细胞，并可携带更多的转基因盒，在细胞中的转基因表达时间也更长，即可获得更高的滴度，而其遗传毒性相对较低。一般情况下产毒细胞上清液中的载体滴度足以转导常规细胞系，但原代细胞较难转导，需要进行载体浓缩以获得较高浓度。此外，一些载体因整合了会降低滴度的遗传元件，且大多数细胞类型也不耐受产毒细胞生长培养基或其分泌蛋白，所以浓缩及清洗是慢病毒载体使用的必要步骤。超速离心是病毒颗粒浓缩的常用方法之一，但其浓缩系数较低，每次处理量也偏小，且繁琐的多步操作会降低病毒颗粒回收率。离心过滤是相对较简单的浓缩方法，但过滤器本身会捕获截留大量载体，造成损耗。相较而言，切向流过滤（TFF）操作简单，损耗低，且可通过洗滤过程有效降低产毒细胞代谢物及分泌蛋白，但传统的一步式TFF浓缩程度仅可达50-100倍，本实验使用两步TFF，成功......阅读全文
使用串联切向流过滤高效浓缩慢病毒载体
简介VSV-G-假型自我灭活慢病毒载体是不可或缺的生物实验工具之一，与之前的γ-逆转录病毒载体不同的是，慢病毒载体可转导非分裂细胞，并可携带更多的转基因盒，在细胞中的转基因表达时间也更长，即可获得更高的滴度，而其遗传毒性相对较低。一般情况下产毒细胞上清液中的载体滴度足以转导常规细胞系，但原代细胞较难
简述慢病毒载体的载体质粒
载体质粒上HIV-1的顺式序列通常包括两端的LTR、剪切位点及包装信号Ψ等。此外，研究表明，gag基因5′端的序列可提高载体RNA的包装效率；Rev蛋白需要与Rev反应元件(RRE)相作用，将未剪切的载体转录产物从细胞核转运到胞浆。因此，Naldini等在载体上保留了gag基因5′端350bp的
慢病毒的浓缩与纯化
方法一 超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一
慢病毒怎么纯化和浓缩
慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬
慢病毒的浓缩与纯化
实验概要本文介绍了慢病毒浓缩与纯化的两种方法：超速离心沉淀法，PEG-8000浓缩法。实验材料慢病毒上清液实验步骤超速离心沉淀法： 1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟； 2. 每个Ultra-clear SW28离心管中
关于慢病毒载体的介绍
慢病毒载体（Lentiviral vector）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定
切向流超滤：胶乳银纳米颗粒粒径筛选和浓缩的“绿色”...
切向流超滤：胶乳银纳米颗粒粒径筛选和浓缩的“绿色”技术银纳米颗粒（AgNP）因其抗菌特性，广泛应用于消费品、水体消毒剂、治疗药物以及生物医学设备的生产，但其适用性受粒径限制。对均质AgNP进行粒径控制，并消除稳定剂及有机溶剂的毒性影响，在技术和效率上都存在诸多挑战。切向流超滤（TFU）常用于蛋白质、
小型切向流超滤系统简介
了解切向流超滤技术切向流过滤（TFF），也叫错流过滤（CFF），是指液体流动方向与过滤方向相垂直的过滤形式。液体流动在过滤介质表面产生剪切力，减小了滤饼层或凝胶层的堆积，从而保证了稳定的过滤速度。根据被截留的颗粒或分子大小可分为微滤MF、超滤UF、纳滤NF和反渗透RO。TFF技术目前被广泛应用于制药
关于慢病毒载体的概念介绍
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在
简述慢病毒载体的辅助成分
慢病毒载体辅助成分包括： 慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
使用切向流过滤法纯化血红蛋白
在现代医学中，输血是出血性休克、贫血等病症重要的治疗方法，也是常规手术的重要组成部分，但是肝炎及AIDS等小概率传播风险，总是干扰着输血的安全进行。此外，输血前，还需对供体血液进行分型，并与受体血型交叉匹配，以避免出现排异现象。对此，一种相对简便的替代方法是，使用血红蛋白（Hb）类氧载体（HBOCs
慢病毒的浓缩与纯化——PEG8000浓缩法
实验概要本实验介绍了用PEG-8000浓缩法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. NaCl2. PEG8000主要设备1. 高压灭菌锅2. 0.45μm滤头3. 高速离心机4. 低温冰箱实验步骤1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
mRNA药物制备的关键技术——切向流过滤的高效应用
mRNA药物作为一种新型的生物制药技术，因其在治疗和预防疾病方面的潜力而受到广泛关注。切向流过滤（TFF）技术高效率、高回收率特点，在mRNA药物制备中作用很大。一、什么是mRNA？mRNA是细胞中的一种核糖核酸，它携带遗传信息，指导细胞制造特定的蛋白质。在mRNA药物中，人工合成的mRNA被设计用
病毒包装技术——慢病毒载体构建及包装流程
一、实验流程（1和2为并列步骤）慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
高滴定度慢病毒载体产物实验
实验材料293T细胞试剂、试剂盒杜氏改良培养基TE 缓冲液CaCl22 X HeBSPBS漂白剂仪器、耗材乙醇喷壶组织培养皿培养箱灭菌离心管过滤器组织培养瓶实验步骤展开
高滴定度慢病毒载体产物实验
基本方案 高滴定度 HIV-I 基本载体转染 293T 细胞实验步骤 实验材料 293T细胞
高滴定度慢病毒载体产物实验
基本方案 高滴定度 HIV-I 基本载体转染 293T 细胞实验步骤实验材料293T细胞 试剂、试剂盒杜氏改良培养基
慢病毒载体相关知识问答大总结
慢病毒包装技术专题Q:什么是慢病毒 ?A: 慢病毒载体 (Lenti vector)是用于感染细胞以实现稳定导入基因或siRNA的病毒载体系统，其感染效率可以达到100%。慢病毒和细胞结合后通过包装蛋白将含有目的基因或者干扰序列释放到细胞内。慢病毒RNA通过逆转录酶转录为DNA。DNA整合前复合
TFF切向流超滤膜清洗步骤
TFF切向流超滤膜清洗步骤1. 把滤过液和回流液出口连接到清洗罐。 2. 关掉清洗罐的排液阀、打开回流和滤过口的阀门。 3. 如果您的系统采用的是离心泵，可将泵的出口阀关闭；如果您的系统采用 的是变速泵，请把泵速调到最低。 4. 从清洗剂选择表中，选出能去除系统内的堵塞物的适当清
中空纤维切向流过滤纯化HSV疫苗
简介单纯疱疹病毒2型（HSV-2）是溃疡性生殖器疱疹的主要病原，全球每年新增感染达2300万例，其治疗方式主要围绕口服抗病毒治疗展开，但已有HSV-2候选疫苗进入临床试验，包括灭活、活性衰减、亚单位、DNA及多肽疫苗等，其中，野生型病毒删除UL5和UL29基因构建的复制缺陷型HSV-2疫苗株病毒（d
关于慢病毒载体的包装成分介绍
包装成分的构建应在不重组病毒的装配和感染力的前提下，尽可能地减少无关的HIV-1蛋白的表达，为野生型病毒的恢复设置障碍。Naldini等在构建包装质粒时，阻止env基因的表达。在此基础上，Zufferey等将包装包装质粒上表达调节蛋白Nef、Vif、Vpr和Vpu的4个基因分别删除或联合删除。这
关于慢病毒载体存在的问题分析介绍
尽管慢载体的研究有了很大进展，但距离临床应用还有很长的路要走。首先，重组病毒的滴度还不够高，除Naldini等报道的结果外，其余均在101TU/ml～103TU/ml之间，难以达到体内应用的需要；其次，由于HIV复杂的生物学性质，要像常用的小鼠逆转录病毒载体那样建立稳定的HIV载体包装细胞十分困
关于慢病毒载体的基本信息介绍
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使
简述慢病毒载体的基本原理
慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。 1、包装成分 由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型
切向流超滤（TFF）的原理、特点及其应用
切向流超滤（TFF）能快捷、高效地进行生物分子的分离与纯化处理；可用于低至10毫升、高达数千升样品溶液的浓缩和脱盐处理；也可以用于不同大小生物分子的分离、细胞悬液收集、以及发酵液和细胞裂解液的澄清。为什么要使用切向流超滤● 易于装配，操作简单-用管路和少许管路配件，简单地连接切向流超滤装置、泵以及压
切向流超滤（TFF）的原理、特点及其应用
切向流超滤（TFF）能快捷、高效地进行生物分子的分离与纯化处理；可用于低至10毫升、高达数千升样品溶液的浓缩和脱盐处理；也可以用于不同大小生物分子的分离、细胞悬液收集、以及发酵液和细胞裂解液的澄清。 为什么要使用切向流超滤● 易于装配，操作简单-用管路和少许管路配件，简单地连接切向流超滤装置、泵以及
病毒包装技术3——慢病毒载体构建及包装流程介绍
1 菌液的准备 1.1. 取含目的质粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超净台用接种环划线于氨苄抗性的平板上，37℃倒置培养12-16h。待平板长出菌落，挑选生长状态良好的单克隆菌落。若无目的质粒的菌液，则需取库存质粒进行转化，然后挑单克隆摇菌。 1.2. 将单
使用中空纤维切向流过滤（HF－TFF）优化高浓度抗体工艺1
背景/介绍抗体（Abs），或免疫球蛋白（Ig），被广泛用于许多不同的科研和治疗性应用1。特别是，单克隆抗体（mAbs）在诊断、蛋白质纯化以及医疗应用中的使用显著增加2-5。妨碍治疗性mAbs使用的一个主要障碍是皮下注射需要使用较高的浓度，因为这是优先选择的给药方法。按FDA要求，皮下给药时，注射体积
使用中空纤维切向流过滤（HF－TFF）优化高浓度抗体工艺2
如图2所示，1.0mm内径纤维的起始通量高于0.5mm内径纤维（18L/m2/hr vs. 12L/m2/hr）。正如预期，通量随IgG溶液浓度的增加而降低。运行过程中，TMP恒定为5psig，直到接近运行结束时，增加至约10psig。此时，通量降低至0L/m2/hr。图2同时显示，在整个运行过程中