慢病毒的浓缩与纯化
方法一 超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的......阅读全文
慢病毒的浓缩与纯化
方法一 超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一
慢病毒的浓缩与纯化
实验概要本文介绍了慢病毒浓缩与纯化的两种方法：超速离心沉淀法，PEG-8000浓缩法。实验材料慢病毒上清液实验步骤超速离心沉淀法： 1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟； 2. 每个Ultra-clear SW28离心管中
慢病毒的浓缩与纯化——PEG8000浓缩法
实验概要本实验介绍了用PEG-8000浓缩法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. NaCl2. PEG8000主要设备1. 高压灭菌锅2. 0.45μm滤头3. 高速离心机4. 低温冰箱实验步骤1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
慢病毒怎么纯化和浓缩
慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬
慢病毒的浓缩与纯化——超速离心沉淀法
实验概要本实验介绍了用超速离心沉淀法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. 70%乙醇2. 20%的蔗糖溶液3. PBS缓冲液主要设备1. Ultra-clear SW28离心管2. 超净工作台3. 紫外灯4. 10ml移液管5. Beckman SW28 超速离心转头6. 高速离心机7. 50m
DNA的纯化浓缩与定量
实验目的 将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒萃取以除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular clon
使用串联切向流过滤高效浓缩慢病毒载体
简介VSV-G-假型自我灭活慢病毒载体是不可或缺的生物实验工具之一，与之前的γ-逆转录病毒载体不同的是，慢病毒载体可转导非分裂细胞，并可携带更多的转基因盒，在细胞中的转基因表达时间也更长，即可获得更高的滴度，而其遗传毒性相对较低。一般情况下产毒细胞上清液中的载体滴度足以转导常规细胞系，但原代细胞较难
关于慢病毒的目的与意义介绍
● 对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为RNAi,cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。 ● 进行稳转细胞株的筛选； ● 为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒
关于慢病毒脑炎的预防与防护介绍
目前尽管不认为CJD是接触传染或传染病，但该病毕竟是可以传播的。并且朊病毒可以抵抗常规灭活措施，消毒朊病毒的最优条件尚有争议。因此为了预防医源性传播，应从以下几个方面进行预防： 患者的防护 应选择相对独立的房间，以方便其治疗护理。定时开窗通风，保持空气流通。患者分泌物、排泄物、患者使用的衣服
核酸的纯化，浓缩和定量
一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后
慢病毒包装的原理
病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。简单来说，就是把相应的涉及相应功能的元件进行替换或者删除。慢病毒
慢病毒实验程序
含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化，提取慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3） 培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4） 病毒的纯化和浓缩。 5） 分装、- 80 ℃保存。 6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。
慢病毒包装实验
慢病毒包装实验 实验方法原理 慢病毒是反转录病毒的一种，具有反转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于反转
什么是慢病毒
慢病毒（LV）慢病毒载体(lentivirus vector，LV)属于逆转录病毒科(Retrovidae)，为 RNA病毒。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表
慢病毒包装实验
实验材料 病毒试剂、试剂盒 无血清培养基脂质体胰酶含血清的培养基DMEM仪器、耗材 EP管6孔板CO2培养箱高速离心机-80°C冰箱实验步骤 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后，可用于：（1）感染原代培养细胞；（2）制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株；（3）in vivo的基因操作、转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种，具有反转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动
关于慢病毒载体的介绍
慢病毒载体（Lentiviral vector）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定
关于慢病毒的基本概述
慢病毒属是反转录病毒科下的一个属，包括8种能够感染人和脊椎动物的病毒，原发感染的细胞以淋巴细胞和巨噬细胞为主，感染个体最终发病。慢病毒感染的显著特点是感染个体在出现典型的临床症状之前，大多经历长达数年的潜伏期，之后缓慢发病，因此这些病原体被称为慢病毒。例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病
关于慢病毒脑炎的简介
慢病毒脑炎是一类具传染性的侵袭中枢神经系统(CNS)的变性疾病。自1995年英国发现疯牛病（mad cow disease，MCD）以来，迄今已在许多国家流行，由于该类疾病具有传染性，具有相似的神经病理学改变，也称为可传播性海绵状脑病(transmisslble spongiform encep
慢病毒转染细胞步骤
一、慢病毒 转染贴壁细胞实验方法 1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞 以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基 替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。
慢病毒转染细胞步骤
一、慢病毒转染 贴壁细胞实验方法1、慢病毒转染 前18-24小时，将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。3、(对polybrene
慢病毒和其他病毒的特征比较介绍
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒和慢病毒。逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色体上，只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可以长期表达等显著优点。慢病毒不产生任何有效的细胞免疫应答，可作为一种体
Amicon®－Pro蛋白纯化浓缩操作指南
蛋白从克隆表达到纯化脱盐浓缩，一路经过千山万水，宝贵的活性蛋白产量是很多人的“命根子”。然鹅，努力的我们还是苦恼的时候多，欣喜的时候太少太少～～ 纯化黑科技，是时候放大招了 有没有什么好方法能让操作步骤少一点、再少一点，而同时蛋白的活性及产量损失也少一点、再少一点？？ 让我们看看那些蛋白操作高手的
病毒纯化和蛋白纯化区别
病毒纯化和蛋白质纯化都是生物制剂工程中常见的分离纯化方法，但它们的对象不同，具体区别如下：1. 病毒纯化与蛋白质纯化对象不同。病毒纯化的目标是将病毒从其它生物物质中进行分离和去除，以获得单个且纯净的病毒颗粒，如用于疫苗生产的病毒载体，而蛋白质纯化的目标是从生物体或来源中提取和纯化单一或多种蛋白质，如
关于慢病毒脑炎的分类介绍
CJD分为散发型、医源型(获得型)、遗传型和变异型等四种类型。 Creutzfeldt-Jakob病(CJD)是最常见的人类朊蛋白病，主要累及皮质、基底节和脊髓，故又称皮质-纹状体-脊髓变性(corticostriatospinal degeneration)，也称为亚急性海绵状脑。临床以
关于慢病毒脑炎的病理介绍
大体可见脑呈海绵状变，皮质、基底节和脊髓萎缩变性；显微镜下可见神经元丢失、星形胶质细胞增生、海绵状变性，即细胞胞浆中空泡形成和感染脑组织内可发现异常PrP淀粉样斑块，无炎症反应。变异型CJD的病理学改变为海绵状变性以丘脑最为明显，且海绵状区域出现的PrP阳性的淀粉样斑块与传统的类型不同。
简述慢病毒脑炎的诊断标准
诊断可采用以下标准： ①在2年内发生的进行性痴呆； ②肌阵挛、视力障碍、小脑症状、无动性缄默等四项中具有其中两项； ③脑电图周期性同步放电的特征性改变： 具备以上三项可诊断为很可能（probable）CJD； 仅具备①②两项，不具备第三项诊断可能（possible）CJD；如患者脑活检
关于慢病毒的相关实验介绍
一、实验目的 对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 二、实验流程 1. 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体； 2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
关于慢病毒载体的概念介绍
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在