简述慢病毒载体的基本原理
慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。 1、包装成分 由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞(如人肾293T细胞)，即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。 2、载体成分 与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、3′LTR换成SV40 polyA等。......阅读全文
简述慢病毒载体的基本原理
慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。 1、包装成分 由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型
简述慢病毒载体的载体质粒
载体质粒上HIV-1的顺式序列通常包括两端的LTR、剪切位点及包装信号Ψ等。此外，研究表明，gag基因5′端的序列可提高载体RNA的包装效率；Rev蛋白需要与Rev反应元件(RRE)相作用，将未剪切的载体转录产物从细胞核转运到胞浆。因此，Naldini等在载体上保留了gag基因5′端350bp的
简述慢病毒载体的辅助成分
慢病毒载体辅助成分包括： 慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装
关于慢病毒载体的介绍
慢病毒载体（Lentiviral vector）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定
关于慢病毒载体的概念介绍
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
病毒包装技术——慢病毒载体构建及包装流程
一、实验流程（1和2为并列步骤）慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
高滴定度慢病毒载体产物实验
基本方案 高滴定度 HIV-I 基本载体转染 293T 细胞实验步骤实验材料293T细胞 试剂、试剂盒杜氏改良培养基
高滴定度慢病毒载体产物实验
实验材料293T细胞试剂、试剂盒杜氏改良培养基TE 缓冲液CaCl22 X HeBSPBS漂白剂仪器、耗材乙醇喷壶组织培养皿培养箱灭菌离心管过滤器组织培养瓶实验步骤展开
高滴定度慢病毒载体产物实验
基本方案 高滴定度 HIV-I 基本载体转染 293T 细胞实验步骤 实验材料 293T细胞
慢病毒载体相关知识问答大总结
慢病毒包装技术专题Q:什么是慢病毒 ?A: 慢病毒载体 (Lenti vector)是用于感染细胞以实现稳定导入基因或siRNA的病毒载体系统，其感染效率可以达到100%。慢病毒和细胞结合后通过包装蛋白将含有目的基因或者干扰序列释放到细胞内。慢病毒RNA通过逆转录酶转录为DNA。DNA整合前复合
关于慢病毒载体的包装成分介绍
包装成分的构建应在不重组病毒的装配和感染力的前提下，尽可能地减少无关的HIV-1蛋白的表达，为野生型病毒的恢复设置障碍。Naldini等在构建包装质粒时，阻止env基因的表达。在此基础上，Zufferey等将包装包装质粒上表达调节蛋白Nef、Vif、Vpr和Vpu的4个基因分别删除或联合删除。这
关于慢病毒载体存在的问题分析介绍
尽管慢载体的研究有了很大进展，但距离临床应用还有很长的路要走。首先，重组病毒的滴度还不够高，除Naldini等报道的结果外，其余均在101TU/ml～103TU/ml之间，难以达到体内应用的需要；其次，由于HIV复杂的生物学性质，要像常用的小鼠逆转录病毒载体那样建立稳定的HIV载体包装细胞十分困
关于慢病毒载体的基本信息介绍
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使
关于慢病毒载体的包膜蛋白介绍
采用表达水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G的质粒和双嗜性小鼠白血病病毒(MLV)包膜蛋白Env的质粒，分别取代表达HIV本身包膜蛋白Env的质粒，使HIV-1载体颗粒包上了VSV或双嗜性MLV的 包膜。这样做的结果至少具有三个方面的积极意义： ①包膜的更换进一步降低了慢病毒载体恢复成野生型病毒的
病毒包装技术3——慢病毒载体构建及包装流程介绍
1 菌液的准备 1.1. 取含目的质粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超净台用接种环划线于氨苄抗性的平板上，37℃倒置培养12-16h。待平板长出菌落，挑选生长状态良好的单克隆菌落。若无目的质粒的菌液，则需取库存质粒进行转化，然后挑单克隆摇菌。 1.2. 将单
简述慢病毒脑炎的诊断标准
诊断可采用以下标准： ①在2年内发生的进行性痴呆； ②肌阵挛、视力障碍、小脑症状、无动性缄默等四项中具有其中两项； ③脑电图周期性同步放电的特征性改变： 具备以上三项可诊断为很可能（probable）CJD； 仅具备①②两项，不具备第三项诊断可能（possible）CJD；如患者脑活检
简述慢病毒脑炎的临床表现
80%-90%的CJD呈散发型。发病年龄25-78岁，平均58岁，男女均可罹患。 文献报道，CJD意外传播给人类而致病的潜伏期为1.5～2.0年。而其他病例潜伏期可长达30年。 散发型CJD患者多隐匿起病，缓慢进行性发展，临床可分三期： ①初期：表现乏力、易疲劳、注意力不集中、失眠、抑郁和
简述慢病毒脑炎的影像学检查
头颅CT可见逐渐进展的脑萎缩。头颅MRI是目前CJD患者的重要的无创性检查。散发性CJD病例MRI的DWI及FLAIR相可见尾状核头及壳核高信号，并可见大脑皮质“缎带样”高信号。变异型CJD患者MRI的T2加权像和质子密度像检查可以见到丘脑枕核对称性高信号，称为“枕征”以及在丘脑背内侧核也常可见
简述慢病毒脑炎的治疗及预后
迄今为止尚未发现对本病有效的治疗方法，有所治疗和护理手段均按常规对症处理。对肌阵挛发作可应用氯硝西泮或丙戊酸钠等对症治疗。 本病预后极差，90%病例于病后1年内死亡，5%死于l-2年，偶有患者可存活长达5年之久。最常见的直接死亡原因是肺炎。
使用串联切向流过滤高效浓缩慢病毒载体
简介VSV-G-假型自我灭活慢病毒载体是不可或缺的生物实验工具之一，与之前的γ-逆转录病毒载体不同的是，慢病毒载体可转导非分裂细胞，并可携带更多的转基因盒，在细胞中的转基因表达时间也更长，即可获得更高的滴度，而其遗传毒性相对较低。一般情况下产毒细胞上清液中的载体滴度足以转导常规细胞系，但原代细胞较难
简述腺相关病毒的载体特点
1、安全性好 2、对肌肉、肝脏、神经组织等感染效率高 3、载体自身免疫原性低 4、长期表达 5、比较稳定,易于保存和运输
简述腺相关病毒载体的应用
经过十几年的研究，重组腺相关病毒的生物学特性已被深入了解，尤其是其在各种细胞、组织和体内实验中的应用效果方面已经积累了许多资料。在医学研究中，rAAV被用于多种疾病的基因治疗的研究（包括体内、体外实验）；同时作为一种有特点的基因转移载体，还广泛用于基因功能研究、构建疾病模型、制备基因敲除鼠等方面
简述腺相关病毒载体的基本特点
一、优点 在辅助腺病毒存在下，AAV可以高效定点整合至人染色体中；而现在的AAV载体已经不需要腺病毒辅助，不插入宿主的基因组，而是游离于宿主细胞基因之外，呈卫星状稳定表达。 腺相关病毒载体（AAV）体内的感染效率极高。不同血清型可以相对特异性的感染心脏，肝脏，骨骼肌等。 腺相关病毒是RG1
应用慢病毒载体检测CRISPRCAS9和TALEN脱靶
近日，国际生物学期刊nature biotechnology在线刊登了美国科学家的一项最新研究成果，他们应用整合酶缺陷的慢病毒载体（IDLV）检测CRISPR-CAS9和TALEN对基因组造成的脱靶效应，最低可检测1%的脱靶频率。这项研究或对推广CRISPR-CAS9和TALEN技术，保证基因操
简述逆转录病毒载体的缺点
保留病毒颗粒的包装信号，而缺失病毒颗粒包装蛋白基因；它可以克隆并表达外源基因，但不能自我包装成有增殖能力的病毒颗粒。 （1）随机整合，有插入突变、激活癌基因的潜在危险； （2）逆转录病毒载体的容量较小，只能容纳7 kb以下的外源基因。
慢病毒包装的原理
病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。简单来说，就是把相应的涉及相应功能的元件进行替换或者删除。慢病毒
慢病毒实验程序
含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化，提取慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3） 培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4） 病毒的纯化和浓缩。 5） 分装、- 80 ℃保存。 6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后，可用于：（1）感染原代培养细胞；（2）制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株；（3）in vivo的基因操作、转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种，具有反转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动
慢病毒包装实验
实验材料 病毒试剂、试剂盒 无血清培养基脂质体胰酶含血清的培养基DMEM仪器、耗材 EP管6孔板CO2培养箱高速离心机-80°C冰箱实验步骤 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血