一步脱蜡法在FFPE样本DNA提取中的应用
什么是FFPE福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。FFPE技术的应用福尔马林由于可以与蛋白氨基发生不可逆交联,所以对保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性方面均优于其他固定液。因此,FFPE技术长期以来在临床检验、医学科学研究中得到广泛应用,尤其是细胞形态学研究和肿瘤病理学研究。随着这几年分子诊断领域的不断发展,FFPE技术也越来越多的被应用在对肿瘤疾病进行分子诊断。为什么要脱蜡如果要对FFPE组织进行分子生物学研究,最首先的就是要进行DNA的提取。 但是固定剂的交联作用对核酸是有害的,福尔马林石蜡和交联作用会妨碍核酸的提取,抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外,石蜡阻碍消化液对组织的渗透,从而抑制......阅读全文
一步脱蜡法在FFPE样本DNA提取中的应用
什么是FFPE福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。FFPE技术的应用福尔马林由于可以与蛋白氨基发
如何充分脱蜡?
(1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高
切片制作流程中脱蜡至水包括哪些环节
取材,固定,脱水,透明,透蜡,包埋,切片,贴片,染色,透明,封藏等步骤。石蜡切片操作步骤:1、取材2、固定3、脱水:30%--50%---70%(每步60分钟)---85%---95%--100%---100%(每步30钟)。4、透明:转入1/2二甲苯+1/2无水酒精混合液20ml透明1h,纯二甲苯
美借助“脱蜡铸造工艺”打印出三维脉管系统
组织工程和再生医学领域不断取得新进展,人们希望有一天能用病人自己的细胞,培养出各种人造器官,把病坏器官替换下来;或者培养出动物肌肉来做牛排,而不再杀牛取排。生物工程师们已经能在二维层面培养出任何一种组织类型,但要跨越到三维,还面临着不小的障碍。如果让大量细胞简单地堆在一起,没有合理的内部结构,
一步法提取质粒DNA
一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。主要步骤如下:收集1.5mL菌体,彻底除去培养基;加入50ulSTE缓冲液重悬菌体;加入50ul酚:氯仿;异戊醇(25:24:1),混匀;12000rpm离心5分钟,取上清到另一离心管中;加入NH4Ac至终浓度2M,并加入2倍体积的乙醇,混匀,室温或冰上放置
总RNA提取实验——一步法
实验材料RNA试剂、试剂盒乙酸钠氯仿异戊醇异丙醇乙醇SDS酚仪器、耗材离心机分光光度计摇床实验步骤1. 组织来源材料:100 ng 组织加1 ul 变性液,在玻璃Teflon匀浆器中将其匀浆。2. 培养细胞:离心弃悬浮细胞培养液或倒去单层培养细胞培养液(不需用生理盐水洗涤),每107细胞加入1
一步法检测肝素的相关介绍
一步法测量肝素使得检测更加简单,并缩短了时间。这种方法不添加外源性AT。 检测是基于竞争抑制原理。加入Xa到血浆中与底物混合,立即同时有2个反应:底物被Xa水解和Xa被肝素-AT复合物抑制。一旦反应达到平衡,底物中释放出的pNA与待测血浆中肝素浓度成反比。在这个检测中,没有添加外源性的AT,完
一步法RT_PCR详细步骤
1.材料和方法Access RT-PCR System 试剂盒 (A1250):Promega 公司产品。500u AMV Rev 目的基因 se Transcriptase, 5u/ul500u Tfl DNA Polym 目的基因 ase, 5u/ul1 ml AMV/Tfl 5×Reactio
大肠杆菌转化实验——一步法
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 TSS葡萄糖LB仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 按1:100的比例将过夜培养的菌液如人到新鲜的LB培养液中,于37℃培养至为OD600为0.3~0.4。 2. 加入等体积的2x SS于菌液中,在冰上温和地混匀。 3. 将10
双位点一步法的操作步骤
在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELIS
小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞
PriCells-小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞 基本原理活细胞(密度较小)和死细胞(密度较大)密度不同,从而有助于将活的淋巴细胞和红细胞分离。 附加材料高密度溶液:Ficoll-Paque(Ficoll和泛影酸钠;Pharmacia LKB)或Lympholyte-M(Cedarlane)
粪便潜血单克隆抗体一步法试验
粪便潜血试验已被视为消化道出血的重要筛选指标,其试验方法主要分为化学方法和学方法两大类,近年来为解决潜血试验的特异性,已有应用免疫学方法的趋势。我们对免疫学方法中的单克隆抗体(单抗)一步法进行了临床和方法学的评价试验,报告如下。 一、材料与方法 1.试剂及操作:单抗一步检验法试剂盒(
双位点一步法和间接法区别
间接法是利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。双位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。在一步法测定中,应注意钩状效应,类同于沉淀反应中抗原过剩的后带
关于双位点一步法的基本介绍
在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的EL
trizol法提取RNA的方法及每一步的原理
实验步骤:1. 提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解:提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5~106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞;2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在试问15~30℃下放置5分钟;3
一步法快检卡法检测粪便中的幽门螺杆菌抗原(HpSA)
应用范围HpSA一步法快检卡(ImmuoCard STAT HpSA),是一种体外准确检测人类粪便中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)抗原的方法。粪便抗原检测可以用来诊断Hp感染,以及确定Hp根除治疗后Hp是否被根除。常规医疗经验建议采用任何检测方法确定Hp是否被根除都应当
Hepatology:新方法允许一步法诊断HCV感染
当前诊断丙型肝炎病毒(HCV)感染的标准方法需要两个连续的步骤:用于筛选的HCV抗体测试,随后进行HCV RNA RT-PCR测试来验证病毒血症性HCV(viremic HCV, V-HCV)感染(编者注:即导致病毒血症的HCV感染)。这使得它未最优化、成本高、不方便、耗时和不能够在全球广泛使用或负
Hepatology:新方法允许一步法诊断HCV感染
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简述一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法
一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.
一步法荧光定量PCR(染料)试剂盒说明
介绍 BIOGHC Elitefast SYBR One Step Kit专为以RNA为模板的定量PCR检测而设计。使用BIOGHC Elitefast SYBR One Step Kit,逆转录和定量PCR在一个反应管内一步完成,中间无开管和移液动作,操作非常简便,也大大提高了实验的效率,
双位点一步法的原理和操作步骤
在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELIS
双位点一步法与间接法的区别
间接法是利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。双位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。在一步法测定中,应注意钩状效应,类同于沉淀反应中抗原过剩的后带
Cell-Rep:一步法让干细胞变成神经元
本文亮点: 该研究找到了将人类多能干细胞(hPSC)直接诱导为GABA能神经元(iGN)的遗传因子 iGN表达端脑中间神经元标记物和亚型标记物SST iGN能够在体外实现功能上的成熟,释放GABA,并在体外形成突触网络 iGN可以在体内整合到宿主的突触回路中 近日,来自新加坡国立大学的
安捷伦发布AffinityScript一步法RTPCR试剂盒
安捷伦科技公司发布用于克隆、基因表达和定量的一步法RT-PCR试剂盒 2010年1月6日,北京安捷伦科技公司(NYSE:A)今天宣布推出了AffinityScript 一步法 RT-PCR试剂盒。这一试剂盒的问世意味着安捷伦Stratagene 产品部又一次携市场领先的高性能解决方案挺进一
双位点一步法与间接法区别有哪些?
间接法是利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。双位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。在一步法测定中,应注意钩状效应,类同于沉淀反应中抗原过剩的后带
关于-一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法介绍
一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定。借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。
低丰度核酸反转录及扩增实验——一步法
实验材料核酸试剂、试剂盒dNTPMnCl2MgCl2BSArTth DNA聚合酶仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤1. 用过氧化物酶,蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。2. 配置如下一步反应体系(总体积100 μl)(1)0.5 μl 100 μmol/l 正向引物(终浓度0.5 μmol/l)(2)
一步法超级荧光定量PCR试剂盒(探针)说明
介绍 BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit专为以RNA为模板的定量PCR检测而设计,适合荧光探针法定量PCR分析。使用BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit,逆转录和定量PCR在一个反应管内一步完成,中间无开管和移
安装换热器也要一步一步地做
想要使换热器充分发挥出好的使用效果,要在使用之前的安装时多下功夫,安装工作做的得当,才能保证设备日后的顺利使用。它的正确的安装方式是一定需要的。 1、基础验收:在安装换热器之前,检查基础表面概况,平面位置,形状和尺寸以及预留孔是否符合实际要求,以及地脚螺栓的位置是否正确,螺帽和垫圈是否齐全,