详述共聚焦显微镜荧光探针的选择步骤及方法
在用共聚焦显微镜进行的试验中,一些实验指标可以利用样品自身或外源性物质的自发性荧光进行检测,但大多数待测物质不具备可测荧光,需要采用荧光探针标记的方法使其具有可测定的荧光信号。那么,怎样选择共聚焦显微镜荧光探针呢? 1、根据实验目的确定需要检测的指标 一旦检测指标确定,则荧光探针的选择范围也随之确定。可见,实验中选择使用何种荧光探针是由实验目的决定的。例如,实验目的是研究发生房颤时心肌细胞内钙离子的变化情况,则可以确定待测物质为心肌细胞内的钙离子,荧光探针的选择范围就限定为能够标记活细胞的钙离子探针。 2、确定可供选择的荧光探针的范围 对于新的实验物质或指标哦,如果实验目的不是探索新的荧光探针,则可以选择应用成熟的探针和标记方法。可以通过查找权威的文献或国内外知名试剂公司产品目录,确定可以标记待测物质的荧光探针种类或范围。 3、考察荧光探针的特性是否符合荧光样品的制备要求 荧光探针的特性直......阅读全文
详述蒸馏实验的操作步骤
加料:把待蒸馏液通过玻璃漏斗小心倒入蒸馏瓶中,要注意不使液体从支管流出。加入几粒助沸物,安好温度计,温度计应安装在通向冷凝管的侧口部位。再一次检查仪器的各部分连接是否紧密和妥善。 加热:用水冷凝管时,先由冷凝管下口缓缓通入冷水,自上口流出引至水槽中,然后开始加热。加热时可以看见蒸馏瓶中的液体逐
激光扫描共聚焦荧光显微镜荧光显微镜系统简介
显微镜是LSCM的主要组件,它关系到系统的成像质量。显微镜光路以无限远光学系统可方便地在其中插人光学选件而不影响成像质量和测量精度。物镜应选取大数值孔径平场复消色差物镜,有利于荧光的采集和成像的清晰。物镜组的转换,滤色片组的选取,载物台的移动调节,焦平面的记忆锁定都应由计算机自动控制。 激光扫
实验动物技术:激光扫描共聚焦显微镜操作步骤及注意...
实验动物技术:激光扫描共聚焦显微镜操作步骤及注意事项激光扫描共聚焦显微镜可测定的样品种类很多.包括生物材料、组织(切片)、细胞(亚细胞)结构等。样品中荧光的来源主要有如下几种:自发荧光(autofluorescence)、荧光染色、免疫荧光、荧光蛋白、诱发荧光(induced fluoresce
生物显微镜的使用方法及步骤
一、取镜和安放 1.右手握住镜臂,左手托住镜座。 2.把显微镜放在实验台上,略偏左(显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处)。安装好目镜和物镜。 二、对光 3.转动转换器,使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离)。 4.把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼
光学显微镜的操作步骤及保养方法
一)正置显微镜1、安放右手握住镜臂,左手托住镜座,使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳,要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧,距离桌边3~4厘米处。2、清洁检查显微镜是否有毛病,是否清洁,镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭,如有胶或粘污,可用少量二甲苯清洁之。3、对光镜筒升至距载
生物显微镜的使用方法及步骤
一、取镜和安放 1.右手握住镜臂,左手托住镜座。 2.把显微镜放在实验台上,略偏左(显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处)。安装好目镜和物镜。 二、对光 3.转动转换器,使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离)。 4.把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开,
实时荧光定量-PCR-所用荧光探针及功能介绍
应用于实时定量 PCR 检测体系中的荧光探针主要有两种:一种是 TaqMan 探针,一种是分子信标探针。Tyagi 和 Krammer(1996)首次建立了分子信标探针,在同一寡核苷酸探针的5'端标记荧光素、3'端标记淬灭剂(DABCYL)分子信标探针能形成发夹结构,探针的噜扑环(L
基因芯片检测原理(二)
1.荧光标记杂交信号的检测方法使用荧光标记物的研究者最多,因而相应的探测方法也就最多、最成熟。由于荧光显微镜可以选择性地激发和探测样品中的混合荧光标记物,并具有很好的空间分辨率和热分辨率,特别是当荧光显微镜中使用了共焦激光扫描时,分辨能力在实际应用中可接近由数值孔径和光波长决定的空间分辨率,而在传统
怎样选择荧光显微镜的光源?
我们在选择荧光显微镜(Fluorescence Microscope)的光源时,要注意的是弧光的尺寸,就是光源发光区的大小,例如50W的汞灯,它的弧光尺寸为110X0.13MM, 200W的弧光尺寸为212X0.15MM,而100W的弧光尺寸为0.125×0.125m,能否正好充满系统的入瞳使光能充
线粒体定位型高选择性ATP荧光探针的构建
ATP(三磷酸腺苷)是生物体内不可缺少的生物大分子,在细胞呼吸、酶催化、能量和信号传递过程中起到关键的作用。线粒体是产生ATP的主要场所,ATP的含量变化必然会对线粒体的功能产生不可逆的影响。科学研究表明,线粒体的功能紊乱与心血管疾病、恶性肿瘤以及帕金森氏症等疾病密切相关。因此,发展一种可靠并能
激光扫描共聚焦荧光显微镜的缺点
标记染料的光漂白:为了获得足够的信噪比必须提高激光的强度;而高强度的激光会使染料在连续扫描过程中迅速褪色。 光毒作用:在激光照射下,许多荧光染料分子会产生单态氧或自由基等细胞毒素。限制扫描时间、激发光强度,以保持样品的活性。
激光扫描共聚焦荧光显微镜的缺点
标记染料的光漂白:为了获得足够的信噪比必须提高激光的强度;而高强度的激光会使染料在连续扫描过程中迅速褪色。 光毒作用:在激光照射下,许多荧光染料分子会产生单态氧或自由基等细胞毒素。限制扫描时间、激发光强度,以保持样品的活性。
激光扫描共聚焦荧光显微镜的优点
激光扫描共聚焦荧光显微镜相对普通荧光显微镜的优点 (1):LSCM的图象是以电信号的形式记录下来的,所以可以采用各种模拟的和数字的电子技术进行图象处理:(2)LSCM利用共聚焦系统有效的排除了焦点以外的光信号干扰,提高了分辨率,显著改善了视野的广度和深度,使无损伤的光学切片成为可能,达到了三维
共聚焦的共焦显微
共焦显微技术是由美国科学家M.Minsky在1957年提出的,当时的主要目的是消除普通光学显微镜在探测样品时产生的多种散射光。20世纪60年代通过提高扫描精度突破了普通宽场成像的分辨率限制,在20世纪80年代研制成商用共焦显微镜。共焦显微镜分为普通光照明激发和激光照明激发两种类型,而以后者应用最为广
扫描探针显微镜、使用其的试样观察方法及装置制造方法
一种扫描探针显微镜、使用其的试样观察方法及装置制造方法,可以高的总处理能力不破坏试样地测量试样的正确的立体形状信息,并且可测量包含垂直侧壁或悬垂的试样的正确的立体形状信息。在仅在测定点使探针接触,在朝向下一测定点时,一旦提升探针并使其退避之后,移动到下一测定点,然后通过使探针接近,不破环试
荧光显微镜检测原理及方法
一、荧光显微镜荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像(图3-15)。图3-15 荧光显微镜的结构和主要部件(一)光源现在多采用200W的超高压汞灯作光源,它是用石英玻璃制作,
宽场荧光和共聚焦显微镜理论
在共聚焦显微镜中,测定共定位的能力受限于光学系统的分辨率及用于照明样品的入射光波长。宽场荧光和共聚焦显微镜理论分辨率约为 200nm,但在实际上,由于各种原因这个数降到 400nm 和 600nm 之间,原因包括显微镜光路未完全对准、光学折射率波动、光学像差及样品制备的不合适。然而,对于一个已经完全
激光扫描共聚焦荧光显微镜简介
激光扫描共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、目前最先进的分子细胞生物学的分析仪器。主要用于观察活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化,定量分析,以及实时定量测定等。
激光扫描共焦显微镜功能介绍
激光扫描共焦显微镜与激光扫描荧光显微镜结构非常相似,但是由于采用了共焦技术因而更具优越性。这种方法可以在荧光标记分子与DNA芯片杂交的同时进行杂交信号的探测,而无须清洗掉未杂交分子,从而简化了操作步骤大大提高了工作效率。Affymetrix公司的S.P.A.Forder等人设计的DNA芯片即利用此方
荧光实验方法的选择
在荧光分析中,可以采用不同的实验方法以进行分析物质浓度的测量。其中最简单的是直接测定的方法。只要分析物质本身法荧光,便可以通过测量其荧光强度以测定其浓度。许多有机芳族化合物和生物物质有内在的荧光性质,通常可以直接进行荧光测定。若有其他干扰物质存在时,则应预先采用掩蔽或分离的办法加以消除。 对于有
显微镜自动聚焦的保养方法
显微镜自动聚焦的保养方法: 一、在经济状况可以的情况下,一般实验室要有三防条件:防止震动,实验室不宜靠近震动源、防止潮湿,不宜在潮湿的环境下使用、防止灰尘,不宜在灰尘过多的环境下使用。电压为,220伏特,波动值应该控制在10%之内,50赫兹。温度为,零到四十摄氏度。 二、显微镜自动聚焦视
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
荧光显微镜(Fluorescence microscope) : 荧光显微镜是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同 1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。 二、特点不同 1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定