阴离子交换色谱纯化从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶回收的DNA
实验方法原理 从琼脂糖凝胶中回收的 DNA 片段，如 PCR 产物或酶切 DNA 片段，对进一步酶切具有一定的抗性。这种抗性产生的原因是多方面的，通常将其归为抑制剂的存在。经带正电荷的离子交换树脂纯化的双链 DNA 可有效去除样品中的抑制剂。在低离子强度的缓冲液中，带负电的 DNA 结合到带正电的基质上，如 DEAE-Sephacel 或 DEAE-Sephadex，污染物被洗脱，然后通过提高缓冲液的离子强度，将 DNA 从基质上洗脱下来。由于质粒 DNA 以及单链 DNA-经与基质结合很难洗脱，因此不宜采用 DEAE 树脂纯化。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇异丙醇酚氯仿TE仪器、耗材 一次性小柱子或 2 ml 注射器树脂、预溶胀的 DEAE-纤维素或 DEAE-Sephacel实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇异丙醇酚：氯仿（1:1, V/V)TE ( pH 7.6)TE ( pH 7.6)......阅读全文
DNA小片段的纯化回收
DNA 电泳小于100bp的片断通常在电泳时就比较难观察分辨，需要用分辨率很高的琼脂糖或者丙烯酰胺凝胶。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor琼脂糖。所以实际上对于小片断，可以分为两种情况：一个是真的要回收电泳中特别小的片断，这种情况我们前面有提到，比
琼脂糖凝胶电泳色谱仪分析技术
琼脂糖凝胶电泳色谱仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳技术，广泛用于核酸研究，为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。一、工作原理：琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子的迁移率与其分子量的常用对数成反比。DNA分子构象对迁移率也有影响，迁移率为共价闭环DNA＞直线DNA＞开环双链DNA
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体分类
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体按熔点可分为高熔点（标准）琼脂糖凝胶和低熔点琼脂糖凝胶。一、高熔点（标准）琼脂糖凝胶：制造高熔点琼脂糖凝胶的原料是Gelidium和Gracilaria海藻。这两种琼脂糖的熔点不同，但在实际应用中每种来源的琼脂糖都可以用于分离1～25kb的DNA段。新型的标准琼脂糖具有高凝
凝胶电泳概述
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其
琼脂糖凝胶回收试剂盒
品牌：Qiagen回收范围：70bp-4kb价格：（50包装1,485，约29元/反应）特点：洗涤体积只要10μl，回收产物浓度高，方便后继实验使用方便快捷（wash-and-spin)高回收率回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收（有机溶剂抽提）
羟乙基修饰的琼脂糖可降低链间的氢键数目，并可在比标准琼脂糖更低的温度下熔化和凝固。多糖链上这种替换发生的程度决定了琼脂糖熔化与凝结的确切温度。这一特性构成了从凝胶中回收及操作 DNA 的基础（Wielander 1979; Parker and Seed, 1980)。 本实验来源「分子克隆实验指南
琼脂糖凝胶中DNA的回收（DEAE纤维素膜电泳）
实验方法原理 从琼脂糖凝胶回收 DNA 是通过电泳至带正电荷的 DEAE-纤维素膜上完成的。这种方法首先利用适当浓度的琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片段，然后紧靠目的 DNA 片段条带前方切一裂缝。将一长条 DEAE 纤维素膜插入裂缝。
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收（有机溶剂抽提）
实验方法原理 羟乙基修饰的琼脂糖可降低链间的氢键数目，并可在比标准琼脂糖更低的温度下熔化和凝固。多糖链上这种替换发生的程度决定了琼脂糖熔化与凝结的确切温度。这 一特性构成了从凝胶中回收及操作 DNA 的基础（Wielander 1979; Parker and Seed, 1980)。实验材料
琼脂糖凝胶中DNA的回收（DEAE纤维素膜电泳）
实验方法原理 从琼脂糖凝胶回收 DNA 是通过电泳至带正电荷的 DEAE-纤维素膜上完成的。这种方法首先利用适当浓度的琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片段，然后紧靠目的 DNA 片段条带前方切一裂缝。将一长条 DEAE 纤维素膜插入裂缝。实验材料 限制性内切核酸酶DNA 样品DNA 标准RNA试剂、试剂
琼脂糖凝胶中DNA的回收（DEAE纤维素膜电泳）
琼脂糖凝胶中DNA的回收可应用于：（1）哺乳动物细胞转化；（2）放射性标记。难度系数 5.0共1人点评打分点评实验，有机会获丁当奖励 +收藏 3人收藏琼脂糖凝胶中DNA的回收（DEAE-纤维素膜电泳）标签： 琼脂糖凝胶 DNA的回收 DEAE-纤维素膜电泳 分子克隆实验指南第三版 第5章 方案3琼
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收（有机溶剂抽提）
实验方法原理 羟乙基修饰的琼脂糖可降低链间的氢键数目，并可在比标准琼脂糖更低的温度下熔化和凝固。多糖链上这种替换发生的程度决定了琼脂糖熔化与凝结的确切温度。这 一特性构成了从凝胶中回收及操作 DNA 的基础（Wielander 1979;
琼脂糖凝胶电泳及其影响因素
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DN
DNA指纹的操作方法
从生物样品中提取DNA（DNA一般都有部分的降解），可运用PCR技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA，然后将扩增出的用DNA酶切成DNA片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基
DNA指纹的操作方法
从生物样品中提取DNA（DNA一般都有部分的降解），可运用PCR技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA，然后将扩增出的用DNA酶切成DNA片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基序列
一文读懂基因纯化回收原理
融胶液，可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使DNA能在离心过柱的瞬间，结合到DNA纯化柱上，在一定条件下又能将DNA充分洗脱，从而实现DNA的快速纯化。 1.低熔点琼脂糖挖块法：在琼脂糖主链导入羟乙基修饰后，其凝固点温度降为30度，熔化温度为65度，这一温
凝胶电泳
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大
电泳分析常用方法凝胶电泳
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法 称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,
DNA琼脂糖凝胶电泳原理和操作
【原理】 DNA的电泳原理与蛋白质电泳基本相同。在pH高于其pI时，DNA分子带负电荷。在直流电场中DNA向正极泳动。不同的DNA分子因电荷数、构象和分子量大小的不同，在同一电泳系统中的泳动速度有差异，达到分离的目的。电泳后的凝胶浸泡于溴化乙锭染料中，溴化乙锭分子与DNA分子结合，在紫外线照射下
DNA指纹图谱分析（图）（二）
DNA指纹图谱法的基本操作：从生物样品中提取DNA（DNA一般都有部分的降解），可运用PCR技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA，然后将扩增出的DNA酶切成DNA片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA
一种从凝胶中直接回收DNA进行PCR的方法
分子生物学实验中，常常需要从琼脂糖凝胶或聚丙酰胺凝胶中回收DNA，进行纯化、探针标记或进一步扩增等。鉴于PCR反应具有高度敏感性，微量模板即可扩增出阳性产物。我们从琼脂糖凝胶中直接回收DNA进行PCR，取得较满意的结果，报道如下。 1 材料和方法 1.1 试剂 Taq DNA聚合酶、dNTP、琼
聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收（压碎与浸泡法）
实验方法原理 从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶抑制物及对细胞转染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需时间长，但是工
聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收（压碎与浸泡法）
实验方法原理 从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶抑制物及对细胞转染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需时间长，但是工作量小。回收率少于30%~90%，视 DNA 片段大小
聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收（压碎与浸泡法）
从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶抑制物及对细胞转染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需时间长，但是工作量小。回收率少于30%~90%，视 DNA 片段大小而定。本实验来源「分子
淀粉凝胶电泳的基本方法分类
（1）琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物，是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质，其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖，在结构上比较脆弱，因此在较低的温度下便会熔化，可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
凝胶电泳的主要方法
（1）琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物，是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质，其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖，在结构上比较脆弱，因此在较低的温度下便会熔化，可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
凝胶电泳的分类
（1）琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物，是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质，其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖，在结构上比较脆弱，因此在较低的温度下便会熔化，可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
多糖的分离和纯化几种方法
经过前期对多糖的提取，去除蛋白质、色素、小分子等物质得到粗多糖，而这些粗多糖其实是由很多分子量、结构不同的多糖混合而成。为了得到纯的多糖即均一性多糖，仍需进一步对这些粗多糖进行分离纯化。 1、分步沉淀法 多糖的结构和分子量不同，其极性大小不同，在有机溶剂（如醇或酮）中的溶解度不同，根据这一原
琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物
一．原理 DNA片断的分离与回收是基因工程操作中的一项重要技术，例如可收集特定酶切片断用于克隆或制备探针，回收PCR产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是纯度和回收率：前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应；后者不理想时往往会大大增加前期的工作量。 本实验采
琼脂糖凝胶电泳和蛋白质分离纯化
脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作为介质的一种电泳方法，其兼具“分子筛”和“电泳的双重作用。 琼脂糖(Agarose)是一种线性多糖聚合物，是从红色海藻产物琼脂中提取而来的，当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质，其密度是由琼脂糖的浓度决定的。 经过化学修饰的低熔点的琼脂糖，在
如何配DNA琼脂糖凝胶
琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，因此正确地操作对整个实验来讲很有必要，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。1.称量 我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的TBE缓冲液的体积（mL）即胶的浓度。缓冲液的体积根据胶板的大小而定。如小胶板