阴离子交换色谱纯化从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶回收的DNA
实验方法原理 从琼脂糖凝胶中回收的 DNA 片段,如 PCR 产物或酶切 DNA 片段,对进一步酶切具有一定的抗性。这种抗性产生的原因是多方面的,通常将其归为抑制剂的存在。经带正电荷的离子交换树脂纯化的双链 DNA 可有效去除样品中的抑制剂。在低离子强度的缓冲液中,带负电的 DNA 结合到带正电的基质上,如 DEAE-Sephacel 或 DEAE-Sephadex,污染物被洗脱,然后通过提高缓冲液的离子强度,将 DNA 从基质上洗脱下来。由于质粒 DNA 以及单链 DNA-经与基质结合很难洗脱,因此不宜采用 DEAE 树脂纯化。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇异丙醇酚氯仿TE仪器、耗材 一次性小柱子或 2 ml 注射器树脂、预溶胀的 DEAE-纤维素或 DEAE-Sephacel实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇异丙醇酚:氯仿(1:1, V/V)TE ( pH 7.6)TE ( pH 7.6)......阅读全文
阴离子交换色谱纯化从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶回收的DNA
实验方法原理 从琼脂糖凝胶中回收的 DNA 片段,如 PCR 产物或酶切 DNA 片段,对进一步酶切具有一定的抗性。这种抗性产生的原因是多方面的,通常将其归为抑制剂的存在。经带正电荷的离子交换树脂纯化的双链 DNA 可有效去除样品中的
阴离子交换色谱纯化从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶回收的DNA
从琼脂糖凝胶中回收的 DNA 片段,如 PCR 产物或酶切 DNA 片段,对进一步酶切具有一定的抗性。这种抗性产生的原因是多方面的,通常将其归为抑制剂的存在。经带正电荷的离子交换树脂纯化的双链 DNA 可有效去除样品中的抑制剂。在低离子强度的缓冲液中,带负电的 DNA 结合到带正电的基质上。本实验来
阴离子交换色谱纯化从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶回收的DNA
实验方法原理 从琼脂糖凝胶中回收的 DNA 片段,如 PCR 产物或酶切 DNA 片段,对进一步酶切具有一定的抗性。这种抗性产生的原因是多方面的,通常将其归为抑制剂的存在。经带正电荷的离子交换树脂纯化的双链 DNA 可有效去除样品中的抑制剂。在低离子强度的缓冲液中,带负电的 DNA 结合
琼脂糖凝胶DNA纯化回收试剂盒Promega
Promega Wizard SV Gel and PCR Clean-up System 品牌:Promega回收范围:100bp-10kb价格:(50次包装的试剂盒报价为562元,11元/次)Promega的产品在进口品牌中一向以价格可亲而著称。这个胶回收试剂盒也不例外。并且这个试剂盒的性能参
从琼脂糖凝胶(Agaros-gel)中回收DNA片段
实验概要学会从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的基本技术。实验原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。主要试剂1. 电
从琼脂糖凝胶(Agaros-gel)中回收DNA片段
实验原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。实验试剂1. 电泳缓冲液2. 荧光染料3. 电泳级琼脂糖粉4. 10
从琼脂糖凝胶(Agaros-gel)中回收DNA片段
目的学会从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的基本技术。2.原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。3.器材旋涡混合器,
从琼脂糖凝胶(Agaros-gel)中回收DNA片段实验
实验原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。实验试剂1. 电泳缓冲液2. 荧光染料3. 电泳级琼脂糖粉4. 10
直接从PCR产物回收纯化DNA
1)直接加90-100μl纯化缓冲液于1.5ml离心管,再加入30~300μl PCR反应物,Vortex混合;2)加入1ml树脂轻轻Vortex 3次,每次间隔1分钟;3)将取出拉杆的注射器筒(3ml)装在纯化柱上,加入上述DNA与树脂混合液,然后装上拉杆,慢慢将混合液推进纯化柱内;4)卸下注射器
DNA纯化实验——DNA凝胶回收试剂盒纯化法
DNA纯化可用于:(1)获得高纯度的DNA;(2)浓缩DNA;(3)测序、遗传信息分析等分子生物学应用。实验方法原理本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至 8 μg DNA(70 bp-10 Kb),回收率为 60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中溶解,其中的保护剂能防止线状 D
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中DNA的回收(电洗脱至透析袋)
实验方法原理 这种技术(McDonell et al. 1977 ) 可以从琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶切片回收分子质量范围较宽的双链 DNA,并且产量较高。这种方法多少有些麻烦,必须将凝胶切片单独放入透析袋,因此不能用于回收多种 DNA 样品。但是电洗脱效果很好可以避免其他方法所遇到的
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中DNA的回收(电洗脱至透析袋)
实验方法原理 这种技术(McDonell et al. 1977 ) 可以从琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶切片回收分子质量范围较宽的双链 DNA,并且产量较高。这种方法多少有些麻烦,必须将凝胶切片单独放入透析袋,因此不能用于回收多种 DNA
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中DNA的回收(电洗脱至透析袋)
这种技术(McDonell et al. 1977 ) 可以从琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶切片回收分子质量范围较宽的双链 DNA,并且产量较高。这种方法多少有些麻烦,必须将凝胶切片单独放入透析袋,因此不能用于回收多种 DNA 样品。但是电洗脱效果很好可以避免其他方法所遇到的问题。本实验来源「分子克隆实
从琼脂糖凝胶中纯化-PCR-片段实验
试剂、试剂盒 乙醇 溴化乙锭 电泳缓冲液 PCR 片段 琼脂糖凝胶 细胞和组织
从琼脂糖凝胶中纯化-PCR-片段实验
Wizard SV 胶和 PCR 纯化系统是利用硅基法从琼脂糖凝胶中或从 PCR 扩增反应混合物中直接纯化 PCR 片段的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒乙醇溴化乙锭电泳缓冲液PCR 片段琼脂糖凝胶细胞和组织仪器、耗材微量离心管解剖刀紫外灯真空装置实验
从琼脂糖凝胶中纯化-PCR-片段实验
试剂、试剂盒 乙醇溴化乙锭电泳缓冲液PCR 片段琼脂糖凝胶细胞和组织仪器、耗材 微量离心管解剖刀紫外灯真空装置实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂(1)乙酵(95%)(2)嵌入染料,如溴化乙锭(3)TAE 电泳缓冲液 40 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷-醋酸盐,pH8.2
阴离子交换色谱柱纯化步骤使用能力
阴离子交换色谱柱介质的选择 离子交换介质首先要考虑目的分子的大小,因为目的分子会影响其接近介质上的带电功能集团,因此也会影响介质对目的分子的动力载量,从而影响其分离。 对于大多数纯化步骤来说,建议从开始的阶段使用强离子交换柱,可在摸索方法的过程中有一个宽的pH范围。对于已知等电点的蛋
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(用琼脂糖酶消化)
实验方法原理 可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中,琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解为双糖。这样获得的 DNA 再经酚抽提、乙醇沉淀进行纯化。由于该
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(用琼脂糖酶消化)
可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中,琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解为双糖。这样获得的 DNA 再经酚抽提、乙醇沉淀进行纯化。由于该法较为温和,因此特别适用从脉冲场琼脂糖凝胶中 回收高分子质量的 DNA,从恒强电
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(用琼脂糖酶消化)
实验方法原理 可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中,琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解为双糖。这样获得的 DNA 再经酚抽提、乙醇沉淀进行纯化。由于该法较为温和,因此特别适用从脉冲场琼脂糖凝胶中 回收高分子质
从聚丙烯酰胺凝胶中回收-RNA-片段
试剂、试剂盒 溴化乙锭 洗脱缓冲液 储存液 8mol LLiCl 溶液 异丙醇 70% 乙醇 1XTBE 缓冲液仪器、耗材 聚丙烯酰胺凝胶电泳槽 金属小铲 Whatman3 MM 滤纸 玻璃棒 表面皿 保鲜膜 透射紫外灯 刀片 Texta 笔 射线胶片实验步骤 一材料与设备1) 溴化乙锭:10 mg
从聚丙烯酰胺凝胶中回收-RNA-片段
试剂、试剂盒 溴化乙锭 洗脱缓冲液 储存液 8mol LLiCl 溶液 异丙醇 70% 乙醇 1XT
琼脂糖凝胶电泳DNA回收实验方法和注意事项
实验前准备及重要注意事项 1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。 2.使用前请检查Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。 3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验
琼脂糖凝胶电泳DNA回收实验方法和注意事项
实验前准备及重要注意事项1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。2.使用前请检查Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验要求较高,请尽量使用TAE电
DNA酶切及凝胶电泳的相关内容介绍
琼脂糖是从海藻中提取出来的一种多聚多糖,是由D-半乳糖和L-半乳糖以α-1,3和β-1,4糖苷键相连形成的线状高聚物。琼脂糖遇冷水膨胀,溶于热水成溶胶,冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。 琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以
蛋白质纯化技术的方法有哪几种
一、电泳:在克隆基因表达产物的检测分析过程中,电泳是常用的方法,但在纯化蛋白时,通常都不采用电泳的方法。由于某些特殊的目的,需要用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化蛋白质,常用下述方法进行:①从电泳后的凝胶上切下所需的相应条带,将凝胶压碎,用缓冲液浸泡,使其中的蛋白质扩散出来,从而获得纯化的蛋白质。此法简单但回
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪载体概述
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪用于分离、鉴定和纯化DNA段,是分子克隆的核心技术之一。该技术操作简单,迅速,能分离用其它方法如密度梯度离心等不能满意分离的DNA段。此外,凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭直接观察到,甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外线激发下也能直接检测到。这
2.9-从聚丙烯酰胺凝胶中回收-RNA-片段
从聚内烯酰胺凝胶中回收 RNA 片段最好的方法是粉碎浸泡法。此法能从变性胶屮很好的回收高纯度的单链 RNA。但是此法不适用于长转录产物,因为它既费时间效率又低,例如: 超过 3kb 的 RNA 的回收效率不到30%。但是对于回收小片段 RNA 此方法是十分有效的。试剂、试剂盒溴化乙锭洗脱缓冲液储存液
生物大分子的色谱纯化方法
一、生物大分子色谱纯化方法的选择思路通常在做纯化前对自己的目标物质特性了解越多对纯化将会越有利,如果不太了解,也可以通过电泳知道目标物质和杂质的情况,找到一种简单的鉴定方法,此外在纯化前必须先建立可靠的活性测定的方法。如果是未知的蛋白,那么通常可以有几种简单的摸索:1. 凝胶过滤色谱。这个方法很常用
DNA片段回收与纯化
质粒、噬菌体等经酶切,电泳;PCR产物经电泳后,常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化,用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等,也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条,将切下的胶条(小于0.6g)捣碎,置于