粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LBNaOH氯霉素Tris·ClNaCl仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜离心机布氏漏斗培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸，故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中，加入10~20 ml LB培养基。3. 将标记好方向的硝酸纤维素滤膜放入含抗生素的LB平板中，并移至过滤装置，再将细菌悬液用吸管加到滤膜上，注意不要往滤膜边缘4~5 mm 处加液体。 4. 慢慢抽吸液体，待菌悬液被吸干之后，揭下滤膜并移至含抗生素的平板中，置于37℃培养，直至长出直径达1~2 mm 的菌落。5. 标记并浸湿另一张硝酸纤维素滤膜。6. 先将长有克隆的滤膜（......阅读全文
酵母菌基因组转座子的诱变实验
实验方法原理 实验材料 诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒 10×TE缓冲液 pH 8.0无菌 E. coli tets kans (如 DH5c×)14 cm的LB培养基平板培养基中加入3 mg mL的四环素和40μg mL的卡那霉素LB培养基丙三醇无菌NotⅠ非限制性内切核酸酶及
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验1
一个DNA位点识别探针被用来从表达文库中检测合适的重组克隆，并对 之进行纯化，证明其中编码了具有一定序列特异性的DNA结合域。这种策略排除了为 分离其基因而对序列特异性DNA结合蛋白进行纯化的过程；只需要一个合适的构建于 λgtll载体中的cDNA文库和一个DNA识别位点的探针。用位点识别DNA筛选
噬菌体文库的扩增实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但
酵母菌基因组转座子的诱变实验——基本方案
实验材料诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒10×TE缓冲液 pH 8.0无菌 E. coli tetskans (如 DH5c×)14 cm的LB培养基平板培养基中加入3 mg mL的四环素和40μg mL的卡那霉素LB培养基丙三醇无菌NotⅠ非限制性内切核酸酶及缓冲液Ura3_酵母菌培养一
关于涂布平板法的实验原理和器材介绍
一、涂布平板法的实验原理： 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 二、涂布平板法的实验器材： 1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。 2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3．器材：90
噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、
如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、
BAC/PAC－文库的构建
BAC文库的构建 实验方法原理 BAC是一种装载DNA大片段的克隆载体系统，用于人、动物和植物基因组文库构建。BAC具有插入片段较大(几千个碱基至350kb)
YAC实验——YAC文库筛选
实验步骤1. YAC中心实验室用于筛选文库的方法进展很快。2. 将一块或多块微量滴定板微孔中的YAC克隆转印到尼龙膜上，用单拷贝探针进行杂交，就可以筛选YAC文库了。3. 然而，由 于杂交实验的信噪比较低以及制备所有的转印尼龙膜所需的花费巨大，绝大多数实验室已采用PCR方法来筛选文库。4.
血清粘蛋白测定实验
实验方法原理0.6 mol/L 过氯酸测定血清中蛋白质时粘蛋白不被沉淀，而存留于滤液中，再加磷钨酸使粘蛋白沉淀，然后以酚试剂测定其中蛋白质的含量。实验步骤注意事项1、本法影响因素很多。正常值观察报告不一，故无论用蛋白或酪AA表示结果，均须说明所采用的方法及正常值。2、操作中血清与154mmol/L氯
血清粘蛋白测定实验
实验方法原理0.6 mol/L 过氯酸测定血清中蛋白质时粘蛋白不被沉淀，而存留于滤液中，再加磷钨酸使粘蛋白沉淀，然后以酚试剂测定其中蛋白质的含量。实验步骤一、实验试剂：1. 154mmol/L氯化钠溶液．2. 1.8mol/L过氯酸：取含水量为70％－72％过氯酸28ml，加蒸馏水稀释200ml并标
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用位点识别DNA筛选λgtll表达文库 用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环 从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性 实验方法原理
Raf－蛋白－Ras－结合结构域的简并进化库合成以及利...（二）
3.3 文库的克隆和回收( 1 ) 插入片段和载体的理想比例是（2 : 1 ) ~（3 : 1 )。我们将用于连接的 DNA 浓度限制在 10 ng/μl，使用 1 mmol/L 的 ATP，16°C 连接过夜（见注 8 )。( 2 ) 连接反应体系于 65°C 处理，使酶失活，用氯仿抽提，然后用乙
酵母细胞中质粒的加工实验——从酵母细胞中分离质粒
利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1，它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生长，而不能在37°C形成菌落。如果用一个酵母菌基因组文库转化cdc101-1菌株，通过分离温度不敏感菌落，那么就可能分离到一个可以互补这种突
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用实验
酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方
BAC/PAC－文库的构建
BAC (Bacterial Artificial Chromosome，细菌人工染色体)文库可用于：（1）全基因组测序；（2）构建物理图谱、染色体步查；（3）基因筛选；（4）基因图位克隆。实验方法原理BAC是一种装载DNA大片段的克隆载体系统，用于人、动物和植物基因组文库构建。BAC具有插入片段较
蛋白质间相互作用研究方法1
确定各种可能与目标蛋白相互作用的蛋白质，“撒大网”l 双杂交和其他双成分系统第一阶段：诱饵-LexA融合蛋白的鉴定诱饵-LexA融合蛋白的构建1．将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的LexA融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列。形成的
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用
一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内，得到包含 RNA 质粒的细胞，再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库（杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性，与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白
血平板制备实验
实验方法原理 肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外，还可判断溶血情况，菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤 成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
巧克力平板制备实验
实验方法原理主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源、氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I，为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。巧克力平板培养基还能够培养其他细菌，主要的原因是血液中有V、X因子，这两种因子是位于红细胞中的，一般细菌不
血平板制备实验
实验方法原理肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外，还可判断溶血情况，菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
巧克力平板制备实验
实验方法原理 巧克力平板应用羊血或免血制备。因其中含有Ⅹ和Ⅴ因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好，凡疑有这些菌种存在的标本，均须接种巧克力平板。血液标本培养，增苗后有细苗生长，若移种巧克力平板上，有利于分离到更多的细菌。实验步骤 成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤2
10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇500μg/ml 牛血清白蛋白（组分Ｖ.Sigma产品）（可用可不用）该缓训液应分装成小份，贮存于－20℃。另外，再设立两个对照反应，其中含有（1）只有质粒载体；（
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤1
外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂
外显子捕获与扩增
实验材料 大肠杆菌菌株 HB101 质粒 pSPL3 COS-7 细胞 载体 pBluescriptⅡ 大肠杆菌 DH5α
质粒DNA的大量提取和纯化实验——碱法
在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA,为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。实验材料细菌试剂、试剂盒STE酚 氯仿NaClPEG乙醇仪器、耗材离心管离心机抽干机实验步骤1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用实验
实验方法原理 酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。试剂、试剂盒 YPD 和 SD 培养基鲑
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
实验方法原理 实验材料 含有多个串联拷贝识别位点的、缺乏识别位点的（或含识别位点突变的）pUC重组质粒DNA试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶EcoRI及HhdIII1 mol L Tris • Cl pH 7. 55 mmol L dCTPdGTPdTTPdATP5000 Ci mmol [α32P]
基因组文库的扩增实验
实验方法原理 通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增，平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能，该扩增过程可被省略，而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性，部分原因在于在连续几轮的噬菌体生长中，对生长缓慢的重组噬菌体来说是十分不利的
随机RNA文库的SELEX筛选实验
实验方法原理 SELEX 技术是一种利用随机寡核苷酸（DNA 或 RNA）文库筛选靶分子的特异性配基的组合化学技术。最常用的是随机 RNA 文库，因为 RNA 分子中除 G-C、A-U 碱基对以外，还有 G-U 等变偶碱基对的存在，可以形