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实验材料 ATP GTP 质粒 DNA 肌酸磷酸激酶 10%SDS 胶肌酸磷酸激酶 核酸酶 tRNAHeLaS3 细胞 TgSVA 细胞 Lx 细胞来源于表达人脊髓灰质炎病毒受体的 Ltk 细胞 NS20Y 细胞 人肝癌来源的 HepG2 细胞试剂、试剂盒 HEPES-KOH Tris-HCl 等渗溶液 低渗溶液 10X 盐溶液 裂解溶液 磷酸肌酸 尚铁血红素 亚精胺 EGTA DNaseI LiC1 沉淀溶液 TE S10 翻泽混合物 [32S]Met 电泳缓冲液L 2X 上样缓冲液 凝胶固定液仪器、耗材 高速离心机 Dounce 匀浆器SDS 凝胶电泳装置实验步骤 ―、材料与设备(一）细胞1)HeLaS3 细胞在含 5% 新生牛血清 (NCS) 和 0.15%NaHCO3 的 RPMI1640 培养基中于 37℃ 转瓶培养，每天进行细胞传代以维持细胞密度为每毫升 2〜5X105 个细胞2)TgSVA 细胞来源于表达脊髓灰质炎......阅读全文
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今
过去100年发生的多起事件让世人密切关注未来发生传染病大流行的风险。2018年是1918年流感流行的100周年，估计有数千万人死于100年前那次流感。现在拥有比一个世纪前更好的干预措施，季节性流感疫苗，但不一定完全有效预防。每年需要接种或选择接种的人所占比例较小。世界上还有抗生素可以帮助治疗细菌
用哺乳动物细胞 S10 抽提物翻译脊髓灰质炎病毒和丙型肝炎病毒 mRNA 的技术。实验材料ATPGTP质粒 DNA肌酸磷酸激酶10%SDS 胶肌酸磷酸激酶核酸酶tRNAHeLaS3 细胞TgSVA 细胞Lx 细胞来源于表达人脊髓灰质炎病毒受体的 Ltk 细胞NS20Y 细胞人肝癌来源的 HepG2
实验材料 ATP GTP 质粒 DNA 肌酸磷酸激酶 10%SDS 胶 肌
麦胚提取物体外翻译系统可用于病毒和真核细胞中 mRNA 在异种无细胞体系中的有效的翻译实验材料精胺或4.0〜8.Ommol L亚精胺肌氨酸激酶新鲜麦胚沙粒试剂、试剂盒提取缓冲液平衡缓冲液DEFC10X能量缓冲液乙酸钾DTTLHEPESmRNA[3 H] 或 [35S] 标记的 L-氨基酸三氯乙酸（T
3天前，当不断上升的确诊数和死亡病例数占据了新闻的头条，很多人可能错过了这样一条消息：总部位于挪威的“流行病防范创新联盟”（CEPI）宣布开启三项合作项目，研发针对新型冠状病毒的疫苗，其中一种属于mRNA疫苗。作为一家在防治其他冠状病毒上有着大量经验的非营利组织，CEPI期望从拿到新型冠状病毒的
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
时间总是过得很快，2016年马上就要过去了，迎接我们的将是崭新的2017年，2016年，我国有很多优秀科研机构的科学家们都做出了意义重大、影响深远的研究成果，发表在国际顶级期刊上。本文中小编盘点了2016年我国科学家发表的一些重磅级研究，以饕读者。 --结构生物学 -- 1.清华大学 施一
《麻省理工科技评论》于 2016 年正式落地中国，次年，“35 岁以下科技创新 35 人” （Innovators Under 35）中国榜单正式发布！四年成长、四届榜单，我们持续关注和发掘中国科技发展中不断崛起的新兴力量。从实验室里最新的技术研发成果，到各前沿领域的科技创业者们所取得的里程碑式
RNA药物技术是近年来新兴起的颠覆性的生物医药技术，通过关闭致病基因或者诱导免疫应答行使医药功能，受到了科研人员、投资者、医药和生物技术界的普遍关注，而之前RNA一直被认为是细胞中的垃圾片段，首次引人注目的是2006年Andrew Fire 和Craig Mello教授凭借RNAi干扰技术获
蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。 1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性
蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表
截至2019年12月23日，中国学者在Cell，Nature及Science在线发表了107篇文章（2019年的Cell ，Nature 及Science 已经全部更新），iNature团队对于这些文章做了系统的总结： 按杂志来划分：Cell 发表了31篇，Nature 发表了44篇，Scie
【51/52】2019年4月4日，清华大学柴继杰课题组、中科院遗传发育所周俭民课题组和清华大学王宏伟课题联合同期背靠背发表两篇重量级Science文章，完成了植物NLR蛋白复合物的组装、结构和功能分析，揭示了NLR作用的关键分子机制，是植物免疫研究的里程碑事件。两篇文章分别是： "Li
【50】2019年4月12日，中科院上海药物所徐华强，王明伟，浙江大学张岩及匹兹堡大学医学院Jean-Pierre Vilardaga共同通讯在Science发表题为“Structure and dynamics of the active human parathyroid hormone r
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后，离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水，为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNA
RNAi实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（
几十年来生物学上最重要的进展，也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉（RNAi）是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象，是在线虫中发现的，在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。 此后，科学家们明白，RNAi还有其他形式，它既
2019年上半年很快就结束了，iNature盘点了中国学者在Cell，Nature及Science发表的成果，我们发现总共有86篇（截至2019年6月24日），具体介绍如下： 4-6月发表的文章 【1】2019年6月21日，西北工业大学王文，中科院昆明动物研究所/BGI 张国捷及丹麦哥本哈根
实验概要进行RNAi实验实验原理通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RN
Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较cDNA探针
二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 （一）光敏生物素标记cRNA探针的应用 以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针，使其最终浓度为0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦卤素灯下，距离光源20c
步骤包括:(一)siRNA的设计1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：GenesilAmbion2. RNAi目标序列的选取原则：(1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究
每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新，蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多，但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前，先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中，例如DNA复制、mR
提 纲 一、化疗药物的发展 二、肿瘤的药物治疗 三、抗肿瘤药物筛选及评价 四、体外抗肿瘤活性试验 五、体内抗肿瘤活性试验 一、化疗药物的发展 • 近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。 • 50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等，
提 纲 一、化疗药物的发展 二、肿瘤的药物治疗 三、抗肿瘤药物筛选及评价 四、体外抗肿瘤活性试验 五、体内抗肿瘤活性试验 一、化疗药物的发展 • 近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。 • 50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等，