mRNA显示蛋白的纯化和逆转录实验
实验材料 mRNA 显示蛋白翻译反应产物试剂、试剂盒 Oligo 纤维素Oligo（dT）结合缓冲液Oligo 洗涤缓冲液Ni-NTA 琼脂糖NI-NTA 结合缓冲液Ni-NTA 洗脱缓冲液鲑精 DNABSADNA splintSuperscript Ⅱ 逆转录酶缓冲液DTT脱氧核苷三磷酸Superscript Ⅱ 逆转录酶脱氧核苷三磷酸溶液ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液仪器、耗材 层析柱凝胶过滤柱实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 在层析柱中用去离子水反复洗涤 20 mg oligo （dT） 纤维素。重悬纤维素若干次并用正向压力迫使液体快速流出。最后，用 oligo （dT） 结合缓冲液洗涤一次。2. 用 oligo （dT） 结合缓冲液将加有 KCl 和 MgCl2 的 1.3 ml 含 mRNA 显示蛋白的翻译反应产物稀释到 8.7 ml。然后与洗涤过的......阅读全文
mRNA－显示蛋白的纯化和逆转录实验
实验材料 mRNA 显示蛋白翻译反应产物试剂、试剂盒 Oligo 纤维素Oligo（dT）结合缓冲液Oligo 洗涤缓冲液Ni-NTA 琼脂糖NI-NTA 结合缓冲液Ni-NTA 洗脱缓冲液鲑精 DNABSADNA splintSuperscript Ⅱ 逆转录酶缓冲液DTT脱氧核苷三磷酸S
mRNA－显示蛋白的纯化和逆转录实验
实验材料mRNA 显示蛋白翻译反应产物试剂、试剂盒Oligo 纤维素Oligo（dT）结合缓冲液Oligo 洗涤缓冲液Ni-NTA 琼脂糖NI-NTA 结合缓冲液Ni-NTA 洗脱缓冲液鲑精 DNABSADNA splintSuperscript Ⅱ 逆转录酶缓冲液DTT脱氧核苷三磷酸Supersc
mRNA－显示蛋白的纯化和逆转录实验
实验材料 mRNA 显示蛋白翻译反应产物 试剂、试剂盒 Oligo 纤维素 Oligo（dT）结合缓冲液
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 DNA 库 不含甲硫氨酸的翻译混合物
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验方法原理 实验材料 DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒 MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验材料DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织红细胞裂解物翻译试剂盒氯化
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
实验材料纯化的 mRNA 显示蛋白试剂、试剂盒NaOHHClNaClMgCl2乙醇1-丁醇苯酚 氯仿 异戊醇EDTAPCR 缓冲液ATP 琼脂糖ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液鲑精 DNABSA3'引物5'引物Taq DNA 聚合酶仪器、耗材凝胶过滤柱实验步骤
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白试剂、试剂盒 NaOHHClNaClMgCl2 乙醇1-丁醇苯酚 氯仿 异戊醇EDTAPCR 缓冲液ATP 琼脂糖ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液鲑精 DNABSA3'引物5'引物Taq DNA 聚合酶仪器、耗
mRNA的分离和纯化实验（一）
实验原理从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。真核生物mRNA具
mRNA的分离和纯化实验（二）
（三） mRNA的分离1、mRNA与Oligo(dT)-纤维素结合：用移液器重新悬浮oligo(dT)-纤维素，取适量的oligo(dT)-纤维素到RNA样品中，盖上盖子，颠倒数次将oligo(dT)-纤维素与RNA混匀。于37℃水浴保温并温和摇荡15min。oligo(dT)-纤维素与RNA所需量
mRNA－的－PCR－差异显示实验
对应于 mRNA 的 DNA 序列，可以被回收、克隆、测序，可以用作杂交或筛库的探针。来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》实验材料人的细胞总 RNA 或 poly（A）＋ RNA试剂、试剂盒人胎盘 RNase 抑制剂DNase ITris·ClKClMgCl23：1 （V V） 苯酚 氯仿乙酸
mRNA－的－PCR－差异显示实验
实验方法原理 实验材料 人的细胞总 RNA 或 poly（A）＋ RNA 试剂、试剂盒
mRNA－的－PCR－差异显示实验
实验方法原理 实验材料 人的细胞总 RNA 或 poly（A）＋ RNA试剂、试剂盒 人胎盘 RNase 抑制剂DNase ITris·ClKClMgCl23：1 （V V） 苯酚 氯仿乙酸钠乙醇DEPC 处理的水简并锚定 oligo（dT） 引物组合MoMuLV 逆转录酶缓冲液DTT4dN
mRNA的提取及纯化实验
磁珠法 亲和柱层析法 亲和柱层析法 实验材料 mRNA
mRNA的提取及纯化实验
实验材料 mRNA试剂、试剂盒 mRNA分离试剂盒异丙醇NaAC仪器、耗材 仪器水浴离心机取液器分光光度计实验步骤 一、生物素标记的Oligo（dT）探针与mRNA的煺火1. 在DEPC处理过的1.5 ml Eppendof管中，加入0.2-1 mg 的总RNA和无RNase的水至终体积为0.5
单细胞mRNA差异显示实验
目前有几种方法可以显示生理刺激下组织样本中未知基因的表达水平变化。然而, 很多组织内的细胞又存在形态和功能上的异质性，因此常常需要从单个细胞水平研究基因表达的差异。现在，我们介绍一种新方法，它常规用来在单细胞水平考察未知基因的差异性表达。现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. J
单细胞mRNA差异显示实验
实验方法原理 ##流程图 试剂、试剂盒 溶液和缓冲液 仪器、耗材
单细胞mRNA差异显示实验
实验方法原理 ##流程图试剂、试剂盒 溶液和缓冲液仪器、耗材 水浴槽PCR热循环仪微量离心机塑料制品和滤器实验步骤 一、RNA 的分离收集对照组和实验组细胞，放入含 45ul2 mmol/L DTT 的 1.5 ml 微量离心管中。95℃ 水浴热解 2 min。每管加入以下物质：37℃ 温育 30
mRNA的纯化
实验概要本文介绍了mRNA的纯化方法。实验原理mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3‘末端含有Poly（A ）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度时或在低
知识分享：mRNA的分离和纯化
实验原理 从细胞或组织中得到RNA是一种混合物，其中包括tRNA，rRNA和mRNA，其中RNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，而mRNA仅占1%～5％，并且mRNA基因序列不同，分子量大小不均一，各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。 真核生
mRNA差异显示的方法和应用介绍
中文名称mRNA差异显示英文名称mRNA differential display定 义从两种组织或经过不同处理的两种细胞的信使核糖核酸(mRNA)所得到的互补DNA作的差异显示实验，可以分析不同组织细胞基因表达的区别。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验——肌球蛋白的纯化
实验材料冷冻肌肉试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材玻璃器皿实验步骤1. 准备下面的贮存液（都冷却到 4℃）。肌球蛋白抽提溶液：0.5 mol/L KCl，0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水（dH2O）4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol/L C
mRNA的提取及纯化实验——磁珠法
真核细胞的mRAN是单顺反子，其最显著的特征是具有5‘'端帽子结构和3'端的poly A的结构，此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径。实验材料mRNA试剂、试剂盒mRNA分离试剂盒异丙醇NaAC仪器、耗材仪器水浴离心机取液器分光光度计实验步骤一、生物素标记的Oligo（
mRNA差别显示技术
mRNA差别显示技术也称为差示反转录PCR（Differential Display of reverse Transcriptional PCR）简称为ddRT-PCR。它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。目前已广泛应用于分离鉴定组织特异性表达的基因。
mRNA的分离与纯化
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）
mRNA的分离与纯化
[实验原理]真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或
mRNA的分离与纯化
实验概要mRNA的分离与纯化实验原理 真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性
mRNA提取、分离纯化
从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之
硫氧还原蛋白融合蛋白的表达和纯化实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 氨苄青霉素甘油色氨酸仪器、耗材 电泳仪培养箱摇床试管实验步骤 1. 将编码目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS质粒上的trxA基因3‘末端，构建符合读框的融合基因，或者于pALtrxA-781的单一Rsr 2位点上插入短肽编码序列。2. 用含