蛋白质的毛细管电泳分析实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 毛细管电泳仪实验步骤 「操作条件选择」具体见「其他」1. 毛细管电泳柱的制备：清洗、反应与柱平衡；2. 移开进样端的缓冲溶液池，换上样品管；3. 使用低压或电迁移方式进样；4. 再换上缓冲溶液池；5. 施加分离所需的电压。 进行电泳分析。收起 注意事项 其他 操作条件选择1. 毛细管尺寸最常用的为内径为 25～75 um 熔融石英毛细管，从分析时间上考虑，毛细管应尽可能得短，常用的有效长度（进样端至检测窗之间的距离）为 20～50 cm。2. 高压电源HPCE 所用的高压电源要能提供 30 kV 的直流电压和 200～300 uA 的电流。欲获得迁移时间的高重现性，须使电压稳定在 ±0.1％。电源极性应能切换。恒压方式最为常用，当进行等速电泳或温度不能很好控制时，则应采用恒流或恒功率方式，从而获得恒定的迁移时间。3. 温度控制由于进样和迁移时间决定于溶液的黏度，应将......阅读全文
毛细管电泳仪分析的特点
毛细管电泳仪（HPCE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离，是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展，使分析科学从微升级进入到了纳升级水平，不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。一、优点：1、柱效
定量毛细管电泳仪的分析原理和优势
定量毛细管电泳是近年来发展起来的一种分离、分析技术，它是凝胶电泳技术的发展，是液相色谱分析的补充。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等，HPLC分析、快速、微量。 定量毛细管电泳分析原理 紫外检测原理基于被测组分和
蛋白质分离实验_分离已知pI－的蛋白质
实验材料含10 mg蛋白质／ml 的溶于水的样品试剂、试剂盒缓冲液（pH>pI）仪器、耗材50 μm 内径的未包被的融合硅毛细管柱CE 仪器实验步骤1. 用 pH 高于蛋白质的pI的 5 mmol/L 缓冲液 1/10 （V/F） 稀释蛋白质样品，使蛋白质（终浓度 = 1.0 mg/ml） 产生电荷
蛋白质的电转实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材 电转移槽电泳仪实验步骤 1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。4.
蛋白质的电转实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材电转移槽电泳仪实验步骤1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。4. 将3块
蛋白质的电转实验
很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT，DBM）、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的最多的还是硝酸纤维素膜（NC膜），该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80 μg/cm2。实验方法基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒 转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液
蛋白质的抽提实验
实验方法原理 蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。 实验材料 转
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤 材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材
蛋白质的短暂表达实验
基本方案 实验材料 载体 试剂、试剂盒
蛋白质的电转实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质含量的测定实验
FOLIN酚法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)分光光
蛋白质的抽提实验
实验材料 转型菌株pQG11 M15 [pREP] 单一菌落试剂、试剂盒 LB amp kan液体培养基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮仪器、耗材 恒温震荡培养箱高速冷冻离心机离心管冰筒实验步骤 一、仪器用具恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （
蛋白质的短暂表达实验
实验材料 载体试剂、试剂盒 牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA仪器、耗材 培养皿培养箱相差显微镜离心机实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。2. 将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS
蛋白质含量的测定实验
实验方法原理 FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25～250 μg/ ml 蛋白质浓
蛋白质的短暂表达实验
实验材料载体试剂、试剂盒牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA仪器、耗材培养皿培养箱相差显微镜离心机实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。2. 将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS-7细
蛋白质的短暂表达实验
基本方案 实验材料 载体 试剂、试剂盒
高效毛细管电泳仪分析优点
高效毛细管电泳仪（HPCE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离，是分析科学继高效液相色谱仪之后的又一重大进展，使分析科学从微升级进入到了纳升级水平，不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新
毛细管电泳仪分析优点
毛细管电泳仪（HPCE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离，是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展，使分析科学从微升级进入到了纳升级水平，不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。一、柱效高：理论塔
高效毛细管电泳仪分析优点
高效毛细管电泳仪（HPCE）是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离，是分析科学继高效液相色谱仪之后的又一重大进展，使分析科学从微升级进入到了纳升级水平，不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转
PCR扩增产物的电泳分析2
2）染色剂：核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色。溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB，有时亦可
PCR扩增产物的电泳分析1
凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。一、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在 37℃下维持液体状态约
聚合酶链反应的电泳分析
在实际工作中常采用琼脂糖凝胶电泳。一般情况下先在电泳缓冲液或凝胶中加1%溴化乙锭（EB）（每100ml加100μl），然后将已经制备好的1%～2%琼脂糖凝胶（用电泳缓冲液配制）放入电泳槽内，加入待测样品10μl，同时用分子量标准品作标记。琼脂糖浓度应按分离DNA片段的大小进行选择，一般用1.5%
影响电泳分析仪电泳的因素
1. 电场强度 电场强度越大，电泳速度越快。但增大电场强度会引起通过介质的电流强度增大，从而造成电泳过程中产热过多，引起介质温度升高，影响电泳效果。降低电流可以减少产生热量，但会延长电泳时间，减慢待分离生物大分子的扩散而影响分离效果。 2. 溶液性质 主要体现为样本溶液的pH、离子强度和黏
毛细管等电聚焦电泳色谱仪分离蛋白质的原理
蛋白质是一种两性电解质分子，当它在大于其等电点的pH环境中时，会解离成带负电的离子，在电场中向正极泳动；当它在小于其等电点的pH环境中时，会解离成带正电荷的离子，在电场中向负极泳动。这种泳动作用到达它的等电点的pH环境中，即它的净电荷为零时才会停止，此时蛋白质在电场作用下的迁移运动与扩散运动达到平衡
蛋白质分离实验_分离未知－pI－蛋白质
用 CE 进行 IEF分离是选择随后用于在非衍生毛细管柱上分离蛋白的缓冲液系统的有效的第一步。如果没有检测到蛋白质，可能是被吸收到柱的硅表面。在离子去垢剂如 SDS 存在的情况下重复分离过程，这样就会用负电荷包被蛋白质从而阻止吸收。但是，这意味着蛋白质只能依据大小的不同而进行分离。知道蛋白质的 pI
蛋白质纯度测定实验
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂
蛋白质印迹实验
从SDS凝胶上转移蛋白质 从琼脂糖凝胶上转移蛋白质 从等电聚焦凝胶上转移蛋白 检测 试剂、试剂盒
蛋白质定量实验步骤
(1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高