mRNA的分离实验
实验方法原理 哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3‘ 端均有一poly（A）尾，因此可以用oligo（dT）-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNA。实验步骤1. 用0.1 mol/L NaOH悬浮0.5～1.0 goligo（dT）-纤维素。 2. 将悬浮液装入灭菌的一次性层析柱或装入填有用DEPC处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床体积为0.5～1.0 ml，用3倍柱床体积灭菌水冲洗柱床。柱床体积为1 ml的oligo（dT）-纤维素最大量为10 mg总RNA，如果总RNA的量较少，则应减少oligo（dT）-纤维素的使用量，以防止poly（A）+RNA在过柱以及后续步骤中损失。 3. 用无菌的1×层析柱加样缓冲液冲洗柱床，直至流出液的 pH 值小于8.0。1×层析柱加样缓冲液为：20 mmol/L ......阅读全文
单细胞mRNA差异显示实验
实验方法原理 ##流程图试剂、试剂盒 溶液和缓冲液仪器、耗材 水浴槽PCR热循环仪微量离心机塑料制品和滤器实验步骤 一、RNA 的分离收集对照组和实验组细胞，放入含 45ul2 mmol/L DTT 的 1.5 ml 微量离心管中。95℃ 水浴热解 2 min。每管加入以下物质：37℃ 温育 30
mRNA－的－PCR－差异显示实验
实验方法原理 实验材料 人的细胞总 RNA 或 poly（A）＋ RNA试剂、试剂盒 人胎盘 RNase 抑制剂DNase ITris·ClKClMgCl23：1 （V V） 苯酚 氯仿乙酸钠乙醇DEPC 处理的水简并锚定 oligo（dT） 引物组合MoMuLV 逆转录酶缓冲液DTT4dN
关于真核细胞的mRNA的提取分离原理介绍
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A）尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
分离核仁实验——分离核仁
实验材料肝脏试剂、试剂盒NKM仪器、耗材粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 制备溶液：NKM：0.13 mol/L NaCl，5 mmol/L KCl，8 mmol/L MgCl20.34 mol/L 蔗糖，3 mmol/L MgCl22.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 DNA 库 不含甲硫氨酸的翻译混合物
mRNA的S1作图实验
M13模板 双链模板 实验材料 mRNA 试剂、试剂盒
mRNA－的细胞内注射实验
实验步骤一、用于细胞内注射的加帽 mRNA 的制备材料步骤1.依次加入下列物质，终体积为 20ul，冰上操作：2.37℃ 温育 lh。3.加入 Iul DNA 酶 I(无 RNA 酶)，37℃ 温育 10 min。4.用 RNaid 试剂盒提纯 mRNA。5.25ul 灭菌水（无 RNA 酶）溶解
mRNA－的细胞内注射实验
实验步骤 一、用于细胞内注射的加帽 mRNA 的制备 材料 步骤 1.依次加入下列物质，终体积为 20ul，冰上操作： 2.37℃ 温育 lh。 3.加入 Iul DNA 酶 I(无 RNA 酶)，37℃ 温育
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验材料DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织红细胞裂解物翻译试剂盒氯化
mRNA的S1作图实验
实验材料 mRNA试剂、试剂盒 琼脂糖电泳缓冲液ATP寡聚核苷酸引物多核苷酸激酶缓冲液T4仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤一、图片简介 二、实验步骤 1. 用1×碱性制胶缓冲液制备1.2%的低融点琼脂糖，并将凝固好的胶在1×碱性电泳缓冲液中浸泡过夜。 2. 将以下试剂混合以制备磷酰化的寡
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验方法原理 实验材料 DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒 MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织
mRNA－的细胞内注射实验
实验步骤 一、用于细胞内注射的加帽 mRNA 的制备材料 步骤1.依次加入下列物质，终体积为 20ul，冰上操作：2.37℃ 温育 lh。3.加入 Iul DNA 酶 I(无 RNA 酶)，37℃ 温育 10 min。4.用 RNaid 试剂盒提纯 mRNA。5.25ul 灭菌水（无 RNA 酶）溶
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白
动植物组织mRNA提取实验方法
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 2、
用于表达分析的－mRNA－的制备实验
基本方案 用于表达监测以及与寡核苷酸芯片杂交的 mRNA 扩增 备择方案 cDNA 和体外转录产物的固相可逆固定（SPRI）纯化 实验方法原理 扩增
用于表达分析的－mRNA－的制备实验
实验方法原理 扩增步骤完全决定于干净、完整的起始 RNA。对培养的细胞，作者采用胍盐裂解再用树脂纯化（如 Qiagen RNeasy Kit）的方案。 扩增 mRNA 可从 Poly（A）＋或总 RNA 开始。尽管 poly（A）＋灵敏度更高，因为除 掉了 cDNA 反应期间大部分与 rRN
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
实验材料纯化的 mRNA 显示蛋白试剂、试剂盒NaOHHClNaClMgCl2乙醇1-丁醇苯酚 氯仿 异戊醇EDTAPCR 缓冲液ATP 琼脂糖ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液鲑精 DNABSA3'引物5'引物Taq DNA 聚合酶仪器、耗材凝胶过滤柱实验步骤
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白试剂、试剂盒 NaOHHClNaClMgCl2 乙醇1-丁醇苯酚 氯仿 异戊醇EDTAPCR 缓冲液ATP 琼脂糖ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液鲑精 DNABSA3'引物5'引物Taq DNA 聚合酶仪器、耗
PAT法分析mRNA－Poly（A）尾长度实验
PAT法 [ PCR poly(A) test ] 可以快速、灵敏地从总 RNA 中分析特异 mRNA，而且可以定量估算 RNA poly(A) 尾长度。这方法中，包括 cDNA 合成的整个操作过程都在一个反应管中完成，不仅操作更简便，也减少了可能存在的 RNase 污染。本实验来源「RNA 实验指
PAT法分析mRNA－Poly（A）尾长度实验
实验方法原理 PAT法 [ PCR poly(A) test ] 可以快速、灵敏地从总 RNA 中分析特异 mRNA，而且可以定量估算 RNA poly(A) 尾长度。这方法中，包括 cDNA 合成的整个操作过程都在一个反应管中完成，不仅
PAT法分析mRNA－Poly（A）尾长度实验
实验方法原理 PAT法 [ PCR poly(A) test ] 可以快速、灵敏地从总 RNA 中分析特异 mRNA，而且可以定量估算 RNA poly(A) 尾长度。这方法中，包括 cDNA 合成的整个操作过程都在一个反应管中完成，不仅操作更简便，也减少了可能存在的 RNase 污染。尤其
分离核仁实验
分离核仁 从人肝脏或胎盘组织中分离核仁 HeLa细胞细胞核或核仁的制备 高镁法分离核仁 实验材料 肝脏
线粒体分离实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 RSBMS 缓冲液仪器、耗材 Dounce 匀浆器实验步骤 1. 用 11 ml 冰上预冷过的 RSB 重新悬浮细胞，转移到一个 15 ml 的 Dounce 匀浆器中RSB（使组织培养细胞膨胀的低渗缓冲液）10 mmol/L NaCl2.5 mol/L MgCl210
分离核仁实验
分离核仁从人肝脏或胎盘组织中分离核仁HeLa细胞细胞核或核仁的制备高镁法分离核仁实验材料肝脏 试剂、试剂盒NKM
分离核仁实验
实验材料 肝脏试剂、试剂盒 NKM仪器、耗材 粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤 1. 制备溶液：NKM：0.13 mol/L NaCl，5 mmol/L KCl，8 mmol/L MgCl20.34 mol/L 蔗糖，3 mmol/L MgCl22.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L
线粒体分离实验
从组织培养细胞中分离线粒体 从组织中分离线粒体 用蔗糖密度梯度法纯化线粒体 实验材料 细胞