细胞核的分级分离实验

实验材料 小白鼠试剂、试剂盒 蔗糖氯化钙溶液甲苯胺兰染液詹纳斯绿B染液NaCl溶液仪器、耗材 玻璃匀浆器离心机天平光学显微镜载玻片盖玻片离心管滴管量筒烧杯玻璃漏斗解剖剪镊子实验步骤 1. 用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中,反复洗涤,尽量除去血污,用滤纸吸去表面的液体。 2. 将湿重约1 g 的肝组织放在小平皿中,用量筒量取8 ml 预冷的0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙溶液,先加少量该溶液于平皿中,尽量剪碎肝组织后,再全部加入。 3. 剪碎的肝组织倒入匀浆管中,使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中,左手持之,右手将匀浆捣杆垂直插入管中,上下转动研磨3~5次,用3层纱布过滤匀浆液于离心管中,然后制备一张涂片①,做好标记,自然干燥。 4. 将装有滤液的离心......阅读全文

细胞核的分级分离实验

实验材料小白鼠                                                          试剂、试剂盒蔗糖                                                                  氯化钙溶液      

细胞核的分级分离实验

实验材料 小白鼠试剂、试剂盒 蔗糖氯化钙溶液甲苯胺兰染液詹纳斯绿B染液NaCl溶液仪器、耗材 玻璃匀浆器离心机天平光学显微镜载玻片盖玻片离心管滴管量筒烧杯玻璃漏斗解剖剪镊子实验步骤 1.  用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯

细胞核的分级分离实验

实验材料小白鼠试剂、试剂盒蔗糖氯化钙溶液甲苯胺兰染液詹纳斯绿B染液NaCl溶液仪器、耗材玻璃匀浆器离心机天平光学显微镜载玻片盖玻片离心管滴管量筒烧杯玻璃漏斗解剖剪镊子实验步骤1.  用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中,反复

细胞核与线粒体的分级分离

  一、原理    细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。    分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步,这种方法已成

细胞核与线粒体的分级分离

一、原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步,这种方法已成为研究亚细胞成分的化

细胞核与线粒体的分级分离

一、所需试剂及设备小白鼠、冰块、玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25m1烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、蜡盘、平皿、牙签。0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L CaCl2溶液、1%甲苯胺

细胞核与线粒体的分级分离

实验概要通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分,以了解其原理及过程。实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过

细胞核与线粒体的分级分离

实验概要掌握细胞核与线粒体的分级分离的实验技术。实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过程包括组织细胞匀浆、分级

细胞核与线粒体的分级分离

一、原理   细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。    分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步,这种方法已成为研究

线粒体的分级分离实验

实验材料 线粒体仪器、耗材 离心机实验步骤 1.  将装有上清液的高速离心管,从装有冰块的烧杯中取出,配平后,以17 000 rpm 离心20分钟,弃上清,留取沉淀物。2.  加入0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙液1 ml,用吸管吹打成悬液,以17 000 rpm 离心20

线粒体的分级分离实验

高速离心法实验材料线粒体                                                          仪器、耗材离心机                                                          实验步骤 1.  将装有上清

桥粒的制备实验_分级分离桥粒

实验材料桥粒试剂、试剂盒尿素溶液仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 在最终的桥粒沉淀中加 20 ml 尿素溶液,用玻璃/Teflon 匀浆器匀浆,用尿素溶液稀释匀浆物使蛋白质浓度为 0.15 mg/ml,用 1 mol/L 的 Tris-HCl 调节溶液的 pH 值到 9.0 在室温至少搅拌 1 小时。尿

钙调蛋白的粗分级分离实验

试剂、试剂盒 上清固体硫酸铵浓硫酸Tris 碱缓冲液 B仪器、耗材 聚丙烯烧杯磁力搅拌器与搅拌子聚碳酸酯离心管超速离心机带刻度的聚丙烯量筒粗棉布聚丙烯漏斗橡皮淀帚 刮勺透析袋实验步骤 材料与设备上清,得自实验 2(约 700~1000 ml)固体硫酸铵聚丙烯烧杯(2x4000-ml)磁力搅拌器与搅拌

线粒体的分级分离实验——高速离心法

实验材料线粒体仪器、耗材离心机实验步骤1.  将装有上清液的高速离心管,从装有冰块的烧杯中取出,配平后,以17 000 rpm 离心20分钟,弃上清,留取沉淀物。2.  加入0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙液1 ml,用吸管吹打成悬液,以17 000 rpm 离心20分钟。

钙调蛋白的粗分级分离实验

钙调蛋白的粗分级分离实验             试剂、试剂盒 上清 固体硫酸铵 浓硫酸 Tris

钙调蛋白的粗分级分离实验

为纯化钙调蛋白,对平滑肌组织提取物的粗分级分离采取了两步不同的操作:硫酸铵沉淀和等电点沉淀。这两步操作利用了钙调蛋白的两个不同的性质,即它在中性以上 pH 条件下的高溶解度和它的酸性等电点。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒上清固体硫酸铵浓硫酸Tris 碱缓冲液 B仪器

细胞核连缀分析实验_体外细胞核连缀反应

实验材料组织试剂、试剂盒EDTASDS蛋白酶 K仪器、耗材玻璃试管实验步骤1. 融解从 1 g 组织或 5 瓶培养皿细胞制备、冻存于 NSB 中的细胞核。1000 g 离心 5 分钟,去上清,用 200 μl HRB 轻轻吹打重悬。2. 将悬液转至一个带有抗酚螺帽的硅化玻璃试管,37℃ 水浴 5 到

细胞核连缀分析实验

从组织中制备细胞核 体外细胞核连缀反应 体外细胞核连缀反应产物的分析             实验材料 动物组织

细胞核连缀分析实验

从组织中制备细胞核体外细胞核连缀反应体外细胞核连缀反应产物的分析实验材料动物组织                                                          试剂、试剂盒PBS                                          

细胞核连缀分析实验_从组织中制备细胞核

实验材料动物组织试剂、试剂盒PBS蔗糖仪器、耗材电动匀浆器特氟隆研杵实验步骤一、用超速离心法从组织中分离细胞核1. 切下动物组织,放入置于冰上的平皿中,用冰冷的 PBS 冲洗。2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液,用剪刀或剃须刀片将组织切碎,转入一个干净试管中,加蔗糖Ⅰ溶液至终体积为每克组织 10 ml。3. 用

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验

实验材料黄化苗试剂、试剂盒匀浆缓冲液清洗缓冲液Percoll 梯度溶液仪器、耗材分光光度计实验步骤在选好植物材料和匀浆缓冲液后,接下来关键的因素包括匀浆方法、缓冲液的 pH、使用的缓冲液与植物组织之间的比例、研磨时间及温度等(见注释 5) 。3.1 匀浆根据植物组织的不同可以采取不同的匀浆方法,或者

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验

实验材料黄化苗                                                          试剂、试剂盒匀浆缓冲液                                                                  清洗缓冲液  

细胞核连缀分析实验_体外细胞核连缀反应产物的分析

实验材料环状质粒 DNA试剂、试剂盒氢氧化钠SSPE预杂交缓冲液仪器、耗材狭线印迹装置实验步骤一、狭线印迹的制备1. 如果用的是环状质粒 DNA,用适当的限制酶使 DNA 探针线性化。每个狭线需用 5 μg DNA。2. 往线性 DNA 溶液中加氢氧化钠至 0.1 mol/L,混匀,室温放置 30

原代细胞核膜分离实验

实验概要本实验介绍了原代细胞核膜分离的实验操作流程。主要试剂1. DNA酶Ⅰ;2. KCl(1mol/L溶于20mmol/L Tris-HCl,pH7.4);3. MgCl2(1mol/L储存液);4. 苯甲基磺酰氟(PMSF)(无水乙醇配制的1mol/L储存液);5. 纯化的细胞核;6. 缓冲液:

蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐实验

蛋白质盐析             实验方法原理 用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体, 在高浓度的中性盐影响下脱去水化层, 同时, 蛋

蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐实验

本实验的目的是了解盐析分级分离蛋白质的基本原理及操作;了解葡聚糖凝胶SephadexG-25脱盐的基本原理和凝胶柱的制备及洗脱技术以及了解752型紫外可见分光光度计的使用方法。实验方法原理用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体, 在高浓度的中性盐影响下脱去水化层

蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐实验

实验方法原理 用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体, 在高浓度的中性盐影响下脱去水化层, 同时, 蛋白质分子所带的电荷被中和, 结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。经透析或用水稀释时又可溶解, 故蛋白质的盐析作用是可逆过程。盐析不同的蛋白质所

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验(二)

3.5 纯度鉴定可以通过各种细胞器标志性酶的活性来确定线粒体的污染程度。过氧化物酶体可以鉴定过氧化氢酶、羟基丙酮酸还原酶或者乙二醇氧化酶的活性;叶绿体可以用叶绿素含量,白色体可以用类胡萝卜素的含量或碱性焦磷酸酶的活性;乙二醛循环体可以用异柠檬酸裂解酶的活性;内质网可以用对抗霉素 A 不敏感的细胞

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验(一)

实验材料 黄化苗试剂、试剂盒 匀浆缓冲液清洗缓冲液Percoll 梯度溶液仪器、耗材 分光光度计实验步骤 在选好植物材料和匀浆缓冲液后,接下来关键的因素包括匀浆方法、缓冲液的 pH、使用的缓冲液与植物组织之间的比例、研磨时间及温度等(见注释 5) 。3.1 匀浆根据植物组织的不同可以采取不同的匀浆方

细胞[组分]分级分离的定义

中文名称细胞[组分]分级分离英文名称cell fractionation定  义应用不同的离心技术,将细胞匀浆中的各种细胞器或不同组成成分分离纯化的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)