转运反应成分的制备实验
试剂、试剂盒 APC 悬浮液HEPESNaClSMCC仪器、耗材 微量离心管Sephadex G50 脱盐柱实验步骤 1. 在一微量离心管中,4℃,10000 g 离心 APC 悬浮液 5~10 分钟,吸走上清。2. 用 0.1 mol/L HEPES(pH 7.4),0.1 mol/L NaCl 重悬浮沉淀至浓度为 5 mg/ml。用这种缓冲液透析几次去除残留的硫酸铵。3. 临用前用透析液溶解硫代 SMCC,浓度为 10 mg/ml。4. 按 0.1 mg 硫代-SMCC/1 mg APC 的比例将硫代-SMCC 加到蛋白质中,冰上孵育 45 分钟。5. 将修饰后的 APC 过一 5 ml 的 Sephadex G50 脱盐柱,柱子预先用 0.1 mol/L HEPES,(pH 7.4),0.1 mol/L NaCl 和 1 mmol/L EDTA 平衡。6. 通过真空透析或用一离心浓缩装置将 APC 浓缩为 5 mg/ml。......阅读全文
poly(A)+-RNA的制备实验
利用cND A微阵列技术可用于:(1)并行分析检测成千上万个基因的表达情况;(2)在新基因的发现、基因组功能的研究、疾病的预测和诊断、药物靶标的确定和药物毒性预测等多方面发挥着重要的作用。实验方法原理大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带po
poly(A)+-RNA的制备实验
实验方法原理 大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带poly(A)的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。 实验材料
反义RNA的制备实验
RNA 也可以由线状 DNA 为模板,通过 RNA 聚合酶(如T3、T7 或 SP6 ) 在体外合成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验材料限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐
poly(A)+-RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 NaOH寡聚脱氧胸苷纤维素poly(A)样品缓冲液LiClEDTATE乙酸钠仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱,然后用水冲洗。2. 取0.5 g oligo(dT)纤维素干粉加1 ml 0.1 m
血涂片的制备实验
实验材料 血液试剂、试剂盒 消毒酒精瑞特染色液蒸馏水仪器、耗材 载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜实验步骤 一、血涂片的制备按以下各步骤进行操作。(一)采血采血之前先揉搓需要采血的部位,如耳垂或手指尖,使血流旺盛。用酒精消毒皮肤,待干。以左手拇指及食指夹持局部,再用消毒过的刺血针刺之,血液自然流
酪蛋白的制备实验
等电点沉淀法 实验方法原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物,等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒 氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐酸亚精胺NaCl胎盘RNase抑制物牛血清白蛋白RNA聚合酶DEPC仪器、耗材 DNA合成仪琼脂糖凝胶电泳微量离心管实验步骤 一、化学合成的 RN
血涂片的制备实验
实验材料血液试剂、试剂盒消毒酒精瑞特染色液蒸馏水仪器、耗材载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜实验步骤一、血涂片的制备按以下各步骤进行操作。(一)采血采血之前先揉搓需要采血的部位,如耳垂或手指尖,使血流旺盛。用酒精消毒皮肤,待干。以左手拇指及食指夹持局部,再用消毒过的刺血针刺之,血液自然流出。如血
金相试样的制备实验
一、实验目的 1. 学会金相试样的制备方法。 2. 熟悉常用化学浸蚀试剂及其使用方法。 二、实验内容 按照金相试样的制备方法,每人制备出碳钢金相试样一块,用金相显微镜观察自己制备的试样,要求试样在显微镜下观察应没有磨痕、组织清晰。 三、实验原理 要对金属材料的显微组织进行观察,首先就
植物RNA的制备实验
酚/SDS法 实验材料 RNA 试剂、试剂盒
腺苷的实验制备方法
1、对照品溶液的制备精密称取腺苷对照品适量,加甲醇配制成1mL含40μg的对照品溶液。2、供试品溶液的制备取供试品20mL置100mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀超声处理5分钟,放置待沉淀完全,滤过,取许滤液50mL蒸干,残渣加水20mL溶解,以水饱和的正丁醇提取4次,合并正丁醇提取液蒸干,残渣加50
胞吞转运的概念
中文名称胞吞转运英文名称transcytosis定 义上皮细胞将胞外大分子在一侧以受体介导胞吞作用摄入胞内,经内体分拣,小泡穿过细胞质转运,在另一侧将物质外排到胞外间隙的运输过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生理(二级学科)
转运RNA的功能
主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫
胞吞转运的定义
中文名称胞吞转运英文名称transcytosis定 义上皮细胞将胞外大分子在一侧以受体介导胞吞作用摄入胞内,经内体分拣,小泡穿过细胞质转运,在另一侧将物质外排到胞外间隙的运输过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生理(二级学科)
转运RNA的功能
主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫起始
RNA转运的概念
中文名称RNA转运英文名称RNA transport定 义RNA分子从一个细胞区室或区域移动到另一个细胞区室或区域的过程。各类不同RNA(如信使RNA、核小RNA、核糖体RNA和转移RNA)的转运遵循不同的机制。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
转运RNA的定义
大多数tRNA由七十几至九十几个核苷酸组成,参与蛋白质的合成。分子量为25000~30000,沉降常数约为4S(个别tRNA的沉降常数为3S,含63个核苷酸)。曾用名有联接RNA、可溶性RNA、pH5RNA等。一种tRNA只能携带一种氨基酸,如丙氨酸tRNA只携带丙氨酸,但一种氨基酸可被不止一种
转运RNA的定义
大多数tRNA由七十几至九十几个核苷酸折叠形成的三叶草形短链组成,相对分子质量为25000〜30000,沉降常数约为4S。旧称联接RNA、可溶性RNA等。主要作用是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质,即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序。tRNA
转运RNA的结构
转运RNA分子由一条长70~90个核苷酸并折叠成三叶草形的短链组成的。上图中有两种不同的分子,苯丙氨酸tRNA(4tna)和天冬氨酸tRNA(2tra)。tRNA链的两个末端在图上方指出的L形结构的末端互相接近。氨基酸在箭头示意的位置被连接。在这条链的中央形成了L形臂,如图下方所示,露出了形成反
用于基因组文库的真核DNA的部分酶切(制备反应)实验
通过限制酶部分酶切可将高分子质量 DNA 片段化。在预实验中,建立了适宜的部分酶切条件。对于将用于克隆的基因组 DNA 来说,预实验的结果确定了对其进行制备的三个大规模反应的条件,这将在本方案叙述。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理通过限制酶部分酶切可将高分子质量 DNA
用于基因组文库的真核DNA的部分酶切(制备反应)实验
实验方法原理 通过限制酶部分酶切可将高分子质量 DNA 片段化。在预实验中,建立了适宜的部分酶切条件。对于将用于克隆的基因组 DNA 来说,预实验的结果确定了对其进行制备的三个大规模反应的条件,这将在本方案叙述。
用于基因组文库的真核DNA的部分酶切(制备反应)实验
实验方法原理 通过限制酶部分酶切可将高分子质量 DNA 片段化。在预实验中,建立了适宜的部分酶切条件。对于将用于克隆的基因组 DNA 来说,预实验的结果确定了对其进行制备的三个大规模反应的条件,这将在本方案叙述。实验材料 限制性内切核酸酶基因组 DNAλ 噬菌体 DNA质粒寡聚体试剂、试剂盒 乙酸铵
使用成分输血的不良反应介绍
1、成分输血— 同种免疫较为常见。 2、成分输血—畏寒、发热,严重者可有血压下降,呼吸紧迫表现。 3、成分输血—肺部合并症可有肺炎、肺水肿,以及由于白细胞聚集而形成微小栓子等。 4、成分输血—粒细胞输注发生巨细胞病毒感染者比输其他血制品更为多见。
PCR技术(二):PCR反应模板的制备
PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计,酶的质量.模板的制备,在前二者都稳定可行的情况下,PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能,决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DN
质粒DNA的小量制备实验——煮沸小量制备法
实验方法原理当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。推荐采用本方案从1-24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA,尽管该方案十分快捷,但制备的DNA的
巧克力平板制备实验
实验方法原理主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源、氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压,琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I,为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。巧克力平板培养基还能够培养其他细菌,主要的原因是血液中有V、X因子,这两种因子是位于红细胞中的,一般细菌不
制备电泳实验——洗脱
蛋白质的分离纯化是研究其结构、特性和功能的基础,诸如一级结构、溶液构象、晶体结构、免疫功能和生物机理等研究都必须用一定量并具有活性的纯样品作为研究材料。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编:郭尧君。实验方法原理严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品
细菌RNA制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期,加入1/20体积终止缓冲液,置于冰上。2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.
血平板制备实验
实验方法原理 肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外,还可判断溶血情况,菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤 成分:牛肉浸出液: 1000 ml蛋白胨:
血平板制备实验
实验方法原理肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外,还可判断溶血情况,菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤成分:牛肉浸出液: 1000 ml蛋白胨: