抗原与免疫血清的制备
实验方法原理 动物产生抗体的量,一方面可因动物的种类、年龄、营养状况及刺激部位的感受性的不同而不同外,另方面还与抗原的种类、注射量、注射途径、注射次数以及注射的间隔时间有关。抗原量低到一定限度时,抗体不能产生或用现有方法不能测出,但超过最高限度对抗体的产生反起抑制作用。在最低限度以上,抗体根据抗原量的增加而增加,达到最高限度时,即不再增加。每种类型的抗原,其使用量都是根据经验而得出的。本实验的抗原是细菌细胞,采用每毫升中含 9 亿个细菌,比较恰当。抗原初次注射后,经一段诱导期,血清内即可找到抗体,以后逐渐上升,抗体量一般不高,然后逐渐下降。但再次注射时,抗体量迅速上升到最高水平,而且维持时间也长。因此,制备抗体一般需要多次注射抗原,才能得到高效价的免疫血清。注射途径最常用的是静脉。实验材料 24 h 培养的大肠杆菌斜面 2 kg 左右的健康雄家兔或未孕的健康雌家兔试剂、试剂盒 硫柳汞0.5% 石炭酸生理盐水仪器、耗材 M......阅读全文
免疫血清的定义
(1)抗毒素,将类毒素多次免疫动物(常用马)后,采取动物的免疫血清,经浓缩纯化后制得。主要用于治疗细菌外毒素所致疾病。常用的有白喉抗毒素、破伤风抗毒素。(2)抗菌血清,在本世纪40年代以前曾用抗肺炎、抗百日咳、抗炭疽等抗菌血清治疗有关疾病。自从磺胺类药物和抗生素大量应用后,已极少应用于临床治疗。但对
超抗原与普通抗原的区别
超抗原(super antigen,SAg)是一类只需极低浓度(≤10-9M)即可激活大量的T细胞克隆,产生极强免疫应答的物质。超抗原与普通抗原相比,不需要常规的细胞内抗原提呈,无MHC限制性。超抗原一端与APC表面的MHC-Ⅱ类分子抗原结合槽外的非多态区结合,一端与TCR的Vβ外侧区结合,通过
抗原加工与抗原递呈
抗原加工是指蛋白质抗原在细胞内被降解成能与MHC分子结合的肽的过程。抗原递呈是指MHC分子与抗原肽结合,将其展示于细胞表面供T细胞识别的过程。抗原又分为内源性抗原和外源性抗原,内源性抗原:细胞内产生的蛋白质抗原,包括自身抗原和非己抗原----MHCⅠ分子递呈。外源性抗原:由细胞外摄入细胞内的蛋白质抗
大肠杆菌O抗原,伤寒杆菌O抗原等的制备
大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克
关于免疫血清的简介
(1)抗毒素,将类毒素多次免疫动物(常用马)后,采取动物的免疫血清,经浓缩纯化后制得。主要用于治疗细菌外毒素所致疾病。常用的有白喉抗毒素、破伤风抗毒素。 (2)抗菌血清,在本世纪40年代以前曾用抗肺炎、抗百日咳、抗炭疽等抗菌血清治疗有关疾病。自从磺胺类药物和抗生素大量应用后,已极少应用于临床治
人工抗原的制备是什么样的
半抗原与载体蛋白的耦联物称之为人工抗原。载体不仅是简单地增加半抗原的分子质量,更重要的是利用其强的免疫原性诱导机体产生免疫应答,对半抗原发生载体效应的作用。蛋白质结构越复杂,免疫原性越好。常用的载体蛋白有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、兔血清白蛋白(RSA)、人血清白蛋白(HSA)、人γ
完全抗原与半抗原的主要区别
异常改变溶血性贫血先天性获得性裂红细胞及碎片不稳定血红蛋白血症包涵体贫血微血管病性溶血性贫血、人工心瓣膜棘红细胞β-脂蛋白缺乏症重型肝病球形红细胞遗传性球形红细胞增多症免疫性溶血性贫血(温抗体型IgG)靶形红细胞珠蛋白生成障碍性贫血、 异常血红蛋白血症(HbE)重型肝病红细胞凝集现象冷凝集素病(Ig
可溶性抗原的制备及鉴定2
1、超速离心法 此法分离和纯化抗原的原理是利用各颗粒在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度梯度层内,达到彼此分离的目的。常用的密度梯度介质有蔗糖、甘油、CsCl等。 用超速离心或梯度密度离心分离和纯化抗原时,除个别成分外,极难将某一抗原成分分离出来,故只用于少数大分子抗原的分
可溶性抗原的制备及鉴定1
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原,它们有相当部分来源于组织和细胞,成分复杂。制备这类免疫原时,首先须将组织和细胞破碎,然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原,提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。 一、组织匀浆的制备 用于制备免疫原的材料必须是新鲜或低
半抗原性免疫原的制备
半抗原指只具有抗原性而无免疫原性的物质。多见于分子量小于4000的有机物质。半抗原与载体相结合具有免疫原性。(一)载体1. 蛋白质:以牛血白蛋白最常见。2. 多肽聚合物:常用多聚赖氨酸。3. 大分子聚合物和某些颗粒。(二)半抗原与载体的连接方法1. 物理方法:通过电荷和微孔吸附半抗原。2. 化学方法
抗原呈递细胞的选择和制备
实验步骤基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠(见 表 A .2A .1),包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V
抗原的处理与递呈
捕获与处理辅佐细胞可通过多种方法捕获抗原,例如吞噬作用(对同种细胞或细菌等大型颗粒)和胞饮作用(对病毒等微小颗粒或大分子)等。这种吞噬和吞饮作用无抗原特异性,可能的识别机制在于吞噬细胞与被吞噬颗粒之间的表面亲水性差异。另外还有受体介导的内摄作用,这是弱吞噬力的辅佐细胞捕获抗原的主要方式,例如B细胞可
Rh的抗原与抗体
1.Rh系统抗原(1)Rh抗原:已发现40多种Rh抗原,与临床关系最密切的5种为D、E、C、c、e,这5种抗原中D的抗原性最强,对临床更为重要。(2)DU(弱D):为一组弱D抗原。尽管DU的抗原性较D为弱,但仍是Rh阳性细胞,所以将DU血输给Rh阴性受血者时,仍有引起产生抗D的可能性,因此应将DU型
抗原的处理与递呈
捕获与处理辅佐细胞可通过多种方法捕获抗原,例如吞噬作用(对同种细胞或细菌等大型颗粒)和胞饮作用(对病毒等微小颗粒或大分子)等。这种吞噬和吞饮作用无抗原特异性,可能的识别机制在于吞噬细胞与被吞噬颗粒之间的表面亲水性差异。另外还有受体介导的内摄作用,这是弱吞噬力的辅佐细胞捕获抗原的主要方式,例如B细胞可
凝集吸收实验
实验概要肠道杆菌中的许多细菌都有部分相同的抗原结构。因之一种细菌可与另一种细菌相应的抗血清发生交叉凝集反应。用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去,剩下抗体只能与特异性抗原起反应,这种试验即称凝集吸收试验。利用凝集吸收试验可制备单价因子血清,以进行细菌抗原结构的分析
凝集吸收实验
实验概要肠道杆菌中的许多细菌都有部分相同的抗原结构。因之一种细菌可与另一种细菌相应的抗血清发生交叉凝集反应。用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去,剩下抗体只能与特异性抗原起反应,这种试验即称凝集吸收试验。利用凝集吸收试验可制备单价因子血清,以进行细菌抗原结构的分析
凝集吸收实验原理、材料和方法
一、原理肠道杆菌中的许多细菌都有部分相同的抗原结构。因之一种细菌可与另一种细菌相应的抗血清发生交叉凝集反应。用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去,剩下抗体只能与特异性抗原起反应,这种实验即称凝集吸收实验。利用凝集吸收实验可制备单价因子血清,以进行细菌抗原结构的分析
免疫血清的概念和种类
免疫血清 immune serum亦称抗血清。含有抗体的血清制剂。种类很多,包括抗毒素、抗菌血清、抗病毒血清、抗Rh血清等。
佐剂与抗原乳化
(1)研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。(2)注射器混合法:将等量的
凝集吸收实验
实验方法原理 利用凝集吸收试验可制备单价因子血清,以进行细菌抗原结构的分析及鉴定菌型。 实验材料 免疫血清 试剂、试剂盒 肠炎杆菌菌液伤寒杆菌菌液 仪器、耗材 试管吸管毛细吸管 实验步骤 1. 1/10稀释伤寒杆菌免疫血清分别与肠炎杆菌与伤寒
凝集吸收实验
实验方法原理 利用凝集吸收试验可制备单价因子血清,以进行细菌抗原结构的分析及鉴定菌型。实验材料 免疫血清试剂、试剂盒 肠炎杆菌菌液伤寒杆菌菌液仪器、耗材 试管吸管毛细吸管实验步骤 1. 1/10稀释伤寒杆菌免疫血清分别与肠炎杆菌与伤寒杆菌进行玻片凝集,可见伤寒免疫血清与两种菌均有凝集,说明二菌具有
免疫荧光细胞化学染色方法
一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 (一)直接法 1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),在室温或37℃染色30
免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:间接法
一、原理与意义 免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——间接法,是一种荧光抗体染色法。该方法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原,敏感性较高,操作方法较易掌握,而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体(如麻疹)等的研究和检查,所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。 二、操作流程 (一)双层法
免疫荧光细胞化学染色方法
免疫荧光细胞化学染色方法 一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 (一)直接法 1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光 抗体或兔抗人 IgG 或 IgA 荧光抗体
细胞表面抗原染色的组织样本制备方法
该方法适用于新鲜和冷冻标本1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用缓冲液或培养液浸湿。2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon 二遍。3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中,盖上盖子,将Medicon 插入到Medimachine中。4.降解组织。降解组织的时间长短依
抗原呈递细胞的选择和制备(一)
基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠(见 表 A .2A .1),包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V ) 台
抗原呈递细胞的选择和制备(二)
备 选 方 案 2 Con A 刺激的腹腔巨噬细胞的制备此方案中不使用致病菌,但巨噬细胞获得率较低。将 Con A 溶 解 于 PBS (200ul/ml) ,用 0.22/xm 的滤器过滤,然后保存于 一 20°C 。 每只小鼠腹腔注射 500ul (IOOug)C o n A (附录 2
抗原抗体反应的人单克隆抗体的制备
小鼠的单克隆抗体蛋白应用于人体后,作为抗原能引起人的免疫应答,大大降低其生物活性,并可能导致变态反应。因此人源单克隆抗体在临床治疗上有广泛应用前景,引起人们的普遍兴趣。但是人单克隆抗体制备存在许多技术上和伦理上的障碍,如人杂交瘤细胞系不稳定,有些抗原不能对人进行人工免疫,人B细胞只能从外周血中分
可溶性抗原(soluble-antigen)的制备及鉴定
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原,它们有相当部分来源于组织和细胞,成分复杂。制备这类免疫原时,首先须将组织和细胞破碎,然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原,提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。 一、组织匀浆的制备用于制备免疫原的材料必须是新鲜或低温
癌胚抗原的了解与认识
癌胚抗原(CEA),在1965年首先由Gold 和 Freedman 报道,是从结肠腺癌的肝转移和正常胎儿消化道分离提取而得。 它被认为是一个最广泛应用的人类肿瘤相关抗原。作为一种免疫的异种糖蛋白组,CEA分子量大概为200000道尔顿,其中含有50~85%的碳水化合物。CEA 是免疫球蛋白大家庭中