酶活性分析法检定蛋白质的方法步骤
表现出來的酶GUS可以水解其基质衍生物pNPG，所产生的黄色生成物p-nitrophenol，可供活性测定 （Jefferson et al, 1986）；仪器用具：ELISA光度计 （Dynatech）；微量滴定盘 （microtiter plate, Nunc F96 Maxisorb 442404） 药品试剂：基质溶液 （GUS reaction buffer）：pNPG （p-nitrophenyl β-D-glucuronide, Sigma N-1627） 31.5 mg溶于Buffer A-0 100 mL终止液 （stop buffer）：2.5 M 2-amino-2-methyl propanediol （Sigma A-9754） 方法步骤：1） 吸取20 μL 的蛋白质样本，小心注入微量滴定盘中，避免气泡产生。2） 每一样品槽加入200 μL 基质液，混合均匀；可用烧热的接种环去除气泡。3） 静置......阅读全文
检定旋转粘度计的基本步骤
液体在流动时，在其分子间产生内摩擦的性质，称为液体的黏性，粘性的大小用黏度表示，是用来表征液体性质相关的阻力因子。 旋转式粘度计是用于测量液体的粘性阻力与液体动力粘度，广泛用于测定油脂、油漆、塑料、食品、药物、化妆品、胶沾品等各种流体的粘度。 旋转粘度计测量粘度的基本原理是基于浸于流体中的物体( 如
DNA酶I足迹分析法实验——NA酶I足迹分析法
本分析方法用来检测DNA上特异的蛋白质结合位点。位点上结合的蛋白质可保护 D N A 的 磷 酸 二 酯 键 骨 架 免 于 受 D N A 酶 I 催 化 的 水 解 。 水 解 后 D N A 片 段 在 变 性DNA测序胶上分离，通过放射自显影可使结合位点显示出来。足迹法已进一步发展成为确定D
蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤
实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或N
蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立
TD-MSQS 2020 技术篇五蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立 学者简介：武利庆，研究员，中国计量科学研究院前沿计量科学中心蛋白质室主任杨屹，教授，北京化工大学化学学院苏萍，副教授，北京化工大学化学学院 近期，中国计量科学研究院武利庆及其合作者杨屹、苏萍等发表系列文章（Anal.Bioa
蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立
近期，中国计量科学研究院武利庆及其合作者杨屹等发表系列文章(Anal.Bioanal.Chem.412(2020)2777-2784、Talanta178(2018)78-84、Microchem.J.157(2020)104954），介绍了基于表面等离子共振光谱法和数字ELISA的蛋白质免疫亲和活
蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立
TD-MSQS 2020 技术篇五蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立 学者简介：武利庆，研究员，中国计量科学研究院前沿计量科学中心蛋白质室主任杨屹，教授，北京化工大学化学学院苏萍，副教授，北京化工大学化学学院近期，中国计量科学研究院武利庆及其合作者杨屹、苏萍等发表系列文章（Anal.Bioan
双酶切反应酶活性分析
同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer，以保证100%的酶活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲
发光酶免疫分析法
从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同[ 5 ]: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反
发光酶免疫分析法
从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同[ 5 ]: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应
明胶酶谱分析法
实验概要本实验介绍了明胶酶谱分析法的基本原理及操作步骤。实验原理酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再
NK细胞活性检测实验步骤
细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测，常用的实验技术有后两种。NK细胞（natural killer cell）是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞，可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymp
天平砝码的检定方法
天平砝码的检定方法砝码是一种复现质量值的实物量具。它具有一定的物理特性和计量特性：形状、尺寸、材料、表面状况、密度、磁性、质量标称值和zui大允许误差等，它广泛应用于各个部门。因此，砝码的检定，对保证实物的准确可靠性能是很重要的。本文对砝码的检定进行了分析，以期引起有关操作和使用砝码者的注意。一、天
酶活性的基本信息
定义指酶催化一定化学反应的能力。单位在最适条件下，1分钟转化1微摩尔底物所需的酶量为一个酶活力单位(U)。比活力每毫克酶蛋白所具有的酶活力。单位是u/mg。比活力越高则酶越纯。转化数每分子酶或每个酶活性中心在单位时间内能催化的底物分子数(TN)。相当于酶反应的速度常数kp。也称为催化常数（Kcat）
脂肪酶的活性测定
方法：⒈粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸馏水溶解并定容至100 mL， 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。⒉实验设计本实验以10 mL色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最
酶活性的基本内容
定义指酶催化一定化学反应的能力。单位在最适条件下，1分钟转化1微摩尔底物所需的酶量为一个酶活力单位(U)。比活力每毫克酶蛋白所具有的酶活力。单位是u/mg。比活力越高则酶越纯。转化数每分子酶或每个酶活性中心在单位时间内能催化的底物分子数(TN)。相当于酶反应的速度常数kp。也称为催化常数（Kcat）
碳酸酐酶的活性调节
CA的主要抑制剂为磺胺类，表面活性剂如DDT抑制CA的作用可能与使基团解离易化有关。不同的CA对磺胺类抑制剂敏感性不同，研究CAⅡ198位变异种与抑制剂的结合力发现，198位残基侧链的电荷、疏水性和药物亲和力有关CAⅢ198位上的苯丙氨酸侧链上的苯基填塞了疏水“袋”，造成低催化、低敏感性。此外，
低温抑制酶活性的原理
酶的作用机制是通过与底物结合并加速化学反应速率，降温会使酶与底物结合的速度减慢，且酶中的肽链在低温下会收缩，不易与底物嵌合。
酶的活性指标有哪些？
酶催化化学反应的能力叫酶活力(或称酶活性,active unit)。1961年国际酶学会议规定:1个酶活力单位是指在特定条件(25℃,其它为最适条件)下,在1min内能转化1μmol底物的酶量,或是转化底物中1μmol的有关基团的酶量。影响因素酶活力可受多种因素的调节控制,从而使生物体能适应外界条件
淀粉酶活性的测定
一、原理 淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。
酶的活性调节方式介绍
酶的活性调节主要包括四种方式：变构调节、共价修饰调节、酶原激活以及调节蛋白的调控。
酶活性的定义及单位
酶活性指酶催化反应的能力即酶促反应速度。表示常用国际单位。国际单位定义表示酶量的多少，即1min能转化1微摩尔底物（μmol）的酶量为一个国际单位（μmol/min）。用SI制表示的酶活性单位为Katal（催量）。每秒钟转化1个摩尔底物的酶量为1Katal。常用单位为μKatal或nKatal。国际
脂肪酶的活性测定
方法：⒈粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸馏水溶解并定容至100 mL， 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。⒉实验设计本实验以10 mL色拉油为底物，以酶用量、水解温度、反应时间为因素，通过酸价的测定选定其水解的最
酶活性的定义及单位
酶活性指酶催化反应的能力即酶促反应速度。 表示常用国际单位。国际单位定义表示酶量的多少，即1min能转化1微摩尔底物（μmol）的酶量为一个国际单位（μmol/min）。 用SI制表示的酶活性单位为Katal（催量）。每秒钟转化1个摩尔底物的酶量为1Katal。常用单位为μKatal或nKa
碳酸酐酶的活性调节
CA的主要抑制剂为磺胺类，表面活性剂如DDT抑制CA的作用可能与使基团解离易化有关。不同的CA对磺胺类抑制剂敏感性不同，研究CAⅡ198位变异种与抑制剂的结合力发现，198位残基侧链的电荷、疏水性和药物亲和力有关CAⅢ198位上的苯丙氨酸侧链上的苯基填塞了疏水“袋”，造成低催化、低敏感性。此外，表面
检测酶活性的荧光探针
检测酶活性的荧光探针 共聚焦激光扫描显微镜除了具备荧光显微镜检测荧光酶细胞化学的作用以外，在检测活细胞酶活性动态变化方面有着无可比拟的优势。通过对细胞施予不同的处理因素可检测细胞内相应的酶被激活或灭活的动态变化过程。有的酶荧光探针是自身就可发出荧光、有的是与酶结合后发出荧光、有的则是被酶分解后发出荧
生物活性物质蛋白质的简介
蛋白质是由许多α氨基酸按照一定的序列通过酰胺键 （或肽键）缩合而成的，具有较稳定的构象并具有一定生物功能的生物大分子。蛋白质是生命的载体，任何有生命的机体都不可能离开蛋白质。蛋白质在生命活动和种族繁衍中有重要的生物学意义，承担着强大的功能。 ① 结构功能：蛋白质是生物组织和细胞的组成成分，并发
DNA酶I足迹分析法实验——粗制品的DNA酶足迹分析法
实验方法原理DNA酶足迹分析常用来寻找粗制品中的蛋白质，因而提供了一种在纯化过程中采用的分析方法。通过改变条件，如在反应体系中加入大量的竞争性DNA，或增加反应中盐的浓度，可抑制非特异性的DNA结合蛋白结合到标记的DNA上。实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶10
亚硝酸还原酶的酶活性测定
NiRs是胞内酶，其氧化还原反应过程中需要供体电子，且大多需要在厌氧条件下进行。因此体外检测亚硝酸还原酶时需要在密闭无氧且有电子供体的情况下才能进行检测。电子供体有甲基紫精、连二亚硫酸钠和硫代硫酸钠等 。
精氨酸酶的酶活性单位定义
酶活性单位定义：在pH值9.5，37℃、1min内转换1.0μmol L-精氨酸成为L-鸟氨酸和尿素的酶量为一个活力单位。在有尿素循环(urea cycle)的人和哺乳动物体内才存在精氨酸酶，它的作用是体内尿素从精氨酸上水解下来，并生成L-鸟氨酸，这反应通常发生在肝脏细胞的胞液中。
免疫染色法检定蛋白质
实验概要转印到纸上的蛋白质抗原，可与其专一性抗体结合，再以二次抗体-酶结合体(2nd Ab-HRP) 或Protein A-HRP 呈色；可在一群转印色带中，专一性地挑出目标蛋白质，是最有用的检定工具。主要试剂1. 抗体溶液：可用传统抗血清或单株抗体，其最适使用浓度，随抗体效价不同而异，以下为一般适