明胶酶谱分析法

实验概要本实验介绍了明胶酶谱分析法的基本原理及操作步骤。实验原理酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。复性原理:在电泳过程中,SDS与样品中的MMPs结合(当然是可逆性结合),破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用,而只有当将胶置Trition中洗脱(最好是放在摇床上摇,30min/次,做2次或15min/次,4次。静置于Trition中是不妥的。)时,由于SDS被Trition结合而去除,从而使MMPs恢复了活性。主要试剂1. 配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶(含1.0mg/ml 明胶,配好后1周内使用,明胶含量低灵敏度高) &n......阅读全文

明胶酶谱实验

实验材料 细胞匀浆组织提取物试剂、试剂盒 聚丙烯酰胺凝胶明胶浓缩胶Tris-甘氨酸缓冲液Triton X-100过硫酸铵甲醇醋酸考马斯亮蓝蛋白质上样缓冲液仪器、耗材 电泳糟凝胶成像仪实验步骤 在整个测定过程中,要避免可抑制酶活性的成分污染;Triton X-100洗涤过程要充分,这对恢复酶的活性十分

明胶酶谱实验

明胶酶谱法             实验方法原理 细胞外基质(ECM)是细胞生存的重要内环境,不仅含有胶原、糖蛋白、蛋白多糖等成分,而且含有大量的蛋白酶、细胞因子、黏附分子。ECM,

明胶酶谱实验

明胶酶谱法可用于:(1)明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)的测定;(2)测定明胶酶的抑制剂;(3)细胞与组织中明胶酶的定位。实验方法原理细胞外基质(ECM)是细胞生存的重要内环境,不仅含有胶原、糖蛋白、蛋白多糖等成分,而且含有大量的蛋白酶、细胞因子、黏附分子。ECM,尤其是其中的基底膜,

明胶酶谱实验

明胶酶谱法可用于:(1)明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)的测定;(2)测定明胶酶的抑制剂;(3)细胞与组织中明胶酶的定位。实验方法原理细胞外基质(ECM)是细胞生存的重要内环境,不仅含有胶原、糖蛋白、蛋白多糖等成分,而且含有大量的蛋白酶、细胞因子、黏附分子。ECM,尤其是其中的基底膜,

明胶酶谱实验

实验方法原理细胞外基质(ECM)是细胞生存的重要内环境,不仅含有胶原、糖蛋白、蛋白多糖等成分,而且含有大量的蛋白酶、细胞因子、黏附分子。ECM,尤其是其中的基底膜,是肿瘤转移过程中必须克服的生理屏障。基质金属蛋白酶家族(MMPs)可以降解细胞外基质,帮助肿瘤细胞克服这一屏障并为细胞增殖提供空间。MM

明胶酶谱法操作

原理:  Ø        酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲 系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在 蓝色背景下可

明胶酶谱法操作

明胶酶谱法 原理:  Ø         酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲 系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝

明胶酶谱法操作

实验概要酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-2

明胶酶谱法操作

明胶酶谱法原理: Ø    酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条

关于明胶酶谱法的凝胶制备介绍

  1、明胶酶谱法凝胶的制备—玻璃板对齐后放入夹中,垂直卡紧,加满水检漏。  2、明胶酶谱法凝胶的制备—配10%分离胶,APS和TEMED作用为促凝,最后灌胶前加。若板不漏水,则将水倒出,并用吸水纸洗净后灌胶,灌至大约3/4处,上面加满水压平。  3、明胶酶谱法凝胶的制备—配浓缩胶,同样地,APS和

关于明胶酶谱法的实验步骤介绍

  1、明胶酶谱法实验步骤:取对数期的癌细胞在的无血清培养基DMEM中培养24h。  2、明胶酶谱法实验步骤:次日收集上清液,将上清液移入离心管中 2000rpm 离心10min,-70℃储存备用。  3、明胶酶谱法实验步骤:根据细胞计数调整各组细胞培养上清液中的蛋白浓度(或者测定蛋白浓度调整使所上

关于明胶酶谱法的基本信息介绍

  酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-2和M

关于明胶酶谱法的注意事项介绍

  1、明胶酶谱法注意事项—制备聚丙烯酰胺凝胶时应注意排除气泡 。  2、明胶酶谱法注意事项—明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和pH值等因素的影响,因此缓冲液配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。  3、明胶酶谱法注意事项—用大梳子。  4、明胶酶谱法注意事项—孵育液的pH最好在7.5-7

关于明胶酶谱法的基本原理介绍

  明胶酶谱法的复性原理:在电泳过程中,SDS与样品中的MMPs结合(当然是可逆性结合),破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用,而只有当将胶置Triton中洗脱(最好是放在摇床上摇,30min/次,做2次或15min/次,4次。静置于Trition中是不妥的。)时,由于SDS被Tr

明胶酶谱分析法

实验概要本实验介绍了明胶酶谱分析法的基本原理及操作步骤。实验原理酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再

YIJI基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒...

YIJI基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒使用说明主要用途YIJI基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法(gelatin-zymography)电泳分析试剂是一种旨在通过明胶聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,在分离、蛋白复性、底物水解、染色等一系列步骤下,观察并半定量深蓝色背景中的无色清晰的基质金

YIJI基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒

  YIJI基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒产品说明书(中文版)   主要用途   YIJI基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法(gelatin-zymography)电泳分析试剂是一种旨在通过明胶聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,在分离、蛋白复性、底物水解、染色等一系列步骤下,观察并半定

酶法生产明胶的相关介绍

  酶催化胶原降解制备明胶,与传统的碱法制备明胶的工艺相比,生产周期将会大大缩短,因此国外的明胶工作者一直重视对酶的研究。酶法制胶的研究从1962年开始,已经有50多年的历史,人们已经认识到了,经过酶对胶原降解能够制取明胶,但这样制取的明胶,其分子量分布偏宽,高分子量组份偏多,工艺上控制较难等。这些

什么是酶谱?

中文名称酶谱英文名称zymogram定  义酶分离实验中区带电泳的记录。样品中各种酶按照所带电荷和分子大小被分离,这些酶的活性可以通过特殊的染色反应显示,可以从酶谱上区分酶的类型和相对量。细菌样品的酶谱可辅助细菌分类。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

营养明胶

成分  蛋白胨     5g  牛肉膏     3g  明胶      120g  蒸馏水     1000mL  pH6.8~7.0 制法  加热溶解、校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固。复查最终pH应为6.8~7.0。 试验方法  用琼脂培养

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)酶联免疫分析

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆,尿液及相关液体样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)含量。实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(N

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的介绍

  中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是lipocalin的一种,最初是在激活中性粒细胞中被发现的一种小分子量分泌性蛋白,现代研究表明,NGAL是诊断急性肾损伤的最有效生物学标志之一,也是早期糖尿病肾病的有效标志物之一。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的作用

  1、急性肾脏病变的早期标志物  实验发现,在缺血肾脏发生的极早期(2h内)即可在血、尿中检测到NGAL明显上调,对缺血-再灌注模型小鼠注射重组NGAL,可减少氮质血症,减轻肾脏损伤。人体研究也发现心脏术后患者在急性肾脏病发生的2h内,血、尿NGAL显著升高,据此,研究者推测NGAL可作为心脏术后

什么是中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白

  中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是lipocalin的一种,最初是在激活中性粒细胞中被发现的一种小分子量分泌性蛋白,现代研究表明,NGAL是诊断急性肾损伤的最有效生物学标志之一,也是早期糖尿病肾病的有效标志物之一。

什么是酶谱法

每一种酶都有自己的特征谱线值,利用酶的这一特性,可以对生物的各种酶进行检测。

安谱推出明胶药用空心胶囊铬检测耗材整体解决方案

  检测背景:    2012年4月15日,“一周质量报告”栏目率先爆料9家知名药厂生产的13个批次药品所用胶囊铬超标,最高超标90倍。据新华社电根据国家食品药品监督管理局网站消息,国家食品药品监督管理局日前发出公告,要求药用明胶、胶囊和胶囊剂药品生产企业对购进的原辅料和销售的产品严格实施批批检

何为工业明胶?

工业明胶。资料图   工业明胶是一种从动物的结缔或表皮组织中的胶原部分水解出来的蛋白质。它具有许多优良的物理及化学性质,如形成可逆性凝胶、黏结性、表面活性 等,在食品工业中广泛地用作胶冻、乳化剂、稳定剂、黏合剂和澄清剂等。   基本信息   工业明胶,一种精

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的发现缘来

  1993年,Kjeldsen等在研究中性粒细胞中92kD的MMP-9时发现了一种25kD的新蛋白。进一步研究发现,这种新蛋白是一种由178个氨基酸残基组成的单体,既能够自身聚合形成46kD的同源二聚体,也能够与MMP-9聚合形成135kD的异源二聚体,是一种新的lipocalin,因此被命名为n

宋诙小组发现能够用于明胶制备的新型蛋白酶

  新型蛋白酶法制备明胶工艺对于资源利用和环境维持都有重要意义,同时对于现有骨素处理和明胶提取设备具有很好的兼容性。此外,在生产方面,无需额外添加独特工艺设备,传统工艺的工厂可以快速转化为使用酶法工艺,便于扩大生产规模。中国科学院天津工业生物技术研究所的研究人员正在做实验  明胶是胶原的水解产物,广