PCR基因扩增2
(4)引物的熔点温度(Tm值)要适当。Tm值与引物的碱基组成和长度有关;PCR引物的GC/AT应与要扩增的模板DNA相当或略高些。一般熔点温度以大于55℃为宜。(5)引物的3,末端必须与模板严格互补,而5,末端的要求可灵活些。(6)目前在引物选择中已广泛应用计算机软件,从EMBL或Genebank中查找有关基因序列,并对设计的引物在引物二聚体形成、自身互补性及特异性等方面进行分析评价。(7)用于亚克隆的引物,常在引物的5,端加上限制性内切酶位点。为了保证内切酶有效酶切扩增产物,一般在酶切位点的5,端再加上几个额外的碱基。(8)引物的浓度,在终浓度为0.2~1.0 umol/L的范围内产量基本相同,低于0.2 umol/L时会影响产量。但过高时一乃不经济,二则会出现非特异扩增及增加引物二聚体的产生。3. 热稳定DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)一般用量为2.5 U/100uL 反应体积。酶量过多易导致非特异性产物的产生。该类酶......阅读全文
PCR基因扩增
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃
PCR基因扩增1
一、实验原理 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种体外核酸扩增系统,其原理类似DNA分子的天然复制过程,是将在待扩增的DNA片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增 2n 倍。该技术已成为分子生物学中
PCR基因扩增2
(4)引物的熔点温度(Tm值)要适当。Tm值与引物的碱基组成和长度有关;PCR引物的GC/AT应与要扩增的模板DNA相当或略高些。一般熔点温度以大于55℃为宜。(5)引物的3,末端必须与模板严格互补,而5,末端的要求可灵活些。(6)目前在引物选择中已广泛应用计算机软件,从EMBL或Genebank中
PCR基因扩增实验
[实验目的]通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。[实验原理]多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍。1.变性:加
PCR基因扩增原理
基因扩增技术(PCR)聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每1
基因扩增梯度PCR仪
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观
PCR基因扩增仪简介
分类: PCR仪的种类总体来说可以分为两大类:PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪。用途: PCR仪是医学,农业,食品,医药,检验检疫等领域的实验室常规仪器设备。PCR仪原理: 为双链dna在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在dna聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对
浅谈PCR基因扩增仪
聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。生命科学仪器
PCR扩增制备目的基因
1.目的学会PCR操作的基本技术。2.原理是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中
PCR基因扩增仪简介
聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction)聚合酶链式反应 聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应
目的基因的PCR扩增
实验概要进行目的基因的PCR扩增实验原理PCR(聚合酶链式反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。它包括3个基本步骤:⑴变性:目的双链DNA片段在94℃下解链;⑵退火:两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;⑶延伸:在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适
基因扩增PCR的扩增与克隆方法介绍
①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区,且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合,提高反应的特异性 ②引物长度:15-40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。 ③引物的碱基尽可能随机发布,避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列,G+C碱基的含量在40%-75%
应用PCR技术扩增Hbβ基因
复习细胞内DNA复制条件和过程。 一、目的 1:学习PCR技术的基本原理 2:掌握从全血中制备DNA的方法‘ 3:掌握应用PCR扩增Hbβ基因的基本操作 4:熟悉Hb基因结构 二、原理 1:PCR扩增的原理 聚合酶链反应—PCR是一种体外基因扩增技术,是在引物和四种脱氧核苷三磷酸存在下,利用DNA
PCR基因扩增仪的用途
西安天隆科技有限公司DTC-3G型PCR基因扩增仪适用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction , PCR)为特征的、以检测D
基因扩增仪PCR产品特点
优化的温控模式,升降温速度快,温控精确,热效率高,仪器寿命更长。一机多用:兼容0.2ml,0.5ml管,96标准微孔板。无油热盖调节方便,彻底防止蒸发。仪器操作简便,人机界面友好。体积小,重量轻,节省实验室空间。
PCR基因扩增仪实验原理
技术应用实现快速高效均衡扩增检测由光开关阵列、自聚焦透镜和尾纤准直器及变增益微光O/E装置组成的MEMS有机整体,在以16位单片机为核心的电控装置管理下,能在毫秒级时间内完成多个标本快速均衡扫描检测,避免了机械扫描方式或CCD扫描方式引起的时间滞后或渐晕误差。实现标准样本的PCR热循环扩增及高通量实
基因扩增PCR的扩增结果假阳性的原因
出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个
PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增
PCR 扩增模板和抗体可变区基因的扩增 如果构建Fab抗体库,必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中,主要采用DNA作为扩增模板。 【材料和试剂】(1)PCR仪(2)Taq酶(3)氯仿(4)琼脂糖 【
PCR基因扩增仪的工作原理
基因扩增仪性能,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。
基因扩增仪(PCR仪)技术原理
基因扩增仪(PCR仪)技术原理:标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通
PCR基因扩增仪的维护保养
PCR基因扩增仪适用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction , PCR)为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原
PCR基因扩增仪的工作原理
基因扩增仪性能卓越,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。基
PCR基因扩增仪的分类介绍
PCR基因扩增仪的类型:PCR基因扩增仪的设计均按照DNA变性、复性和延伸三个环节以及温度均恒、传导快和升降温迅速等原则,结合传感技术、微电子技术和电子计算机等技术发展而成的自动化和智能化的仪器设备,下面仅从保温和变温的角度介绍几类PCR仪的原理。1. 水浴式PCR基因扩增仪 水浴式PCR基因扩增仪
PCR基因扩增仪的分类介绍
PCR基因扩增仪的类型:PCR基因扩增仪的设计均按照DNA变性、复性和延伸三个环节以及温度均恒、传导快和升降温迅速等原则,结合传感技术、微电子技术和电子计算机等技术发展而成的自动化和智能化的仪器设备,下面仅从保温和变温的角度介绍几类PCR仪的原理。1. 水浴式PCR基因扩增仪 水浴式PCR基因扩增仪
PCR基因扩增仪技术参数
样品规格0.2ml×96孔、12×8联排管、96微孔板、0.5ml×77孔控温模式基座BLOCK模式、管内TUBE模拟计算模式反应体积10-100ul温控范围0--99.9℃BLOCK升降温速率(Max.)≥4℃/sec样品升降温速率(Max.)≥3.5℃/sec温度显示精度±0.1℃温度准确度±0
PCR基因扩增仪的工作原理
基因扩增仪性能,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。
PCR基因扩增原理、材料和方法
一、原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)类似于DNA 的天然复制过程:经过变性、退火、延伸多次循环(图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即Y = ( 1 + X ) n式中,Y 为DNA 扩增倍数;X 为扩增效率;n 为循环次数二、材料(1)
PCR仪|基因扩增仪工作原理
什么是PCR技术?PCR(Polymerase Chain Reaction)技术,中文译为聚合酶链式反应,是一种在体外(试管、切片…)扩增核酸的技术。PCR的基本反应包括以DNA为模板的反应和以mRNA为模板的反应。PCR技术是模拟体内天然DNA(脱氧核糖核酸)的复制过程。以扩增DNA为例,其基本
RTPCR扩增目的基因cDNA
实验概要学习从细胞或组织的RNA中用逆转录PCR扩增目的基因的技术及操作。实验原理普通PCR方法可以以DNA为模板扩增基因,但真核生物的基因组中通常分为可转为mRNA的外显子和不转录的成mRNA的内含子,所以从染色体DNA用PCR方法扩增出的基因是内含子和外显子相间排列的DNA分子,不能用于基因工程
基因扩增仪(PCR仪)技术原理
基因扩增仪(PCR仪)技术原理:标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,