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①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区,且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合,提高反应的特异性 ②引物长度:15-40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。 ③引物的碱基尽可能随机发布,避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列,G+C碱基的含量在40%-75%之间。 ④引物内部应避免形成二级结构,特别是引物的末端应避免有回文结构。 ⑤二个引物不应有互补序列,特别是3’端应避免互补,以免形成“引物二聚体”,浪费引物。 ⑥引物5’末端碱基无严格限制,在与模板DNA结合的引物长度足够的条件下,其5’端碱基可不与模板DNA互补而呈游离状态,因此可在引物5’端加上限制性内切酶位点、启动子序列或其它序列等以便于PCR产物的分析克隆等,引物的5’端至多可加10个碱基而对PCR反应无影响。......阅读全文
①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区,且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合,提高反应的特异性 ②引物长度:15-40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。 ③引物的碱基尽可能随机发布,避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列,G+C碱基的含量在40%-75%
1.PCR技术 PolymeraseChainReaction聚合酶链反应 它是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四种dNTP的情况下，通过高温变性（90℃－95℃，1－2min）,低温退火（25℃－37℃，1－2min）,中温延伸（60℃－7
基因扩增PCR主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平等。加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行，扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。 基因扩增PCR的扩增与克隆方法： ①引物的序列应位于基因组DNA的
基因扩增PCR主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平等。加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行，扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。 基因扩增PCR的扩增与克隆方法： ①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守
PCR基因扩增仪的类型： PCR基因扩增仪的设计均按照DNA变性、复性和延伸三个环节以及温度均恒、传导快和升降温迅速等原则，结合传感技术、微电子技术和电子计算机等技术发展而成的自动化和智能化的仪器设备，下面仅从保温和变温的角度介绍几类PCR仪的原理。 1. 水浴式PCR基因扩增仪 水浴式PCR
PCR基因扩增仪的类型：PCR基因扩增仪的设计均按照DNA变性、复性和延伸三个环节以及温度均恒、传导快和升降温迅速等原则，结合传感技术、微电子技术和电子计算机等技术发展而成的自动化和智能化的仪器设备，下面仅从保温和变温的角度介绍几类PCR仪的原理。1. 水浴式PCR基因扩增仪 水浴式PCR基因扩增仪
平端连接法 TA克隆法 实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接
实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。 如果要求不高，PCR产物也可不加处理
PCR扩增产物的克隆可以：（1）获得目的DNA片段；（2）用于原核表达的研究；（3）广泛应用于分子生物学相关研究。 平端连接法 实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头
1、使用本制品时务必将Buffer反复混匀后再加,避免因组分不一导致结果差异; 2、配置和分装反应液时请一定使用新的(无污染的)喷头以避免污染; 3、如扩增条带多,可适当添加酶和dNTPs; 4、当多重PCR扩增产物的长度均在1kb以内时,使用3%～4%浓度的Agarosegel进行电泳分离效果。