细胞实验技术及细胞培养基本知识2
（二）人类淋巴母细胞建株方法1、4ml肝素抗凝血于离心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白细胞层（第二层）于另一离心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。 5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混匀。 6、水浴摇床，40次/分，37℃，3hr。 7、1500rpm，15min。将细胞接种至1ml培养基中（内含谷氨酰胺1mM/ml）加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，37℃培养。 8、5天后观察细胞转化和生长情况，决定是否半量换液。一般半量换液l～2次，并维持环胞霉素的浓度。 9、待转化细胞数量明显上升，并出现细胞团块后，可转入25ml细胞培养瓶中，加1～2ml培养基，37℃培养10～15天，一般每隔3～4天观察一......阅读全文
细胞实验技术及细胞培养基本知识2
（二）人类淋巴母细胞建株方法1、4ml肝素抗凝血于离心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白细胞层（第二层）于另一离心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。
细胞实验技术及细胞培养基本知识3
三、神经胶质细胞培养神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象，但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传
细胞实验技术及细胞培养基本知识1
细胞培养技术细胞周期的测定一、原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法
细胞培养技术2
◇湿热消毒的注意事项①不可用安全阀摘子排气。②消毒的过程中若出现漏气现象，可调节消毒器盖内的胶垫的位置。③灭菌完毕，不要急于取出消毒品，可利用消毒器的余热去除物品部分湿气，待半小时左右再移入干燥箱烘干。2.干热消毒 这种消毒方法主要用于玻璃器皿消毒，一般温度在160℃维持90—120分钟就可以杀死
细胞培养基本知识
一.细胞培育的基本概念体外培育（in vitro culture）包含一切构造层次的培育，即：安排培育（tissue culture）、细胞培育（cell culture）和器官培育（organ culture）。细胞培育(Cell culture)指从生物机体取出有些安排涣散成单个细胞或直接从机体
小鼠肝细胞培养实验——细胞培养技术
实验方法原理直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培养法和单层细胞培养法。实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEMDMEM胰酶PBS仪器、耗材饭盒纱布小剪子小镊子大镊子大烧杯平皿研
细胞传代实验——细胞培养技术
细胞传代实验可用于：（1）医学研究；（2）提供细胞种。（3）进行细胞生物学研究。实验方法原理培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。实验材料细胞试剂、
猪甲状腺细胞培养实验_细胞培养技术
实验方法原理由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。实验材料猪甲状腺试剂、试剂盒F-12培养基胎牛血清胰蛋白酶胶原酶Ⅳ牛 TSH仪器、耗材眼科剪滴
大鼠肝星状细胞培养实验——细胞培养技术
大鼠肝星状细胞原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料雄性 SD 大鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠小牛血清DMEM
实验技术：细胞培养基本技术
细胞培养 一、操作规程： 1.实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70％酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台。如需要继续进行下一个实验,则用
实验技术：细胞培养基本技术
一、操作规程：1.实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70％酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台。如需要继续进行下一个实验,则用70％酒精擦拭无菌操作台面,再
细胞培养污染拯救及预防方法2
2、支原体污染的检测（1）相差显微镜观察直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。（2）荧光染色法观察用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使
细胞培养实验的无菌化技术
The use of aseptic technique is essential for avoiding the production of infection whilst undertaking tissue culture activities.Many activities take p
细胞培养实验——悬浮细胞培养
实验材料冻存 HeLa S3 细胞试剂、试剂盒70% 乙醇完全 MEM-10胰酶／EDTA仪器、耗材旋转瓶完全培养基-525 cm2 组织培养瓶C02 培养箱Sorvall H-6000A 转子100 ml 或 200 ml 通气旋转瓶和带滤膜的瓶盖实验步骤1. 将含有冻存 HeLa S3 细胞的安
细胞技术专题：大鼠肝星状细胞培养实验
实验方法细胞培养技术 实验方法原理选用Wistar大鼠经消化酶灌注肝脏后,用分离液分离HSC，通过观察其自发荧光及其显著特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定。 实验材料雄性 SD 大鼠 试剂、试剂盒戊巴比妥钠 小牛血清 DMEM 酶消化液I、Ⅱ Nycodenz D-Hanks’液 HB
细胞技术专题：小鼠腹腔巨噬细胞培养实验
小鼠腹腔巨噬细胞培可以：（1）吞噬与清除异物；（2）分泌生物活性物质；（3）对仿生全降解材料，降解后的无机产物与生命过程中有机物的合成作用。实验方法细胞培养技术实验方法原理取小鼠腹腔巨噬细胞与乳胶颗粒在不同培养条件下混合后定量加入24孔板，37 ℃，5% CO2 培养箱中孵育后，荧光显微镜下计数吞噬
特殊细胞培养实验_球体细胞培养实验
实验方法原理大多数培养细胞都具有贴附在底物上生长成单层细胞的性质，如细胞长成片之后，让细胞片与底物脱离，更换到使细胞不易贴附的底物上继续生长时，则细胞片能卷聚成球体形，成为球体培养。实验材料细胞试剂、试剂盒Hanks培养液胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1. 琼脂铺底的培养瓶30 ml无菌培养瓶，每
细胞培养常用设备及实验技巧
准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。 配液室的设备： 扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫
细胞培养实验——贴壁细胞培养
实验材料冻存细胞试剂、试剂盒70% 乙醇PBS胰酶／EDTA仪器、耗材25 cm2 和 150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒，打开安瓿，用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起始培养基的 25 cm
细胞培养实验
贴壁细胞培养 悬浮细胞培养 实验方法原理 实验材料 冻存细胞
细胞培养实验
贴壁细胞培养 悬浮细胞培养 实验方法原理 实验材料 冻存细胞
细胞培养实验
实验方法原理 实验材料 冻存细胞试剂、试剂盒 70% 乙醇PBS胰酶／EDTA仪器、耗材 25 cm2 和 150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤 1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒，打开安瓿，用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起
细胞培养技术的细胞培养方式
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内（in vivo）的功能活动是十分困难的。但是如果把活细胞拿到体外（in vitro）培养进行观察和研究，则要方便得多。活细胞离体后要在一定的生理条件下才能存活和进行生理活动，特别是高等动植物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不
细胞培养大攻略2
26、PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别？ PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是杂交瘤生产培养
细胞培养技术
实验概要细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。主要设备细胞培养设施和基本条件 1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染
细胞技术专题：大鼠星型胶质细胞培养实验
大鼠星型胶质细胞培养可以：（1）用于神经系统发育、分化及再生等基础研究；（2）脑缺血预处理上调神经保护蛋白的机制研究；（3）脑损伤和脑疼痛的研究；（4）新蛋白的功能研究。 实验方法酶消化法 胰酶消化法 胰蛋白酶消化法 实验材料大鼠胚胎 试剂、试剂盒L-15培养基 胶原酶 Dnase D-MEM-B
肿瘤细胞诱导血管生成模型实验——细胞培养技术
肿瘤细胞诱导血管生成实验模型可以用于：(1)建立体外实验模型，方便进一步研究；（2）观察肿瘤的生长特点以及其特殊性。实验方法原理无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。实验材料肿瘤细胞试剂、试剂盒DEM藻酸钠N
细胞培养常用设备及实验技巧（二）
细胞的复苏 细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。具体操作 一、实验前准备：1.将水浴锅预热至37℃。2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。3.在超净工作
细胞培养常用设备及实验技巧（一）
常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外
结缔组织类细胞培养实验——巨噬细胞培养实验
实验方法原理巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。但属不繁殖型细胞群，难以长期生存，好的条件下仅能生活2~3 周，因之多用作初代培养。巨噬细胞也能建成无限细胞系；大多来自小鼠，如P388D-1、J774A.1、RAW