细胞实验技术及细胞培养基本知识2
（二）人类淋巴母细胞建株方法1、4ml肝素抗凝血于离心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白细胞层（第二层）于另一离心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。 5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混匀。 6、水浴摇床，40次/分，37℃，3hr。 7、1500rpm，15min。将细胞接种至1ml培养基中（内含谷氨酰胺1mM/ml）加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，37℃培养。 8、5天后观察细胞转化和生长情况，决定是否半量换液。一般半量换液l～2次，并维持环胞霉素的浓度。 9、待转化细胞数量明显上升，并出现细胞团块后，可转入25ml细胞培养瓶中，加1～2ml培养基，37℃培养10～15天，一般每隔3～4天观察一......阅读全文
单细胞培养技术的定义及介绍
单细胞培养(single cell culture)是指从植物器官、愈伤组织或悬浮培养物中游离出单个细胞，在无菌条件下，进行体外生长、发育的技术。人们分离和培养植物单细胞的设想和实践都比较早，但成功地进行单细胞培养是随着更有效的培养基的发展以及从愈伤组织悬浮培养物分离单细胞的专门技术的建立才实现的。
免疫酶细胞化学实验技术2
（四）染色原理及步骤 1．基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同，亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而绝大数单克隆
WML2细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mLWML2细胞。悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 250px 皿中，加入约 8
2A1细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL2A1细胞。悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 250px 皿中，加入约 8m
各类上皮细胞培养2
6）毛细血管内皮细胞培养 肿瘤条件培养基制备： 1．取C3H 小鼠的S-180 实体肉瘤组织。 2．胰蛋白酶消化，Dulbecco 改良Eagle 氏培养液15ml（含10％小牛血清），接种到T-75 Falcon 产培养瓶中培养。 3．在细胞生长接近完全汇合时，收集培养液制成条件培养基；再用含10
特殊细胞培养实验
一、二倍体细胞培养法 加支持物培养法 单细胞分离培养法 多孔塑料培养板单细胞克隆法 球体细胞培养实验 微载体细胞培养法 悬浮培养法
传代细胞培养实验
实验方法原理 当初代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，进而扩展汇合，占满一切空间，此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代，细胞会因增殖过度，培养基营养枯竭和代谢产物积累而发生中毒。80%汇合或刚汇合细胞是理想传代阶段。实验材料 细胞试剂、试剂盒 Hanks胰蛋白酶EDTA培养液
羊水细胞培养实验
实验方法原理 羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以检验胎儿核型。 试剂、试剂盒 碘酒 酒精 营养液
传代细胞培养实验
实验方法原理 当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒，如果不及时的减少细胞密度，细胞将逐渐衰老死亡
羊水细胞培养实验
实验方法原理 羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以检验胎儿核型。试剂、试剂盒 碘酒酒精营养液血清秋水仙素醋酸甲醇仪器、耗材 棉签棉球镊子穿针培养瓶实验步骤 1. 抽取羊水无菌抽取羊水10～20 ml，立即注入无菌离心管中；2. 离心分离1000 转/分，离心10 分钟，去上清，留0.5
羊水细胞培养实验
实验方法原理羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以检验胎儿核型。试剂、试剂盒碘酒酒精营养液血清秋水仙素醋酸甲醇仪器、耗材棉签棉球镊子穿针培养瓶实验步骤1. 抽取羊水无菌抽取羊水10～20 ml，立即注入无菌离心管中；2. 离心分离1000 转/分，离心10 分钟，去上清，留0.5 ml；
特殊细胞培养实验
实验方法原理 二倍体细胞来源体内二倍体细胞，也即正常细胞的初代培养。初代培养细胞成功后能始终保持二倍体细胞性状，便成为二倍体细胞培养。二倍体细胞虽不难培养，但欲求长期呈旺盛地增殖生长、并保持二倍体细胞性状，亦非易事。为此必须采取一些有效的措施，一是低温冻存，二是妥善的培养方法。用反复传代的方法以求获
羊水细胞培养实验
羊水细胞培养实验实验方法原理羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞，可在体外培养用以检验胎儿核型。 试剂、试剂盒碘酒 酒精
肿瘤细胞培养实验
肿瘤细胞培养实验可用于：（1）研究肿瘤的发生机理；（2）研究生物学行为；（3）研究抗肿瘤药物。实验方法原理肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃至繁殖、为研究癌变机理、抗癌药检测、肿瘤分子生物学提供大量的实验材料。实验材料肿瘤组织试剂、试剂盒培养液Hanks胰
肿瘤细胞培养实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 培养液Hanks胰蛋白酶EDTA胶原酶仪器、耗材 培养瓶离心管实验步骤 一、成纤维细胞排除法1. 机械刮除法 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝），或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为（1）标记镜下
传代细胞培养实验
实验方法原理当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒，如果不及时的减少细胞密度，细胞将逐渐衰老死亡。因此需要将培养物按照比例重新接种到新的培养器皿（瓶）内进行
肿瘤细胞培养实验
肿瘤细胞培养实验 提高肿瘤细胞培养存活率和生长率的实验 实验方法原理 肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃
细胞培养技术3
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白为淡黄色粉末，虽易潮解结块，但不影响使用。 不同批号和牌号质量有差异。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解后的产物，含有丰富的氨基酸。开始时它是专为猴肾细胞培养设计的，而实际上它对许多细胞系(株)，如Hela细胞和原代细胞都是一种优良培养基。使用时用Hanks液配制成0
细胞培养技术1
一.细胞培养的基本原理 细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块(0．5～1立方毫米)或薄片
细胞培养技术4
贴壁因子使用方法：①选择适宜的贴壁因子。②将贴壁因子贮存液用三蒸水或PBS液或D-Hanks液稀释成0．1毫克/毫升的工作液。③滤过除菌的工作液按50微升/平方厘米涂布培养器皿的细胞生长面。④室温静置5分钟(胶原基质延长24小时)。⑤除去多余溶液。⑥涂布面用灭菌三蒸水洗涤后，再经细胞培养基浸泡过渡，
肌组织细胞培养实验——心肌细胞培养实验
实验方法原理心肌组织是最早利用的培养材料，Carrel曾长期培养过鸡胚心肌组织，至今心肌仍不失为好的培养物。最常用的是鸡胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎儿心肌等都可应用。心肌是比较容易培养和生长的组织，可应用多种方法进行培养，如悬滴培养、组织块培养和消化培养法等，主要取心室肌培养，均能获得良好的生长效果。
肌组织细胞培养实验——神经组织细胞培养实验
实验方法原理神经组织主要由两种神经细胞（神经元）和神经胶质细胞组成。神经元为高度分化的细胞，在组织发生晚期已失掉增殖能力，对生存条件要求高，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或在加入神经生长因子（NGF）和胶质细胞因子时，才能生存，并可能出现一定程度的分化现象，如长出突起等，但却难使之增殖；即使
肌组织细胞培养实验——骨骼肌细胞培养实验
实验材料肌组织试剂、试剂盒Hanks胰蛋白酶血清胎汁仪器、耗材纱布实验步骤动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。1. 杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3~0.5 厘米小块；2. 用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消
细胞培养实验室的设置及设备
（一）细胞培养实验室的设置 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育
细胞培养实验室设备配置及用途
目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作，具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式（垂直式）和外流式（水平层流式）。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断
细胞培养技术的技术分类
动物细胞培养高速冷冻离心机在所有的细胞离体培养中，最困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。⑴血清：动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯
细胞技术专题：兔膀胱平滑肌细胞培养实验（一）
兔膀胱平滑肌细胞培养可以：（1）分离得到高纯度兔膀胱平滑肌细胞；（2）进行细胞学鉴定研究；（3）用于细胞学其他研究。实验方法酶分离法 实验方法原理运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后，完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞，体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下
细胞技术专题：兔膀胱平滑肌细胞培养实验（三）
收起 注意事项1. 应严格无菌操作。2. 仔细彻底剥除膀胱黏膜、黏膜下及浆膜层，是确保获的大量高质单个膀胱平滑肌细胞的基础。3. 膀胱平滑肌组织应尽量减碎以确保充分消化。4. 严格控制胶原酶和胰蛋白酶的浓度和消化时间，见消化液混浊、组织块呈絮状，或在倒置显微镜下见消化液中有较多单个细胞或细胞小
细胞技术专题：兔膀胱平滑肌细胞培养实验（二）
二、结果 两只兔所有标本均获成功。倒置显微镜观察平滑肌细胞24 小时均可见膀胱平滑肌细胞贴壁生长，正常兔 7 天左右、而梗阻兔则需10~12 天可于50 毫升培养瓶约 80%汇合。均传代顺利，传代后约正常兔6天左右、而梗阻兔需8~9 天可于50 毫升培养瓶约 80%汇合。本组中均传至第8 代，经第8
细胞技术专题：人脐动脉平滑肌细胞培养实验
人脐动脉平滑肌细胞培养可以：（1）获得人脐动脉平滑肌细胞；（2）作为重大动脉疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。实验方法消化法 贴块法 实验方法原理运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。 实