用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测及常见问题
间接法是用未标记的一抗和标记有HRP的二级试剂,经过简单孵育后,进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合,在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时,注意不要发生交叉污染,每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合,而未结合的抗体通过洗涤被去除,然后加入HRP标记的二级试剂,再经过洗涤后HRP酶促反应将在抗原—抗体结合的部位产生棕色沉淀。 1.HRP标记试剂 HRP标记的二级试剂通常用于低分辨率的研究,它可快速检测抗原的存在及位置。其主要优点为敏感性高、仅需光学显微镜即可观察等。 用于标记二级试剂的酶及其底物有数十种。考虑到价格,建议使用HRP及DAB来进行细胞染色。经过较长时间的孵育,HRP酶促反应作用强且呈线性变化。在多数可选底物中,DAB是最常用于HRP标记的试剂,而且也最为敏感。反应产物为深褐色,亦不溶于水和乙醇中。在底物溶液中加入钴、镍等金属盐可提高此......阅读全文
用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测及常见问题
间接法是用未标记的一抗和标记有HRP的二级试剂,经过简单孵育后,进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合,在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时,注意不要发生交叉污染,每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合,而未结合的抗体通过洗涤被去除
用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测
实验概要间接法是用未标记的一抗和标记有辣根过氧化物酶(HRP)的二级试剂,经过简单孵育后,进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合,在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时,注意不要发生交叉污染,每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合,而
用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测
实验概要间接法是用未标记的一抗和标记有辣根过氧化物酶(HRP)的二级试剂,经过简单孵育后,进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合,在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时,注意不要发生交叉污染,每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合,而
用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测的实验步骤
(1)将盖玻片、载玻片或培养板置于水平面上;如为1h或1h以下的短程孵育,则勿需湿孵,可将盖玻片或载玻片直接放置在实验台上。多个盖玻片则需置于Parafilm膜上,因为Parafilm膜有弹性,能够防止抗体溢出盖玻片边缘,也便于镊子操作。但如果圆形盖玻片数量过多,最好将其置于细胞生长与固定的2
辣根过氧化物酶标记的试剂
底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产
果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测
(1)样品洗毕后(见前),悬于含1%正常羊IgG的中。在1.5ml锥形管中胚胎或其他样品所占体积应少于50txl,或在5mlap-top管中应少于200/A。摇动孵育1h。 (2)用洗2次。 (3)加一抗:用含蛋白质的溶液,如含羊IgG的制备不同稀释度的抗体。单克隆抗体最好来自杂交瘤细胞培养
辣根过氧化物酶标记试剂的使用
实验概要本实验介绍了辣根过氧化物酶标记试剂对三种底物的使用方法。辣根过氧化物酶标记试剂底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑(AEC)等。实验原理1. DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属
辣根过氧化物酶标记试剂对果蝇类标本的染色检测
实验概要本实验介绍了果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测操作流程。实验原理果蝇类标本被固定及透化处理后,可加入抗体。如同其他免疫组化技术一样可以直接用标记的一抗,或者通过标记的二级试剂(能与一抗特异性结合)进行检测。一般而言,直接标记一抗产生的信号更为清晰,背景较低。不足之处在于如检测多种抗原
用标记获救法进行基因定位
标记获救法这是一种结合物理图谱制作和遗传学分析的基因定位方法,它适用于病毒等基因组较小的生物。以大肠杆菌噬菌体ΦX174为例,把野生型噬菌体的双链复制型DNA分子用限制性内切酶HindⅡ切为13个片段,把每种片段和突变型 amg的DNA单链在使DNA分子变性并复性的条件下混合保温,然后用各个样品分别
辣根过氧化物酶(HRP)标记试剂盒的应用
活化的过氧化物酶是辣根过氧化物酶(HRP),其天然碳水化合物(糖)已被高碘酸盐轻度氧化以产生胺反应性醛基。 活性过氧化物酶的这些羰基自发地、有效地与抗体或其它蛋白质上的伯胺交联。该方法比其它胺反应性化学试剂,如戊二醛偶联更有效,戊二醛偶联常常导致聚合反应和更高程度的偶联失活。 预活化的酶消除
辣根过氧化物酶标记试剂对果蝇类标本的染...
实验概要本实验介绍了果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测操作流程。实验原理果蝇类标本被固定及透化处理后,可加入抗体。如同其他免疫组化技术一样可以直接用标记的一抗,或者通过标记的二级试剂(能与一抗特异性结合)进行检测。一般而言,直接标记一抗产生的信号更为清晰,背景较低。不足之处在于如检测多种抗原
间接ELISA中试剂的配制及反应流程
实验概要间接ELISA是一种很实用而常用的免疫分析方法,本文将对反应中所用到的试剂的配制方法和反应的流程进行阐述。主要试剂1. 包被缓冲液:(0.05 mol/L,pH 9.6的碳酸盐缓冲液) Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 蒸馏水 1000ml4℃保存,一周内用完。2.
间接ELISA中试剂的配制及反应流程
实验概要间接ELISA是一种很实用而常用的免疫分析方法,本文将对反应中所用到的试剂的配制方法和反应的流程进行阐述。主要试剂1. 包被缓冲液:(0.05 mol/L,pH 9.6的碳酸盐缓冲液) Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 蒸馏水 1000ml4℃保存,一周内用完。2.
酶标记抗体试剂及器材的介绍
(1)0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS):取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml,NaCl1.8克,加蒸馏水至200ml。 (2)1.25%戊二醛液:取25%戊二醛50μl与PH6.8的PBS1ml混合。 (3)1M PH9.5碳酸盐缓冲液:取1M
检测elisa试剂盒组成技术原理与间接法
组成结构 1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗
保存标本ELISA试剂盒知多少
ELISA试剂盒标本保存,在ELISA试剂盒试验中是非常重要的,常有ELISA操作员反映在标本保存时呈现溶血、凝聚不全、受细菌污染等现象发作,我公司技术员特针对相关常见问题做出总结,下面我们就来看看今天的内容:搞定ELISA试剂盒办法我有好方法!一、标本保存不当在冰箱中保存过久的标本,血清中IgG可
间接炭凝反应原理、材料试剂及操作方法
一、原理 间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上,形成炭粉抗体复合物,当炭血清与相应的抗原相遇时,二者发生特异性结合,形成肉眼可见的炭微粒凝集块。 目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。 二、材料与试剂 1、炭粉 炭粉
ELISA试剂盒标本保存你知道多少?
ELISA试剂盒标本保存,在ELISA试剂盒实验中是非常重要的,常有ELISA操作员反映在标本保存时出现溶血、凝集不全、受细菌污染等现象发生,我公司技术员特针对相关常见问题做出总结,下面我们就来看看今天的内容:搞定ELISA试剂盒方法我有妙招!一、标本保存不当在冰箱中保存过久的标本,血清中IgG可聚
非同位素标记探针酶法检测实验——辣根过氧化物酶法检测
实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片(“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步)。2. 由1×SSC中取出玻片,尽可能吸去残留玻片上的缓冲液,但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻
放射免疫分析直接标记法与间接标记法的说法正确的是
正确答案:A解析:采用放射性碘制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。因此,凡蛋白质、肽类等化合物在结构上含有上述基团,均可用[SB125.gif]I直接标记。而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子则必须在分子结构上连接相应基团才能
用APGC/MS/MS分析油藏中的石油生物标记物进行油...(三)
图5显示了来自科特迪瓦的混合石油的甾烷和藿烷GC-MS SIR数据。叠置的油藏所含的石油源自在海相条件下沉积的烃源岩,但也受到了来自陆相有机质的显著影响。基于这些数据的生物标记物检测首先为石油的陆相来源提供了解释,因为石油所含有的大量标记物表明母质烃源岩处于河湖三角洲沉积环境。这些标记物包括齐墩
用APGC/MS/MS分析油藏中的石油生物标记物进行油...(一)
用APGC/MS/MS分析油藏中的石油生物标记物进行油源、油龄、成熟度和蚀变等的表征Peter Hancock,1Jody Dunstan,1Keith Hall,2Gareth Harriman3 1沃特世公司(英国曼彻斯特) 2Hall Analytical Laboratories Ltd.,
用APGC/MS/MS分析油藏中的石油生物标记物进行油...(二)
结果与讨论 采用APGC的电离与大气压化学电离(APCI)类似,因为二者均可以生成分子离子。APGC是一种“软”电离技术,生成的碎片较少。强分子离子峰的存在为MS/MS分析提供了理想的条件。图1显示了海相原油中C30五环三萜烷的APGC质谱图与EI质谱图的对比结果。在EI模式下可以得到大量的低质量数
蛋白质用什么试剂检测
蛋白质用双缩脲试剂检测。双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶
人白介素5(IL5)ELISA试剂盒操作步骤
规格:96T/48T代测服务,全程Elisa实验技术指导,免费代做实验。特点:灵敏性高、特异性强、重复性好、实验周期短、生物活性强、检测范围广等。适用范围广:血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊
用COD试剂检测,做好后浑浊影响检测
这种情况通常是氯离子含量过高造成的浑浊,一般出现在冷却后。可以把试剂再摇匀重新加热2分钟,不要水冷。检测结果还是不行的,建议对水样稀释后重做试验。
大鼠硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒操作步骤
大鼠硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒免费代测 规格:96T/48T代测服务,全程Elisa实验技术指导,免费代做实验。特点:灵敏性高、特异性强、重复性好、实验周期短、生物活性强、检测范围广等。适用范围广:血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本可检测动物类型丰富:人、猴、
荧光素标记试剂与酶标试剂
(1)酶标试剂:酶标抗体仅需适当底物和普通光学显微镜即可高度敏感地检出抗原。由于信号是通过吸收光的差异,而非发射光来检测,底物的不溶性显色产物分布在酶所在位置的周围区域,因此这种检测方法尚不能达到荧光技术的分辨率。 酶反应后出现沉淀,在酶所处位置周围产生不溶性显色产物,通过底物的显色来检出
分离光合色素用的试剂及原理
分离光合色素的试剂:用层析液分离。用有机溶剂无水乙醇,或95%乙醇溶液,还可以用乙醚,丙酮代替。分离光合色素的原理:不同的色素在有机物中溶解度不同,因此移动速率不一样。溶解度高的光合色素随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的光合色素在滤纸上扩散得慢。这样,最终不同的光合色素会在扩散过程中分离开来。
大鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒操作步骤
规格:96T/48T代测服务,全程Elisa实验技术指导,免费代做实验。特点:灵敏性高、特异性强、重复性好、实验周期短、生物活性强、检测范围广等。适用范围广:血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊