辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序
1.组织切片脱蜡处理等同前; 2.流水冲洗5分钟,3%H2O2孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶,避免假阳性); 3.漂洗3次,每次5分钟; 4.1%牛血清白蛋白孵育,室温20分钟,移去多余液体; 5.加入稀释的辣根过氧化物酶—凝集素,置湿盒内孵育。室温1.5小时; 6.漂洗3次.每次5分钟; 7.呈色 DAB液(配制:DAB 5mg,pH 7.6 Tris—HCl 10ml,3%H2O2 40ul)室温暗处10—15分钟; 8.蒸馏水洗5分钟,流水短暂冲洗后,常规乙醇脱水,二甲苯透明,封片; 9.光镜观察?阳性反应部位呈棕褐色。 10.注意事项 (1)为防止染色过程中切片脱落,载玻片可用铬矾/明胶或赖氨酸等黏片剂处理; (2)脱水时与普通石蜡切片不同,70%乙醇时间不宜太长,以免阳性反应褪色; (3)辣根过氧化物酶—凝集素的最佳工作浓度亦需经预实验确定; ......阅读全文
辣根过氧化物酶标记凝聚素的组织化学染色程序
1.组织切片脱蜡处理等同前; 2.流水冲洗5分钟,3%H2O2孵育10分钟(阻断内源性过氧化物酶,避免假阳性); 3.漂洗3次,每次5分钟; 4.1%牛血清白蛋白孵育,室温20分钟,移去多余液体; 5.加入稀释的辣根过氧化物酶—凝集素,置湿盒内孵育。室温1.5小时; 6.漂洗3次
果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测
(1)样品洗毕后(见前),悬于含1%正常羊IgG的中。在1.5ml锥形管中胚胎或其他样品所占体积应少于50txl,或在5mlap-top管中应少于200/A。摇动孵育1h。 (2)用洗2次。 (3)加一抗:用含蛋白质的溶液,如含羊IgG的制备不同稀释度的抗体。单克隆抗体最好来自杂交瘤细胞培养
染色质凝聚的概念
中文名称染色质凝聚英文名称chromatin condensation;chromatin agglutination定 义染色质凝缩进一步形成染色体的过程。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
辣根过氧化物酶标记试剂对果蝇类标本的染色检测
实验概要本实验介绍了果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测操作流程。实验原理果蝇类标本被固定及透化处理后,可加入抗体。如同其他免疫组化技术一样可以直接用标记的一抗,或者通过标记的二级试剂(能与一抗特异性结合)进行检测。一般而言,直接标记一抗产生的信号更为清晰,背景较低。不足之处在于如检测多种抗原
凝聚染色质的定义
中文名称凝聚染色质英文名称condensed chromatin定 义处于凝缩状态的染色质。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
凝聚染色质的概念
中文名称凝聚染色质英文名称condensed chromatin定 义处于凝缩状态的染色质。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
染色体超前凝聚的概念
中文名称染色体超前凝聚英文名称prematurely chromosome condensed;PCC定 义通过有丝分裂中期细胞与间期细胞融合,融合细胞中G1、S或G2的细胞染色体在M期细胞有丝分裂因子影响下会提前发生凝聚的现象。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞周期与细胞分裂(二级学科)
亲和组织化学染色方法之凝集素法
①直接法:将标志物直接结合在凝集素上,使其与组织细胞相应的糖蛋白或糖脂相结合; ②间接法:先将凝集素与组织细胞膜糖基结合,然后再用标记的抗凝集素抗体(即用凝集素免疫动物制备抗凝集素抗体)与结合在细胞上的凝集素反应。间接法还有糖-凝集素-糖法,该方法是利用生物细胞膜的特殊糖基与凝集素结合后,再用
超前凝聚染色体的概念
中文名称超前凝聚染色体英文名称prematurely condensed chromosome;PCC定 义有丝分裂中期与间期细胞融合后,间期核内诱导产生的浓缩染色体。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
染色质凝聚的基本概念
中文名称染色质凝聚英文名称chromatin condensation;chromatin agglutination定 义染色质凝缩进一步形成染色体的过程。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)
辣根过氧化物酶标记的试剂
底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产
免疫组织化学染色
实验概要本说明适用于没有全自动染色机或 capillary gap system(如 Shandon Sequenza)等的实验室。可用移液器人工加试剂,也适用于全自动或半自动系统。培养箱应配备有加湿器避免组织变干。变干发生在任何阶段最后都会导致非特异性染色及高背景染色。带密封盖的浅塑料盒,底部铺上
免疫组织化学染色
实验概要本说明适用于没有全自动染色机或 capillary gap system(如 Shandon Sequenza)等的实验室。可用移液器人工加试剂,也适用于全自动或半自动系统。培养箱应配备有加湿器避免组织变干。变干发生在任何阶段最后都会导致非特异性染色及高背景染色。带密封盖的浅塑料盒,底部铺上
辣根过氧化物酶标记试剂的使用
实验概要本实验介绍了辣根过氧化物酶标记试剂对三种底物的使用方法。辣根过氧化物酶标记试剂底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑(AEC)等。实验原理1. DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属
DNA荧光组织化学染色的方法
一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色,再用FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫荧光组织
免疫组织化学染色方法
实验概要免疫组织化学染色法是指在抗体上结合荧光或可呈色的化学物质,利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应,检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在,此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质,也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测
免疫组织化学染色方法
实验原理免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗
免疫组织化学染色方法
实验原理免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗
免疫金组织化学染色实验
实验方法原理 免疫金染色(immunogold staining,IGS)法是由 Geoghegan 等(1978)首次应用金标探针检测 B 淋巴细胞表面抗原,将胶体金颗粒(大于 20 nm)标记在第二抗体或 SPA 分子上,制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后,用金标二抗或金标
免疫组织化学常用的检测方法
免疫组织化学(immunohistochemistry)技术的基本原理是抗原-抗体的反应。利用带有标记物(如荧光素或辣根过氧化物酶等)的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起
标记染色体的定义
标记染色体是在肿瘤细胞内常见到结构异常的染色体,如果一种异常的染色体较多地出现在某种肿瘤的细胞内,就称为标记染色体,可分为特异性和非特异性标记染色体两种。如慢性粒细胞性白血病中的费城染色体即PH小体。
标记抗原捕捉ELISA法的主要程序
① 用抗u链(抗IgM重链)抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。
什么是特殊染色及酶组织化学染色诊断
特殊染色是为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等,需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括:胶原纤维染色(Masson等)、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色(磷钨酸苏木素)、脂肪染色(苏丹III)、糖原染色(PAS)、粘液染色(PAS)等
特殊染色及酶组织化学染色液怎么用
特殊染色及酶组织化学染色液是利用冻结或固定的切片,在一定的条件下(具有酶的底物等)全酶进行催化作用,产生一种可见产物,沉淀在酶所在的部位,最终通过显微镜对酶的活性进行定位或定量研究。特殊染色是为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等,需要分别选用相应的显示这些成
非标记抗体免疫酶组织化学实验
实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」,将它们连接起来,再将酶结合在抗酶抗体上,经显色显示抗原的定位。其基本流程为:抗原+特异性抗体 → 第二抗体(桥抗)→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2(显色)。因为桥抗
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1
目前动物用单抗,在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用,大多以诊断试剂(盒)的形式提供,其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶(HRP)标记 辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...2
单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)(3)移入透析袋中,在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中,4℃透析过夜,更换三次缓冲液,注意避光。 (4)吸取上述醛化好的HRP溶液3ml,加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml,室温轻搅2-3小时,避光;加入5m
免疫组化发展及原理
1941年Coons首先用荧光素标记抗体—检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。 60年代 Akanke建立酶标抗体技术—铁蛋白标记Ab技术 70年代 Stemberger改良上述技术,建立辣根过氧化物酶—抗体过氧化物酶(PAP)技术,使免疫细胞化学得到广泛应用。 80年代 Hsu等建立了抗生
关于细胞组织化学染色的简介
免疫细胞组织化学染色是利用已知的抗体与细胞抗原特异性相结合的特性,通过化学反应使标记在抗体上的显示剂显示一定的颜色,并借助显微镜、荧光显微镜或电镜进行观察,以达到对组织、细胞结构中化学成分进行定量、定位分析的目的。
细菌染色的基本程序中革兰染色的用途
先干燥就是为了染色时标本不易脱落。固定不仅能杀死细菌,改变细菌对染料的通透性,还能使细菌吸附在玻片上,保持原有的形态结构。媒染其作用是增强染料与细菌的亲和力,更好地加强染料与细胞的结合。常用的媒染剂是碘液。脱色帮助染料从被染色的细胞中脱色。利用细菌对染料脱色的难易程度不同,而将细菌加以区分。革兰阳性