RTPCR引物的选择
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。 Oligo dT 适用于具有PolyA尾巴的RNA。（原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。）由于Oligo dT要结合到PolyA 尾巴上，所以对RNA样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长cDNA合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补的引物，适用于目的序列已知的情况。天为时 性引物 代公司的SuperScript One-Step System特别适合于与基因特异性 引物连用。PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。原因建议引物引物特异性差重新设计引物，改变引物的位置和长度，增强其特异性或使用巢式PCR引物浓度过高适当减少引物浓度Mg2+浓度Mg2......阅读全文
RTPCR引物的选择
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。 Oligo dT
RTPCR引物的选择
对靶序列中潜在的引物位点进行分析， 这些位点应该不会形成同源多聚体结构，也没有明显的形成二级结构的趋势，不会自身互补，与基因组中的其他序列无显著的同源性。 （1）依据寡核苷酸引物与其靶序列形成杂合分子的熔解度的计算中提供的公式计算各引物的熔解温度。 （2）选择一对匹配完好的正向和反向引
RTPCR引物的选择
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。 Oligo dT 适用于具有PolyA尾巴的RNA。（原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。）由
RTPCR技术简介和RTPCR引物的选择
RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD
RTPCR引物设计原则和方法
在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA,在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence，出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此窗
RTPCR引物设计原则和方法
在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此
RTPCR的引物设计的基本原则
1.上下游引物要保守： 为了能够扩增出所需要的保守片段，必须对保守的100-200片段进行pcr扩增。所以引物的选取也要非常的保守，最好不要有不同的碱基，若不得不有时，也必须保证引物的3’端至少有4个碱基是完全保守才可。 在设计保守引物时，要在发表序列上分别找保守一致的区域，即在发表序
相对－RTPCR:－引物与竞争子比例的决定实验
试剂、试剂盒 双蒸水 RT-PCR 缓冲液 TaqDNA 聚合酶 cDNA dNTP 混合物 基因特异的正向引物
相对－RTPCR:－引物与竞争子比例的决定实验
这个方案的目的是要选择一个 18SrRNA 引物和竞争子之间的恰当比例，可以模仿目的转录本的表达量。对于大多数转录本来说，一般比例为 3:7。对于模板比较稀少的，采用2:8 或 1:9 可能更恰当。准备的 PCR 反应混合物应比 5 个反应多 10%。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：
相对－RTPCR:－引物与竞争子比例的决定实验
试剂、试剂盒 双蒸水RT-PCR 缓冲液TaqDNA 聚合酶cDNAdNTP 混合物基因特异的正向引物基因特异的反向引物dCTP仪器、耗材 PCR 仪 PCR 管Quantum RNA Universal 18S standards实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水1
影响RTPCR的因素和反转录引物的选择
科研党们整天都在为提取RNA而烦恼，费尽九牛二虎之力，终于！RNA质量完美！可是。。。qPCR/PCR结果依然不好，咋整?！在做qPCR/PCR实验之前，必不可少的一步就是反转录。别小看它哦，它在整个实验流程中发挥着重要作用！反转录（Reverse transcription ）是以RNA为模板合成
影响RTPCR的因素和反转录引物的选择
在做qPCR/PCR实验之前，必不可少的一步就是反转录。别小看它哦，它在整个实验流程中发挥着重要作用！反转录（Reverse transcription ）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。反转录PCR（Reverse Transcription-Polymerase C
RTPCR－的－探针－和－引物－是什么－它们的作用是什么
引物是用来扩增片段用的,而探针,探针上面有荧光基团,完整时检测不到荧光,与两引物之间的目的基因结合,PCR扩增过程中,探针被切断,可以检测到荧光.扩增得到的目的基因越多,那么探针被切断的也越多,检测到的荧光也越多,所以常用来做定量PCR.
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值？用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间（吸光度太高或太低会有较大的误差）。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其吸光度
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值？ 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间（吸光度太高或太低会有较大的误差）。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、长度：15—30bp，其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。2、G十C含量：应在40%一60%之间，PCR扩增中的复性温度一般较Tm值低等于引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时，
半定量RTPCR－（SemiQuantitative－RTPCR－）
RT-PCR AnalysisSolutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solutio
RTPCR－PROTOCOL
RT-PCR PROTOCOL材料与方法………………………………………………………… 1．材料 ………………………………………………………1.1 供试用组织(细胞)…………………………………1.2 主要仪器设备………………………………………1.3 主要试剂……………………………………………1.
Standard－RTPCR
RT-PCR or reverse transcription PCR refers to PCR that uses product of an RT reaction as template. In effect, the PCR amplifies cDNA fragments. In one
RTPCR之我见
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因表达的定义
RTPCR步骤
总RNA提取1. 取200mg组织，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃ 离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，3
快速了解反转录引物随机引物
随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。 1.特异性引物一般在增低丰度目的基因才选择使用，用得比较少。一般都推荐用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物。由于rna的二级结构破坏不完全，导致特异性
什么是上游引物和下游引物
虽然这个问题很简单，但我怎么发觉挺难回答的......上游引物就是和要扩增基因片断上游序列结合的引物（引物就是单链寡聚核苷酸，基因扩增需要从引物开始），同理，下游引物指与目的基因片断下游序列结合者。具体示意如下：（上下两条长线代表DNA模板）5'-----------------------
设计引物遵循原则、引物保存和各种PCR的引物设计
一 设计引物应遵循以下原则1 、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。2 、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上
RTPCR技术的进行过程及方法
RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在反转录RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在反转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法
PCR引物
PCR Primer Design and Reaction Optimization (Molecular Biology Techniques Manual) PCR Primer Design (Newman Lab) PCR Primer Design (Eppendorf)Detail