毕赤酵母表达（pichiapastorisexpression）实验手册（4）
三．主要试验环节的操作3.1 酵母菌株的分离纯化接种GS115于5ml YPD液体培养基，30℃，200rpm振荡过夜，涂布 YPD平板，30℃培养48 小时，用 YNB基本培养基和含His的补充培养基作点种分离纯化，挑选在补充培养基生上生长而在基本培养基上不生长的单菌落划YPD平板，4℃保存。3.2 pPICZαA原核宿主菌TOP10F’的活化培养TOP10F’做为菌种保存在－70 ℃条件下，在进行扩大培养抽提质粒之前，先要进行活化培养。接种TOP10F’于5ml LLB（加入25ug / ml Zeocin）中，37℃，200 rpm ，培养16～18小时。3.3毕赤酵母表达的试验方法3.3.1 线状质粒DNA的脱磷酸化处理为了防止载体质粒DNA的自身环化，用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）处理酶切后的质粒DNA，具体操作如下：⑴ 建立反应体系：线性化的质粒 35ul10x CIP buffer 4ulCIP 1ulddH2O 5......阅读全文
毕赤酵母PEG1000转化方法
实验概要本文介绍了毕赤酵母PEG1000转化方法。据称PEG比LiCl 方法好，但不如去壁细胞及电转化法，但对没有电转装置的人来说，更方便，效率为102-103/ugDNA。主要试剂Buffer A：1M山梨醇，10mM bicine(N－二(羟乙基)甘氨酸)pH8.35，3%(v/v)乙二醇Buf
毕赤酵母遗传霉素抗性转化子的筛选
实验概要本实验介绍了毕赤酵母遗传霉素抗性转化子的3种筛选方法。实验步骤1. (去壁细胞)方法：从含HIS 转化子的平板开始 1) 用灭菌刮片将含有HIS 转化子的顶层琼脂最上层刮下，放入无菌的50ml 离心管中。 2) 加入10-20ml灭菌水，量应为琼脂的两倍，剧烈振荡1-2min。
简述甲醇营养型酵母表达系统
甲醇酵母表达系统是应用最广泛的酵母表达系统。甲醇酵母主要有汉森酵母属(Hansenula)，毕赤酵母属(Pichia)，球拟酵母属(Torulopsis)等，并以毕赤酵母属(Pichia)应用最多。 甲醇酵母的表达载体为整合型质粒，载体中含有与酵母染色体中同源的序列，因而比较容易整合入酵母染色
Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法
模板的处理：1.平板上的菌落长到肉眼可见时（约12小时）；2.将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好，并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物，或者一条使用载体上的引物，一条使用基因的特异性引物（这样做可以鉴定非定向克隆的方向）；3.用半根灭菌的牙签（节约，而且好用）挑取菌落，在PCR
单宁酶的生产方式
单宁酶是一种诱导酶，可由微生物在单宁酸存在的条件下诱导产生的，对单宁酶发酵生产研究的重点多集中在曲霉和青霉上，常通过诱变育种选育和改良生产菌株以及通过优化发酵条件等途径来提高发酵产酶活力。如Libuchi等以Asp oryzae为出发菌株，以单宁酶为诱导物，探讨了菌株产单宁酶的最适培养条件。Aoki
概述鞣酸酶的生产方式
单宁酶是一种诱导酶，可由微生物在单宁酸存在的条件下诱导产生的，对单宁酶发酵生产研究的重点多集中在曲霉和青霉上，常通过诱变育种选育和改良生产菌株以及通过优化发酵条件等途径来提高发酵产酶活力。如Libuchi等以Asp oryzae为出发菌株，以单宁酶为诱导物，探讨了菌株产单宁酶的最适培养条件。Ao
菌种中英文对照（全部）（八）
Neisseria subflava 微黄奈瑟球菌 Nocardia spp 奴卡菌属某些种 Ochrobactrum anthropi 人苍白杆菌 Oerskovia spp 厄氏菌属某些种 Oerskovia xanthineolytica 溶黄嘌呤厄菌 Oligella ur
基因工程角蛋白酶的研究
以往对角蛋白酶的研究工作主要集中于菌种筛选、酶的提取纯化和活力测定等基础工作，对酶结构和基因表达的研究极少。20世纪90年代，随着分子生物学技术的发展，国外的一些学者开始进行角蛋白酶基因工程表达和分子结构等方面的研究。Lin X等采用随机引物PCR的方法获得了编码地衣芽孢杆菌PWD-1菌株分泌的角蛋
基因工程角蛋白酶的研究
以往对角蛋白酶的研究工作主要集中于菌种筛选、酶的提取纯化和活力测定等基础工作，对酶结构和基因表达的研究极少。20世纪90年代，随着分子生物学技术的发展，国外的一些学者开始进行角蛋白酶基因工程表达和分子结构等方面的研究。Lin X等采用随机引物PCR的方法获得了编码地衣芽孢杆菌PWD-1菌株分泌的角蛋
单宁酶的生产方式
单宁酶是一种诱导酶，可由微生物在单宁酸存在的条件下诱导产生的，对单宁酶发酵生产研究的重点多集中在曲霉和青霉上，常通过诱变育种选育和改良生产菌株以及通过优化发酵条件等途径来提高发酵产酶活力。如Libuchi等以Asp oryzae为出发菌株，以单宁酶为诱导物，探讨了菌株产单宁酶的最适培养条件。Aoki
毕赤酵母活化不出来是什么原因
活化不出来具体是什么意思，长的不好，还是根本就不长？一般情况下，活化的培养基通常是YPD，筛选或诱导表达时才用BMG的？另外你的菌种是野生菌还是工程菌，BMG里有否添加抗生素？如果有抗生素的话，很可能是质粒丢失了。那还要看是什么保存方法啊？如果你指的是短期保藏，两者都可以，如果是长期保藏，最好是不要
毕赤酵母必须要用YPD培养基活化
因为毕赤酵母刚从超低温冰箱或者冷藏柜取出后，活性很低，如果保存时间过长甚至可能已经死亡，此时如果不经过活化就直接用会造成适应期长，生长缓慢甚至没有生长现象，进而影响实验的进程和准确性。YPD 或YEPD作为酵母菌常用的培养基，可以使处在低温的毕赤酵母生长繁殖，并且恢复保持到较高的活性。在日常实验过程
关于甲醇酵母表达系统的基本介绍
甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母，主要有H.Polymorpha、Candida Bodinii、Pichia Pastoris三种，其中Pichia Pastoris作为基因表达系统使用得最多、最广泛。与以往的基因表达系统相比，
毕赤酵母发酵过程中产生热量峰值多少
毕赤酵母发酵液湿菌重达400g/L，现用板框进行预处理，直接用硅藻土做助滤剂，可是发现板框压力上升快，容易从板之间喷出。考虑在预处理加部分絮凝剂，请问一般加什么样的絮凝剂，谢谢现在一般毕赤酵母发酵液预处理的工艺是咋样的，考虑过用蝶式离心机，但渣水分比较高
常用的酵母表达系统的介绍
酵母表达系统作为一种后起的外源蛋白表达系统，由于兼具原核以及真核表达系统的优点，正在基因工程领域中得到日益广泛的应用，应用此系统可高水平表达蛋白，且具有翻译后修饰功能，故被认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。 常用的酵母表达系统： 一、酿酒酵母(Saccharomycescerevisi
毕赤酵母必须要用YPD培养基活化？为什么
因为毕赤酵母刚从超低温冰箱或者冷藏柜取出后，活性很低，如果保存时间过长甚至可能已经死亡，此时如果不经过活化就直接用会造成适应期长，生长缓慢甚至没有生长现象，进而影响实验的进程和准确性。YPD或YEPD作为酵母菌常用的培养基，可以使处在低温的毕赤酵母生长繁殖，并且恢复保持到较高的活性。在日常实验过程中
原位双膜法快速检测Pichia酵母系统阳性表达株
1） 将醋酸纤维素薄膜置于MD/His -平板的His + 转化子菌落上,用涂布棒轻压使醋酸纤维素薄膜完全湿润并赶尽气泡, 使所有菌落转移到醋酸纤维素薄膜上.2) 在BMMY板上置一同样大小的硝酸纤维素薄膜, 并将醋酸纤维素薄膜菌落向上置于硝酸纤维素薄膜上. 30 ℃孵育18 h 后, 将醋酸纤维素
甲醇酵母表达载体及其元件2
2、选择标记选择标记一般为对应于营养缺陷型受体的野生型基因，常用HIs4。由于P．Pasotris不利用蔗糖，所以也可用啤酒酵母的蔗糖酶基因suC2作为标记。AMP：氨苄抗性基因，可在大肠 杆菌中筛选。G418和Zeocinr(Invitrogen，sandiego，CA)也是筛选标记，使得到高
翻译全局控制改善外源蛋白质的折叠效率
近日，华南理工大学林影教授和暨南大学张弓教授的团队在Biotechnology for Biofuels杂志（生物工程类一区）上发表文章，使用翻译全局控制方法，改善外源蛋白质在毕赤酵母中表达的折叠效率，有效提高活性蛋白质产量。据悉，这是翻译组调控在真核生物细胞工厂底盘细胞中的首次成功应用，极大地
简述甲醇酵母表达系统的应用前景
经过近几年的发展完善，甲醇酵母表达系统已日趋成熟，应用也日趋广泛。国内已有多篇在甲醇酵母中生产外源蛋白质成功的报道。美国Invitrogen公司也已开发出多种新型的甲醇酵母表达系统试剂盒，如Multi-copy Pichia Expression Kit、Easyselect Pichia Ex
卢冠达博士开发按需生产药物的便携设备
对于世界偏远地区或发展中国家的医生以及战场上的医务人员来说，要快速获取治疗患者所需要的药物，可能是具有挑战性的。 生物制剂药物被用于各种各样的治疗，包括糖尿病和癌症的疫苗与治疗，通常是在大型、集中的发酵工厂内生产的。这意味着，它们必须被运送到治疗地点，这可能是昂贵、耗时的，对于在供应链较差的地
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（4）
15、菌体密度：菌体是在BMMY中培养的，可以不用BMMY做对照，在600nm处测OD值，培养基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麦芽浸提液培养酵母（不换液，补料），生长阶段结束后，密度可达到10-12，诱导培养结束后，密度可达到18左右。如果用1体积的BMGY，在生长阶段结束后，换液时，加入1/
微生物果胶酶基因
近10年来，已从不同属的真菌、细菌和放线菌中克隆和测序的果胶酶基因至少有70个(表1)，其中来自真菌的超过40个，且大多是多聚半乳糖醛酸酶基因。从中克隆到果胶酶基因的真菌主要有曲霉菌、炭疽菌、镰刀菌和灰霉菌等。例如目前已从黑曲霉(Aspergillus niger)中克隆到6个多聚半乳糖醛酸酶基因，
部分细菌名称对照表（三）
hotobacterium damsela 美人鱼发光杆菌 Pichia carsonii 卡氏毕赤酵母 Pichia etchellsii 埃切毕赤酵母 Pichia farinosa 粉状毕赤酵
真核细胞表达系统1
自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就 。随着人类基因组计划的完成，越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明。利用表达系统在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基
甲醇酵母基因表达系统
1 甲醇酵母表达系统的特点 1.1 宿主 七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白（SCP），有很好的发酵基础，菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径
Atlas™cDNA表达距阵(Expression－Array)
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array)同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析检测关键基因在细胞关键功能中的角色只需简单的杂交步骤就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开
甲醇酵母系统表达的影响因素1
酵母菌是单细胞真核生物，具有生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等特点，被认为是表达外源蛋白的合适宿主。几种工业酵母尤其是巴氏毕赤酵母(pichia pastoris, Pp)，因具有旺盛的生长力以及其它一些独特的性质，已发展成为较成熟的蛋白生产的表达系统。
关于酿酒酵母的应用
酵母菌的分类一直充满着挑战和争议，在分子生物学技术应用于物种分类之前，经典分类学方法主要从形态、繁殖和生理特征来进行酵母的分类，然而这些指标具有极大的局限性，酵母菌的特征可能随着培养基成分和生长阶段的改变而发生变化。截止到1998年，已描述的酵母菌达到95属，723种，目前荷兰微生物菌种保藏中心
欧盟批准3种饲料添加剂
据欧盟网站消息，近日欧盟委员会发布（EU）2017/2274、（EU） 2017/2275、（EU）2017/2276号条例，批准3种饲料添加剂。 欧盟（EU）2017/2274条例，批准毕赤酵母Komagataella pastoris （DSM 23036）产生的6-肌醇六磷酸酶，作为鱼饲