Atlas™cDNA表达距阵(ExpressionArray)
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array)同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析检测关键基因在细胞关键功能中的角色只需简单的杂交步骤就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开展。但两年前(1997)，随着Clontech公司推出AtlasTM cDNA矩阵，情况大为改观。现在，cDNA矩阵已广泛应用于生命科学的诸多领域如功能基因组研究、新药开发和分子诊断等等。Atlas?是世界上第一个商品化的高通量地分析基因差异表达的产品。它精心挑选生命现象中扮演关键角色的多个基因，并按基因功能分类点于一张膜上。为提高信噪比，AtlasTM采取许多巧妙措施，如：⑴．每个基因选取其特异性的cDNA片段，大小在200-600bp之间(最适于杂交的大小)；⑵．不含重复序列、同源序列和poly-A区；⑶．经过扩增后，以管家基因进......阅读全文
Atlas™cDNA表达距阵(Expression－Array)
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array)同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析检测关键基因在细胞关键功能中的角色只需简单的杂交步骤就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开
Atlas™cDNA表达距阵(Expression－Array)2
区分关系相近肿瘤的诊断工具分析在肿瘤发生中起关键作用的基因的表达588种与癌症相关的cDNA点阵于一带正电的尼龙膜上，另外还包括9个管家基因的质粒、噬菌体等阴性对照。cDNA按分子途径和家族分类置于不同板块，包括癌基因、抑癌基因、细胞周期相关基因和凋亡等。Atlas? Mouse cDNA Expr
Atlas#8482;cDNA表达距阵(Expression－Array)
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array)同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析检测关键基因在细胞关键功能中的角色只需简单的杂交步骤就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－3
Table 2 Modulation of microRNA expression by IFNα—4 and 24 h after stimulation ControlInterferon-alpha treated4 h24 h4 h24 haME-15HuH7CHFME-15HuH7CHFM
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－1
MicroRNA Expression Profiling by Bead Array Technology in Human Tumor Cell Lines Treated with Interferon-Alpha-2aMicroRNAs are positive and negative r
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－4
Bead-array-based microRNA detection technology, including the bio-statistic analysis, is currently not well established or widely used and we have app
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－2
Materials and MethodsCell Culture, Interferon Treatment, and RNA PrecipitationMelanoma cells (ME-15) were cultured in RPMI 1640 with L-Glutamine suppl
原核表达（prokaryotic－expression）条件优化
影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素[58]。由于Vector NTI suitor7.0软件模拟表达，可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难，所以本实验的工作主要
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）1
基因表达(gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。基因的表达主要涉及到两个过程：转录和翻译。 第一节影响外源基因表达的因素 利用基因工程技术高水平表达
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）2
在双链 DNA 分子中，只有一条链转录成 mRNA，这条链称为有意义链(sense strand)，该基因的另一条链则称反意义链(antisense strand)。在含有许多基因的 DNA 双链中，每个基因的有意义链并不是在同一条 DNA 链上。也就是说，一条链上既具有某些基因的有意义链，
SDSPAGE检测蛋白表达(protein－expression)
一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，PH6.8；电泳缓冲液，PH8.3；10%SDS溶液；10%过硫酸铵溶液；样品处理液；染色液；脱色液；电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪等；蛋白Mar
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）3
（3）原核生物的基因组基本上是单倍体，而真核基因组是二倍体。（4）如前所述，细菌多数基因按功能相关成串排列，组成操纵元的基因表达调控的单元，共同开启或关闭，转录出多顺反子(polycistron)的mRNA；真核生物则是一个结构基因转录生成一条mRNA，即mRNA是单顺反子(monocistron)
如何做原核表达（prokaryotic－expression）(二)
几个常用的启动子和诱导调控表达系统最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子，由 启动子Plac + 操纵基因lacO +结构基因组成。其转录受CAP正调控和lacI负调控。lacUV5突变能够在没有CAP的存在下更有效地起始转录，该启动子在转录水平上只受lacI 的调控，因而随后得到了更广泛采用。la
如何做原核表达（prokaryotic－expression）(一)
人们合成与生物相关的物质是从尿素开始的，1828年，德国化学家维勒人工合成了存在于生物体的这种有机物。在1960年我国科学家采用化学方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白质——胰岛素。随着内切酶的发现和基因工程技术的发展，人们发现用各种不同的载体在原核、真核系统中进行蛋白表达更为行之有效。而这其中大
自动化的微流控芯片系统在单细胞中检测MicroRNA的异质性3
结论· 我们在C1TM单细胞自动制备系统开发了一种简洁的实验方案，能以最少的手工操作，在不到24小时内，平行处理高达96个单细胞，对其miRNA表达谱进行分析。· C1 miRNA STA实验方案使用了Life Technologies为miRNA优化过的试剂。特别的，Megaplex™ RT及
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（2）
一．毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制1．1 各种母液的配制10*YNB （含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基） 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基（无硫酸铵）+100g硫酸铵，溶于1000ml水中，过滤除菌。500*B （0.02%生物素 Biotin） 4℃保存 保存期为1年。2
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（1）
大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、周期短、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（4）
三．主要试验环节的操作3.1 酵母菌株的分离纯化接种GS115于5ml YPD液体培养基，30℃，200rpm振荡过夜，涂布 YPD平板，30℃培养48 小时，用 YNB基本培养基和含His的补充培养基作点种分离纯化，挑选在补充培养基生上生长而在基本培养基上不生长的单菌落划YPD平板，4℃保存。3.
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（3）
液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）：yeast extract
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（5）
3.5 Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法3.5.1 模板的处理：1. 平板上的菌落长到肉眼可见时（约12小时）；2. 将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好，并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物，或者或者一条使用载体上的引物，一条使用基因的特异性引物（这样做可以鉴定非
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（6）
随着PCR技术的不断发展成熟（扩增长度、保证性、产量和特异性等），质粒构建过程的大多数细胞内的DNA复制将被PCR这一细胞外的DNA复制所代替，质粒构建效率将有质的飞跃。4.4密码子的偏好性的原则酵母菌对外源基因的表达也和外源基因密码子的选用有关。了解表达系统宿主在密码子使用上的偏爱性对从翻译水平分
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内
PCR－Array——基因表达分析疾病和信号通路的利器（二）
RT2 Profiler PCR Array操作流程 首先将RNA样本反转录成cDNA第一链，作为PCR模板；接着将cDNA模板与合适的即用型PCR预混液混合，等体积加入到已经固定好基因特异性引物的同一个孔板的每个孔中，然后即可运行real-time PCR循环程序。RT2 Profiler PCR
PCR－Array——基因表达分析疾病和信号通路的利器（一）
以前只要提到基因表达分析，人们就会想到荧光定量PCR；只要提到高通量基因表达分析，人们会首先想到基因芯片。虽然荧光定量PCR仪几乎每个实验室都有，但是做芯片就不一定每个实验室都具备这个条件了。那么只有一台荧光定量PCR仪是否也能进行高通量的基因表达谱分析呢？QIAGEN 推出的RT2 Profile
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和
PCR－Array——基因表达分析疾病和信号通路的利器（三）
RT2 PCR Profiler Arrays可用于生物学和医学研究的各个领域，包括：癌症研究、炎症和细胞因子分析、干细胞研究、神经生物学、信号转导通路研究、细胞黏附和细胞迁移、生物标记分子筛选和验证截止目前，QIAGEN 拥有ZL申请的PCR Array可以分析超过150条通路和特异的疾病类型。具
Detection－of－MicroRNA－Heterogeneity－in－Single－Cells－Using－an－Automated
Introduction MicroRNA (miRNAs) are short (18–24 nucleotides), non-coding RNAs that regulate gene expression by both disrupting messenger RNA (mRNA
用－cDNA－芯片分析人类基因表达实验
实验材料 母板试剂、试剂盒 细菌细胞中的标记LB 培养基氨苄青霉素乙醇Super 肉汤培养基 甘油96孔碱裂液T low E 缓冲液10 X PCR 缓冲液 20 X SSC琥拍酸酐仪器、耗材 96深孔板和V 形塑料细胞培养皿水平微量培养板离心96孔多位点复制针1 加仑储存袋多微孔的带层带孔的振荡器
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（四）
RT2ProfilerTM PCR芯片特点灵敏度 研究者总是希望能检测到表达量相当低的基因，有时候，研究者得到的起始总RNA量也很少，但仍希望能进行实时定量PCR检测。为了满足研究者的这些需要，Superarray严格检测了PCR芯片系统的灵敏度。例如，Superarray使用PCR芯片检测了一系列
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（三）
PCR 芯片实验体系 完整的PCR芯片实验体系包括RT2ProfilerTM PCR芯片，RT2 Real-TimeTM SYBR Green PCR反应体系和cDNA合成试剂盒。所有这些组分均为基于SYBR Green的实时定量PCR反应优化。精心设计的引物和优化的PCR反应体系一起，为