DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳（GFGE）
DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中，通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白，纯化细胞DNA，再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳，结合DNA解旋荧光测定（FADU）法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法： （1）蛋白酶K，SDS，低熔点琼脂糖。 （2）配制方法： 细胞缓冲液（A液）。0.25mol/L NaCl + 10mmol Na2HPO4 + 1mmol/L MgCl2，pH7.2. 细胞裂解液（B液）。9mol/L脲 + 10mmol/L NaOH + 2.5mmol/L环烷二胺四乙酸 + 0.1%SDS。 碱性变性液I（C液）。B液 + 0.2mol/NaOH，体积比为45：55. 碱性变性液I（D液）。B液 + 0.2mol/NaOH，体积比为40：60. 抗变性液（F液）。1ug/L溴化乙锭 + 13.3mmol/......阅读全文
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理置换型载体
PNAS：赵新生等揭示双链DNA中错配碱基自发翻转的规律
近日，北京大学生科院生物动态光学成像中心赵新生、高毅勤两个课题组通力合作，近日在《美国科学院院刊》PNAS上发表重要论文，利用新颖的单分子实验手段重新测算了双链DNA错配碱基自发反转的速率，并运用动力学模拟方法对其分子机理进行了深入研究。对于阐明酶对碱基进行修复的分子机理具有重要价值。 如果在
双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...3
3．单链模板的分离(1)沉淀M13：在上述M13培养物上清中，加入0.2倍体积的3.5mol/L醋酸铵/20%多聚乙二醇溶液，颠倒混匀数次，置冰浴30分钟。离心15-30分钟(11000g)可见白色噬菌体沉淀。小心除去上清液，可将试管倒置并吸去多余液体。(2)分离纯化模板：向沉淀中加入TE缓冲液10
Nature发文：揭秘PARP酶修复癌细胞断裂DNA双链的分子机制
近日，一项刊登在国际杂志Nature上的研究报告中，来自圣犹大儿童医院等机构的科学家们通过研究揭示了PARP酶对双链DNA进行断裂修复的结构，相关研究结果表明，PARP2能填补这一缺口并将两条断裂的DNA端连接在一起。此外，本文研究也深入阐明了PARP激活和催化循环背后的分子机制，这对于后期科学
双脱氧法DNA测序实验——α标记核苷酸进行热循环测序反应
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA测序缓冲液dATPDNA聚合酶仪器、耗材热心换反应装置离心机实验步骤1. 对应于毎个待测模板，分别以A、G、C、T 标记好4个微量离心管。2. 分别往标好A、G、C、T 的管子中，加A、G、C、T 测序混合液各3 μl。 3. 对于单链模板：在0.5 ml 微量
双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...2
3．制备电泳凝胶及电泳(1)制备胶模：取双块制胶玻板，先用泡沫海绵沾“洗洁净”液仔细擦洗，用水彻底淋洗，干燥后继用酒精清洗，晾干，再用硅烷剂(repel- silane)将玻板的—面擦一遍，蒸馏水淋洗，干燥 (注意：清洗时应戴一次性手套操作)。将其中一块玻板平置台上(硅烷处理过的—面朝上)，两侧各放
DNA序列测定技术（Sanger双脱氧链终止法与Maxam－Gilbert...3
３．DNA 聚合酶通常用于双脱氧法序列测定的有几种不同的酶，其中包括大肠杆菌DNA 聚合酶I的Klenow片段（Sanger等，1977），反转录酶（见文献，如Mieredorf和Prfeffer，1987）经过修饰消除了 3'→5'外节酶活性的T7噬菌体DNA 聚合酶（
DNA序列测定技术（Sanger双脱氧链终止法与Maxam－Gilbert...2
二、Maxam－Gilbert DNA 化学降解法与包括合成反应的链终止技术不同，Maxam-Gilbert法要对原DNA 进行化学降解。这一方法是在体外研究lac阻抑制与lac操纵基因相互作用时酝酿发展起来的。时至今日，可以探测DNA 构象的蛋白质－DNA 相到作用，仍然是Maxam- G
双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...1
[目的]掌握双脱氧链终止法测定DNA序列的原理与方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3’-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3’-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。本实验根据此原理，将待测DNA片段插入
DNA序列测定技术（Sanger双脱氧链终止法与Maxam－Gilbert...4
序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam－Gilbert DNA 化学降解法测序策略目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的
单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤
单细胞凝胶电泳（single-cell gel eiectrophoresis，SCGE）又称慧星试验（comet assay）是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来，经过不断的改进，已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法，广泛地应用
Nat－Commun：发现抗癌药物新机制，有助于开发靶向药物
一项发表于Nature Communications的新研究揭示了新一代癌症药物背后的机制，为更好的靶向治疗打开了大门。 PARP抑制剂是一种分子靶向肿瘤药物，用于治疗卵巢癌患者的BRCA1和BRCA2基因突变。 这些药物在乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌的晚期临床试验中显示出了良好的前景。它们是一
实体肿瘤检测GEN1基因介绍
该基因编码rad2/着色性干皮病g组核酸酶家族的一个成员，其成员具有n末端和内部着色性干皮病g组核酸酶结构域，然后是螺旋发夹螺旋结构域和无序c末端结构域。该基因编码的蛋白质参与了holliday连接的解析，holliday连接是一种中间的四向结构，在同源重组和双链断裂修复过程中共价连接dna。该蛋白
遗传学大牛Nature－Methods发表新成果－用CRISPR打造DNA条码
生物通报道：细菌一直在与病毒或入侵核酸进行斗争，为此它们演化出了多种防御机制，CRISPR–Cas9适应性免疫系统就是其中之一。规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的组合，可以在引导RNA的指引下，靶标并切割入侵者的遗传物质。2012年研究者们利用这一特点，将CRISPR系统制成
科学家找到受损－DNA－修复“关键”，抗癌新方法有望问世！
德雷塞尔大学和佐治亚理工学院的研究人员发现，Rad52 蛋白质是 DNA 修复的关键所在。最新的研究发表结果发表于《分子细胞》杂志中，在报道中，研究人员解释了 Rad52 蛋白质同源重组的重要功能，这一发现有助于确定治疗癌症的新目标目标。 放疗和化疗可引起 DNA 双链断裂，其中最大的损害就是
受损DNA修复“关键”
德雷塞尔大学和佐治亚理工学院的研究人员发现，Rad52蛋白质是DNA修复的关键所在。最新的研究发表结果发表于《分子细胞》杂志中，在报道中，研究人员解释了Rad52蛋白质同源重组的重要功能，这一发现有助于确定治疗癌症的新目标目标。放疗和化疗可引起DNA双链断裂，其中最大的损害就是DNA的损伤，同源重组
同济大学发现cGAS酶有致癌风险
图片来源于网络 同济大学医学院、同济大学附属肺科医院戈宝学教授，同济大学生命科学与技术学院、同济大学附属第一妇婴保健院毛志勇教授研究团队合作首次系统阐释了cGAS完全独立于DNA识别功能的细胞核内的全新功能，为基于干预cGAS进入细胞核而开发新型抗肿瘤药物提供了理论基础。10月25日，这一重要研究
《自然》：－同济大学发现cGAS酶有致癌风险
同济大学医学院、同济大学附属肺科医院戈宝学教授，同济大学生命科学与技术学院、同济大学附属第一妇婴保健院毛志勇教授研究团队合作首次系统阐释了cGAS完全独立于DNA识别功能的细胞核内的全新功能，为基于干预cGAS进入细胞核而开发新型抗肿瘤药物提供了理论基础。10月25日，这一重要研究成果在线发表于
多能干细胞保持高保真DNA复制和修复的新机制
多能干细胞具有发育的全能性，可在体外分化为各类组织和细胞，颇具应用前景：可作为再生医学中的重要种子细胞，可在药物研究中筛选临床治疗药物，还可在体外模拟发育的过程。由于发育地位特殊，多能干细胞基因组具高度稳态（如小鼠胚胎干细胞的基因组变异率仅为胚胎成纤维细胞的1/100）。然而，多能干细胞在体外长
关于DNA重组的减数分裂重组的介绍
在减数分裂早期出现的四种染色单体中的两种（前期I）彼此配对并且能够相互作用。重组由双链断裂引发。其它类型的DNA损伤也可能引发重组。例如，交联剂如丝裂霉素C引起链间交联可以通过HRR修复，引发重组。 重组产物有两种：染色体侧翼区域被交换的“交叉”（CO）型和染色体侧翼区域未被交换的“非交叉”（
抑制PTEN磷酸化可增强成胶质细胞瘤的放疗敏感性
PTEN (gene of phosphates and tensin homologue deleted on chromosome ten)是肿瘤抑制基因，其编码的具有磷酸酯酶活性的蛋白，是机体维持正常生理功能所必须的因子。作为肿瘤抑制基因，PTEN对受体酪氨酸激酶(receptor tyr
简述DNA的自发性化学变化的类型
①碱基的异构互变 DNA中的4种碱基各自的异构体间都可以自发地相互变化（例如烯醇式与酮式碱基间的互变）,这种变化就会使碱基配对间的氢键改变,可使腺嘌呤能配上胞嘧啶、胸腺嘧啶能配上鸟嘌呤等,如果这些配对发生在DNA复制时,就会造成子代DNA序列与亲代DNA不同的错误性损伤。 ②碱基的脱氨基作用
Nature－Genetics：更年期的早晚由什么来决定
女性更年期出现的早晚，对乳腺癌等疾病风险有着明显的影响，但其内在机制却不为人知。英国剑桥大学等机构的研究人员通过近七万名妇女的分析，发现基因组中有40多个区域与妇女的更年期年龄存在关联。这项成果于周一发表在《Nature Genetics》上。 “我们已经知道，女性何时经历更年期，在一定程度上
近物所用新方法揭示电离辐射对线粒体DNA超螺旋构象影响
中科院近代物理研究所辐射生物医学研究组的科研人员研究发现，电离辐射能够引起显著的线粒体DNA超螺旋构象变化，这对进一步研究电离辐射对线粒体功能的影响具有指导意义。 线粒体DNA是人体细胞中唯一的核外遗传物质，线粒体DNA构象的变化可能通过影响线粒体功能而导致细胞命运的改变。目前
GEN1基因编码功能及结构描述
该基因编码rad2/着色性干皮病g组核酸酶家族的一个成员，其成员具有n末端和内部着色性干皮病g组核酸酶结构域，然后是螺旋发夹螺旋结构域和无序c末端结构域。该基因编码的蛋白质参与了holliday连接的解析，holliday连接是一种中间的四向结构，在同源重组和双链断裂修复过程中共价连接dna。该蛋白
GEN1基因突变与药物因子介绍
该基因编码rad2/着色性干皮病g组核酸酶家族的一个成员，其成员具有n末端和内部着色性干皮病g组核酸酶结构域，然后是螺旋发夹螺旋结构域和无序c末端结构域。该基因编码的蛋白质参与了holliday连接的解析，holliday连接是一种中间的四向结构，在同源重组和双链断裂修复过程中共价连接dna。该蛋白
GEN1基因编码功能及结构描述
该基因编码rad2/着色性干皮病g组核酸酶家族的一个成员，其成员具有n末端和内部着色性干皮病g组核酸酶结构域，然后是螺旋发夹螺旋结构域和无序c末端结构域。该基因编码的蛋白质参与了holliday连接的解析，holliday连接是一种中间的四向结构，在同源重组和双链断裂修复过程中共价连接dna。该蛋白
中科院PLoS－One解析肿瘤细胞端粒保护
中科院近代物理研究所辐射医学研究室与日本国立放射医学研究中心科研人员开展的合作研究发现，肿瘤细胞染色体末端端粒的保护状态直接影响其对重离子辐射的敏感性。 端粒是细胞染色体末端的高度重复序列，对染色体结构起着重要的维持与保护作用。端粒长度的缩短及其结构的异常变化是细胞衰老以及死亡的一个重要诱
常用细胞凋亡检测方法集锦
细胞凋亡的形态学检测1 光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体.贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形
常用细胞凋亡检测方法集锦
细胞凋亡的形态学检测1 光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体.贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形