扫描免疫电镜技术

实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤,扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直接在电镜下观察;另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合,在电子显微镜下观察,由于标准物形成一定的电子密度而指示出相应抗原所在的部位。免疫电镜的应用,使得抗原和抗体定位的研究进入到亚细胞的水平。实验步骤1. 标本处理 1) 细胞悬液:用10ml PBS内含1mg/ml牛血清白蛋白(PBS—BSa )悬浮细胞,离心250g,5min×2。加入PBS—BSA 至105-106细胞/ml,振摇成单细胞悬液。BSA能减低生物标本的非特异性吸附,但注意浓度应适宜,过......阅读全文

扫描免疫电镜技术

实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤,扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集

扫描免疫电镜技术

实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤,扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集

扫描电镜技术

扫描电镜技术 扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描,将产生的二次电子用特制的探测器收集,形成电信号运送到显像管,在荧光屏上显示物体。(细胞、组织)表面的立体构像,可摄制成照片。 扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定,经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜,以增加二波电子数。 电子显微镜下的纤维

免疫电镜技术

近年来,免疫学方法与电镜技术相结合,形成了一种免疫电镜技术(Immunoelec-tronmicroscopy,IEM),使抗原定位达到了亚细胞水平。该技术由以下环节组成:(一) 组织准备 用于免疫电镜检测的组织多种多样,所以各自在组织制备时都具有其特点。一般讲,组织力新鲜并进行无活动力状态处理,例

免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术

实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物,在不改变抗原抗体的免疫反应特异性,亦不降低酶活性条件下,与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的

扫描电镜技术解析

扫描电镜(SEM)已经成为材料表征时所广泛使用的强有力工具。而且因为不同应用中使用的材料尺寸都在不断减小,这在近几年尤其如此。本篇文章中,我们将描述扫描电镜 SEM 的主要工作原理。顾名思义,电子显微镜使用电子成像,就像光学显微镜利用可见光成像。一台成像设备的zui佳分辨率主要取决于介质的波长。由于

扫描电镜技术解析

扫描电镜(SEM)已经成为材料表征时所广泛使用的强有力工具。而且因为不同应用中使用的材料尺寸都在不断减小,这在近几年尤其如此。本篇文章中,我们将描述扫描电镜 SEM 的主要工作原理。顾名思义,电子显微镜使用电子成像,就像光学显微镜利用可见光成像。一台成像设备的zui佳分辨率主要取决于介质的波长。由于

扫描电镜——铸型技术

为了研究空腔脏器特别是血管系统复杂的立体分布,先向腔内注射某种成形物质,待该物硬化后再把组织腐蚀去掉,剩下的成形物即能显示血管系统的立体分布,这种技术称铸型技术。如果是研究血管系统,称为血管铸型。用铸型技术制作的标本,经过镀膜后,就可进行扫描电镜观察。        常用的铸型剂有甲基丙烯酸酯、聚苯

免疫电镜相关技术实验—病毒颗粒免疫电镜技术

病毒是极微小的生物体,用电镜观察时,由于其变形、损伤或杂质的存在,以及标本中病毒的数量有限,只靠其形态特点较难确切辨认。为了提高辨认的准确性,可应用特异性抗体,使其与病毒结合,在电镜下可清晰地辨认特异性抗体及其结合的病毒。这种将免疫学检测方法应用于电镜检查的技术就是免疫电镜技术 (Immunoele

酶免疫电镜技术

(一)  原理 酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物的反应形成不同的电子密度,借助于电子显微镜观察,证明酶的存在,从而对抗原进行定位。(二)材料与试剂1.PBS液  取NaCl 8.5g,Na2HPO40.85g,KH2PO40.54g,加水至1 000ml即可。2.DAB溶液  取5m

免疫细胞电镜技术

免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献,但由于光学分辨率的限制,不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此,Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法,为在细胞超微结构水平研究抗原 抗体反应提供了可能。在此基础上,相继发展了杂交抗

扫描电镜试样制备技术

    试样制备技术在电子显微术中占有重要的地位,它直接关系到电子显微图像的观察效果和对图像的正确解释。如果制备不出适合电镜特定观察条件的试样,即使仪器性能再好也不会得到好的观察效果。   和透射电镜相比,扫描电镜试样制备比较简单。在保持材料原始形状情况下,直接观察和研究试样表面形貌及其它物理效应(

免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术

实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电

免疫电镜相关技术实验

实验方法原理 该方法是用电镜直接观察病毒抗原与相应抗体结合后形成的大分子复合物。实验材料 病毒试剂、试剂盒 抗体仪器、耗材 电子显微镜实验步骤 直接将病毒抗原与对应抗体孵育后上电子显微镜观察即可。具有简单易行,抗原和抗体用量少在该时间内即可得到结果等优点,可用于检出病毒或进行病毒分型,并已用于临床诊

冷冻蚀刻免疫电镜技术

实验原理 冷冻蚀刻法(Freeze Ftching),也称冷冻复型法(Freeze Replica)或冷冻切断(Freeze Fracture),是研究生物膜结构的重要方法之一。其主要步骤首先是将样品在液氮中冷冻,然后放到真空喷镀仪中切断,切断后的切面上有细胞器,其间还有冻成洋的水分。再加热使冰升华

冷冻蚀刻免疫电镜技术

实验概要本文介绍了冷冻蚀刻免疫电镜技术,包括:冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术和断裂—标记免疫电镜技术。实验原理冷冻蚀刻法(Freeze Ftching),也称冷冻复型法(Freeze Replica)或冷冻切断(Freeze Fracture),是研究生物膜结构的重要方法之一。其主要步骤首先是

扫描电镜技术原理及应用

扫描电镜一种新型的多功能的,用途最为广泛的电子光学仪器。数十年来,扫描电镜已广泛地应用在生物学、医学、冶金学等学科的领域中,促进了各有关学科的发展。关键词:扫描电镜;应用1938 年德国的阿登纳制成了第一台扫描电子显微镜,1965 年英国制造出第一台作为商品用的扫描电镜,使扫描电镜进入实用阶段。近

免疫学技术:铁蛋白免疫电镜技术

一、 原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体,再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查,观察到铁蛋白抗体所在的位置,即抗原所在。二、材料与试剂1.马脾铁蛋白2.硫酸铵3.硫酸镉4.双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante  XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将

非标记抗体免疫电镜技术

一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织

断裂—标记免疫电镜技术介绍

此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h,PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA凝胶化,将凝胶切成2mm左右的小块,用30%的甘油—PBS浸透

铁蛋白免疫电镜技术

一、 原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体,再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查,观察到铁蛋白抗体所在的位置,即抗原所在。 二、材料与试剂 1.马脾铁蛋白 2.硫酸铵 3.硫酸镉 4.双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante  XC)以0.30Mol/L pH 9.5

非标记抗体免疫电镜技术

(一)  原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组

铁蛋白免疫电镜技术

(一)  原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体,再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查,观察到铁蛋白抗体所在的位置,即抗原所在。(二)材料与试剂1.马脾铁蛋白2.硫酸铵3.硫酸镉4.双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante  XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐

断裂标记免疫电镜技术(1)

断裂-标记免疫电镜技术此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h,PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA凝胶化,将凝胶切成2mm左右的小块,用3

断裂标记免疫电镜技术(2)

)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸,室温固定2h,系列酒精或丙酮脱水,常规电镜包埋。⑦切半薄片,光镜定位合适的断裂部位,再切超薄切片,铀铅染色,透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术,常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C

免疫铁蛋白电镜技术

1.基本原理 铁蛋白的分子量460kD,为一种含铁(约占23%)的蛋白质。直径10―12nm。目前常用的间接免疫染色技术是应用低分子量的双功能试剂将第二抗体与铁蛋白相连,制备标记抗体。此复合物既保留了抗体的免疫活性,又因铁蛋白含有2000―3000个铁原子的致密铁离子核心,形成四个圆形致密区,所以

透射扫描电镜检测技术服务

透射电子显微镜在材料科学、生物学上应用较多。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,样品的密度、厚度等都会影响到后的成像质量,必须制备更薄的超薄切片,通常为50~100nm。所以用透射电子显微镜观察时的样品需要处理得很薄。常用的方法:超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。对于液体样品

关于车载扫描电镜的技术应用

如今,分析测试要求出数据快速、准确、稳定。但在某些应用场景下(如地质勘察、野外考古、环境监测等),需要将样品送至现场外实验室,等待数天、甚至数月才能获得关键数据,这对实验进度或现场安全应急等产生影响。扫描电镜(SEM)作为微区分析的工具,可以看到微观形貌、成分、结构等特征,是分析测试中必不可少的工具

扫描电镜技术服务|实验技术服务

测序实验流程:扫描电镜技术 扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描,将产生的二次电子用特制的探测器收集,形成电信号运送到显像管,在荧光屏上显示物体。(细胞、组织)表面的立体构像,可摄制成照片。 扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定,经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜,以增加二波电子数。 电子

扫描电镜

扫描电子显微镜(SEM)是1965年以后才迅速发展起来的新型电子仪器。其主要特点可归纳为:①仪器分辨率高;②仪器的放大倍数范围大,一般可达15~180000倍,并在此范围内连续可调;③图像景深大,富有立体感;④样品制备简单,可不破坏样品;⑤在SEM上装上必要的专用附件——能谱仪(EDX),以实现一机