HAT培养基在杂交瘤细胞筛选的应用
1964年Littlefield首先发明了HAT(H-Hypoxanthine次黄嘌呤，A-Aminopterin氨基蝶呤，T--Thymidine 胸腺嘧啶核苷)培养基的选择培养。 HAT培养基是指含有次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质的细胞培养基，说起HAT培养基，我们可能会想到这是用于杂交瘤细胞筛选的常用培养基。是的，首先给大家介绍一下细胞内DNA原料核苷酸的两种主要合成途径： （1）主要合成途径：生物体内嘌呤核苷酸合成，首先由5-磷酸核糖焦磷酸合成次黄嘌呤核苷酸，次黄嘌呤核苷酸合成后，经氨基化即可形成腺嘌呤核苷酸；经氧化和氨基化即可形成鸟嘌呤核苷酸。再来看嘧啶核苷酸的合成，生物体内先先由氨甲酰磷酸和天冬氨酸合成尿嘧啶核苷酸，然后尿嘧啶核苷酸经磷酸化、氨基化就可形成胞嘧啶核苷三磷酸；在核糖核酸还原酶的还原作用下可形成尿嘧啶脱......阅读全文
HAT选择性培养基简介
HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的培养基。HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对￡具有合成DNA原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径和中间合成途径(salvagepa-th■way)。中间合成途径包括:通过HGPRT的催化作用把次黄嘌呤转化
关于hat培养基的基本介绍
缺失这两种酶之一的细胞，在HAT培养基中，应该不能生存，只有发生融合或者其他情况下，才能使细胞重新获得用旁路途径进行DNA合成能力。 HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对￡具有合成DNA原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径（denovopathway）和中间合成途径（s
HAT选择性培养基的概念
HAT（H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin氨基蝶呤，T——Thymidine 胸腺嘧啶核苷）培养基的选择培养。HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。
HAT选择性培养基的基本作用
HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对￡具有合成DNA原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径（denovopathway）和中间合成途径（salvagepathway）。中间合成途径包括：通过HGPRT的催化作用把次黄嘌呤转化成次黄嘌呤核苷－磷酸(IMP)，通过TK的催化把胸腺嘧
HAT培养基在杂交瘤细胞筛选的应用
1964年Littlefield首先发明了HAT(H-Hypoxanthine次黄嘌呤，A-Aminopterin氨基蝶呤，T--Thymidine 胸腺嘧啶核苷)培养基的选择培养。 HAT培养基是指含有次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thym
HAT选择性培养基的用途和合成途径
1964年Littlefield首先发明了HAT（H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin氨基蝶呤，T——Thymidine 胸腺嘧啶核苷）培养基的选择培养。HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。
什么是HAT培养液？
中文名称HAT培养液英文名称HAT medium定 义内含次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）的培养液。在此培养液中，次黄嘌呤-鸟嘌呤核苷磷酸核糖基转移酶（HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）缺陷型细胞不能生长。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞培养与细胞工程（二级学科）
杂交瘤细胞的筛选
杂交瘤细胞的筛选 在细胞融合后，要从上述五种细胞中筛选出杂交瘤细胞，一般使用HAT培养进行筛选，HAT培养基中含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶（T）三种成分。细胞的DNA合成有内源性途径（主要途径）和外源性途径（旁路途径）两种方式。内源性途径就是利用谷氨酰胺或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原
胸腺嘧啶的用途
是合成抗艾滋病药物AZT、DDT及相关药物的关键中间体。上游原料：冰醋酸、醋酸丁酯、甲醇、甲基丙烯酸甲酯、尿素、盐酸、乙醇。也可用化学方法合成。用于药物制造。胸腺嘧啶是脱氧核糖核酸中的碱基之一。可与脱氧核糖结合形成胸腺嘧啶的脱氧核苷，其5-位甲基上的氢为氟取代后的产物称为三氟代胸腺嘧啶脱氧核苷，用做
胸腺嘧啶的产品用途
是合成抗艾滋病药物AZT、DDT及相关药物的关键中间体。上游原料：冰醋酸、醋酸丁酯、甲醇、甲基丙烯酸甲酯、尿素、盐酸、乙醇。也可用化学方法合成。用于药物制造。胸腺嘧啶是脱氧核糖核酸中的碱基之一。可与脱氧核糖结合形成胸腺嘧啶的脱氧核苷，其5-位甲基上的氢为氟取代后的产物称为三氟代胸腺嘧啶脱氧核苷，用做
胸腺嘧啶的产品用途
是合成抗艾滋病药物AZT、DDT及相关药物的关键中间体。上游原料：冰醋酸、醋酸丁酯、甲醇、甲基丙烯酸甲酯、尿素、盐酸、乙醇。也可用化学方法合成。用于药物制造。胸腺嘧啶是脱氧核糖核酸中的碱基之一。可与脱氧核糖结合形成胸腺嘧啶的脱氧核苷，其5-位甲基上的氢为氟取代后的产物称为三氟代胸腺嘧啶脱氧核苷，用做
PNAS：科学家首次解开人HAT蛋白的结构
西班牙巴塞罗纳生物医学研究所(IRB)的Heterogenic and Multigenic Diseases 实验室主任Manuel Palacín，是世界上研究HATs(heteromeric amino acid transporters，杂聚体氨基酸转运蛋白)的专家之一。 在人
杂交瘤细胞的选择性培养是什么？
将经过融合的细胞置于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷的HAT培养基中。 1.脾细胞：在一般培养基中不能生长繁殖。 2.骨髓瘤细胞：采用的小鼠骨髓瘤细胞都是HGPRT或TK代谢缺陷型细胞，在HAT培养基中不能增殖。 3.杂交瘤细胞：骨髓瘤细胞与脾细胞融合，获得HGPRT，可以利用次黄嘌呤
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加
方案27.11－单克隆抗体的制备
方案27.11 单克隆抗体的制备 实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛
单克隆抗体的制备
实验方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加以扩增、冷冻和
单克隆抗体技术的基本流程
单克隆抗体技术的流程为:脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合;加入HAT选择培养基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断,而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA,从而死亡;未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡;融合细胞因从脾细胞获得HGPRT,故
关于细胞融合实验的主要试剂的介绍
（1）胎牛血清或小牛血清 （2）培养基：细胞融合常用的培养液有DMEM、RPMI 1640 及无血清培养基等。DMEM有高糖（4500mg／L）及低糖（1000mg／L）之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖 （3）HAT及HT培养液：HAT、HT（sigma）以五十分之一的
细胞融合实验的主要试剂介绍
（1）胎牛血清或小牛血清 （2）培养基：细胞融合常用的培养液有DMEM、RPMI 1640 及无血清培养基等。DMEM有高糖（4500mg／L）及低糖（1000mg／L）之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖 （3）HAT及HT培养液：HAT、HT（sigma）以五十分之一的
杂交瘤细胞(hybridoma)的制备
1. 骨髓瘤细胞的准备 选择生长状态良好的细胞，浑圆透亮，大小均一，边缘清晰，排列整齐，呈半致密分布。弃上清，以不完全培养基洗涤一次后，用10mL不完全培养基将骨髓瘤细胞（SP2/0）轻轻吹下。 2. 脾淋巴细胞的准备 a、取加强免疫后3天的小鼠，摘除眼球采血供分离阳性血清。 b、颈脱位将小鼠致死，
杂交瘤细胞的制备
1. 骨髓瘤细胞的准备选择生长状态良好的细胞，浑圆透亮，大小均一，边缘清晰，排列整齐，呈半致密分布。弃上清，以不完全培养基洗涤一次后，用10mL不完全培养基将骨髓瘤细胞（SP2/0）轻轻吹下。2. 脾淋巴细胞的准备a、取加强免疫后3天的小鼠，摘除眼球采血供分离阳性血清。b、颈脱位将小鼠致死，用75
杂交瘤细胞（hybridoma）的制备
1. 骨髓瘤细胞的准备选择生长状态良好的细胞，浑圆透亮，大小均一，边缘清晰，排列整齐，呈半致密分布。弃上清，以不完全培养基洗涤一次后，用10mL不完全培养基将骨髓瘤细胞（SP2/0）轻轻吹下。2. 脾淋巴细胞的准备a、取加强免疫后3天的小鼠，摘除眼球采血供分离阳性血清。b、颈脱位将小鼠致死，用75
简述单克隆抗体技术的基本原理
哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶( HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇
单克隆抗体技术的基本原理
哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶( HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG
单克隆抗体技术的原理
哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(A)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶( HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇
杂交瘤技术基本程序与方法4
4）饲养细胞（Feeder cells）的制备 在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖，这种被加入的活细胞称为饲养细胞。饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了，一般认为它们可能释放非种属特异性的生长
脾细胞和骨髓瘤细胞的融合
1、脾细胞和骨髓瘤细胞一般按2：1-5：1的密度混合，有的报道可以到10：1，不过总体来说我们常选3：1-5：1，记住，原则是脾细胞的数量比骨髓瘤的多。2、融合前，一般用HAT培养基做饲养细胞铺板，这是融合前的准备工作，因为饲养细胞分泌的某些细胞因子有助与融合的杂交瘤细胞生长，并且提供一定的细胞密度
简述杂交瘤技术选择培养基的应用
细胞融合是一个随机的物理学过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬液中，经融合后细胞将以多种形式出现。如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中仅存活5～7d，无需特别筛选；细胞的多聚体形式
杂交瘤细胞系的产生与筛选
脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶