琼脂糖凝胶电泳准备手册
准备干净的配胶板和电泳槽注意 DNA 酶污染的仪器可能会降解 DNA ,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象选择电泳方法 一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个 bp 的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大 DNA 链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的 DNA 链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。正确选择凝胶浓度 对于琼脂糖凝胶电泳,浓度通常在 0.5 ~ 2 %之间,低浓度的用来进行大片段核酸的电泳,高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎,小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的 DNA 带不易分辨,造成条带缺失现象。适合的电泳缓冲液 常用的缓冲液有 TAE 和 TBE ,而 TBE 比 TAE 有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低, PH 值上升,缓冲性能下降,......阅读全文
酵母准备
Yeast DNA PreparationYeast Genomic Preparation (Gottschling Lab)Rapid method for yeast genomic DNA isolation Yeast DNA Preparation (rapid glass bead
6850A用户手册
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检验标本采集手册(三)
(二) 尿液标本 根据采集时间可分为清晨空腹尿、随机尿、计时尿(2h、3h、12h、24h等)、午后尿、餐后尿、症状典型时尿等。(1) 晨尿为住院病人留尿的主要方法,早晨起床后收集第一次尿,可用尿常规检验。(2) 随机尿多为门诊就诊病人的留尿检验方法。(3) 餐后尿为收集进餐后2h尿,主要用于
检验标本采集手册(一)
一、病人准备 1.病人状态 一般需在安静状态下采集标本,因运动能影响许多项目的测定结果。活动的影响可分暂时和持续性两类。暂时性影响如使血浆脂肪酸含量减少;丙氨酸、乳酸含量增高。持续性影响,如激烈运动后使CK、LDH、ALT、AST和GLU等的测定值升高,有些恢复较慢,如ALT在停止运动1h后测定
预防地震安全手册
四川汶川5月12日发生7.8级强烈地震,截止5月16日16时,遇难人数已达22,069人人,而且,灾区还断断续续发生了2350多次余震。全民提高抗灾意识非常必要! 汶川地震 救助灾民常识 发现生命先送水,未能送水快补液; 清理口鼻头偏侧,呼吸通畅是原则; 臀部肩膀往外拖,不可硬拽伤关节;
AB质谱仪简明维护手册
AB公司仪器简明维护手册,一些维护方面最基础的东西,觉得挺实用的。 目录 死机处理的9个步骤 机器主要电路模块图 如何打开诊断软件 如何确定喷雾口与ORIFICE的位置 维护计划 机械泵维护 堵的判断及处理方法 空气过滤网的清洗 如何清洗Curtain Pl
检验标本采集手册(二)
二、标本采集 标本采集是直接关系检验结果的基本要素,如果标本采集不当,即使最好的仪器设备也难以弥补在采集标本时引入的误差和错误。现将各种标本的采集要点分述如下: (一) 血液标本 采血管分普通管、抗凝管和促凝管三类。常用抗凝剂有草酸钾、草酸钠、枸橼酸钠、EDTA-K2或EDTA-Na2、肝素、
检验标本采集手册(四)
三、标本保存和运送标本保存和运送是检验质量保证的重要环节之一。由于采集的标本受各种因素的影响,可能使检验结果受或大或小的误差,因此必须正确掌握标本保存和运送。(1) 采样后须立即送检的常规项目:血氨、血沉、血气分析、酸性磷酸酶、乳酸以及各种细菌培养,特别是厌氧菌培养。(2) 采样后0.5h内送检的常
Northern杂交试验指导手册
Northern杂交试验指导手册DIG标记的Northern杂交试验指导一、 RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液:贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理), 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入25
蛋白电泳技术手册
在蛋白电泳过程中,配胶麻烦、电泳耗时长、需要反复调试凝胶浓度是我们面临的三个棘手问题。EZ Protein系列蛋白电泳产品的克服了上述问题。2-5分钟配胶,浓缩胶、分离胶一次成型;25分钟恒压完成电泳;10-250KD蛋白质一块胶即可分离,免去了反复调整胶浓度的麻烦。独有配方,本产品不添加T
PCR扩增产物的电泳分析1
凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。一、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度,把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。低熔点琼脂糖熔点为62~65℃,溶解后在 37℃下维持液体状态约
几种电泳用胶的区别
普通DNA的分离一般采用0.8%~1%的琼脂糖凝胶电泳测序胶有两种类型以前的310类型的测序仪用的是银染的聚丙烯酰胺凝胶电泳胶浓度一般在6~8%3130或3730之类的新型测序仪用的是毛吸管的分离胶如POP-7,POP-6,POP-4之类这种胶相当贵,自己没有配方是配不起来的都是买现成的胶south
如何分析凝胶电泳dna图三条带
凝胶电泳分析DNA条带的方法包括多个步骤,每一步都对最终结果的准确性有决定性影响。下面将详细解释如何从制备样品到分析电泳结果的整个过程:琼脂糖凝胶电泳原理电荷和分子筛效应:在碱性缓冲液中,DNA分子带有负电荷,在电场的作用下向正极移动。琼脂糖凝胶由于其分子结构形成了微小的孔道,这些孔道允许小分子通过
电泳仪分类
根据电泳仪原理、电泳仪功能、电泳仪的使用方法、电泳仪的用途不同可以为: 琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维薄膜电泳、高效毛细管电泳、琼脂糖电泳、SDS-PAGE凝胶电泳、蛋白质电泳、血清蛋白电泳、dna电泳、血红蛋白电泳、蛋白质双向电泳、免疫电泳、等电聚焦电泳、
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢? 参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200ng效果好,在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝
电泳技术:生物化学实验常用技术2
琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的凝胶电泳,其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,直接参与带电颗粒的分离过程,在电泳中,物质分子通过空隙时会受到阻力,大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大,因此在凝胶电泳中,带电
凝胶电泳的主要方法
(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
凝胶电泳的分类
(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
淀粉凝胶电泳的基本方法分类
(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
菌落-PCR-分析克隆的重组体实验
试剂、试剂盒 溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液 热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材 无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂(Stratagene)Tween20,10%
菌落-PCR-分析克隆的重组体实验
菌落 PCR 分析克隆的重组体实验试剂、试剂盒溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂(Stratagen
直链淀粉树脂亲和层析纯化麦芽糖结合融合蛋白实验
亲和层析方法几乎可以将麦芽糖结合融合蛋白纯化成单组分。麦芽糖结合蛋自(MBP) 是一个由大肠杆菌 malE 基因编码的周质蛋白,是细菌麦芽糖转运系统的成员之一。MBP 能结合微摩尔水平的麦芽糖和麦芽糊精,因此可用交联了麦芽糖的琼脂糖进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J
DNA重组技术(Recombinant-DNA)实验原理、用品和步骤(二)
【实验步骤】 1.PCR产物纯化 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,应用凝胶回收试剂盒回收纯化目的DNA片段。 2.目的DNA片段连接至T/A克隆载体 即重组DNA分子的构建 反应体系及条件如下: 3.转化 3.1 将感受态细胞置冰中融解。 3.2 将60μl感受态细胞移至无菌
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇 谷胱甘肽洗脱缓冲液 磷酸
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液TritonX-100DNase溶菌酶RNase凝血酶、肠激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 SorvallSS-34 转头或相当的转头谷胱甘肽-琼脂糖树脂皮下注射针头实验步骤
凋亡细胞核DNA片段检测方法进展
细胞凋亡(apoptosis)又称细胞凋谢或称程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD),是有别于细胞坏死而受基因控制的一种主动性细胞自杀过程。对细胞凋亡的研究已成为当今生物学领域的热点之一。开展对细胞凋亡的研究,首先要解决的是方法学问题。根据凋亡细胞的生化特征检测组织或培
DNA指纹的操作方法
从生物样品中提取DNA(DNA一般都有部分的降解),可运用PCR技术扩增出高可变位点(如VNTR系统,串联重复的小卫星DNA等)或者完整的基因组DNA,然后将扩增出的用DNA酶切成DNA片断,经琼脂糖凝胶电泳,按分子量大小分离后,转移至尼龙滤膜上,然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基
DNA指纹的操作方法
从生物样品中提取DNA(DNA一般都有部分的降解),可运用PCR技术扩增出高可变位点(如VNTR系统,串联重复的小卫星DNA等)或者完整的基因组DNA,然后将扩增出的用DNA酶切成DNA片断,经琼脂糖凝胶电泳,按分子量大小分离后,转移至尼龙滤膜上,然后将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基序列
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢?参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200ng效果好,在此范围内呈线性。把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大